專(zhuān)利名稱(chēng)：新型吡咯并咔唑衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新型吡咯并咔唑衍生物、其制備、含該衍生物的藥物組合物及其用于治療惡性疾病的用途。
更具體地說(shuō)，本發(fā)明的一個(gè)方面涉及式I的吡咯并咔唑衍生物 其中R1是氫或低級(jí)烷基；R2是雜芳基；以及R3和R4獨(dú)立地是氫或低級(jí)烷基；以及它的藥用鹽。
在一個(gè)優(yōu)選方面，本發(fā)明涉及某種式I的化合物，特別包括R1是氫且R2是苯硫基的化合物。
在另一方面，本發(fā)明涉及一種含治療有效量的式I化合物或其藥用鹽并與至少一種藥用賦形劑混合的藥物組合物。
在另一方面中，本發(fā)明涉及一種治療惡性疾病、特別是哺乳動(dòng)物、尤其是人的小細(xì)胞肺癌、結(jié)腸癌和腎和前列腺腫瘤的方法，即給需要這種治療的哺乳動(dòng)物服用一種治療有效量的式I化合物或其藥用鹽。
術(shù)語(yǔ)“低級(jí)烷基”意指單基支鏈或非支鏈的C1—C6飽和的烴鏈，如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、正戊基和正己基。
術(shù)語(yǔ)“雜芳基”意指具有5或6個(gè)原子的單環(huán)的單價(jià)不飽和芳族碳環(huán)基(其中一個(gè)原子是選自N，O或S的雜原子)，例如苯硫基、呋喃基、吡咯基和吡啶基，它們可以分別被羥基、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、氯、氟、三氟甲基和/或氰基任意選擇地一、二—或三—取代。
“任意選擇”或“任意選擇地”意指后面介紹的事件或條件可能發(fā)生，也可能不發(fā)生，且說(shuō)明書(shū)包括所述事件或事情發(fā)生的情況和不發(fā)生的情況。
“藥用鹽”可以是由無(wú)機(jī)或有機(jī)酸得到的任何鹽。術(shù)語(yǔ)“藥用陰離子”意指這種酸加成鹽的陰離子。不應(yīng)選擇生理或其它地方不合需要的鹽和/或陰離子。
陰離子由無(wú)機(jī)酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸(提供硫酸鹽和硫酸氫鹽)、硝酸、磷酸，等等和有機(jī)酸如乙酸、丙酸、乙二酸、丙酮酸、草酸、蘋(píng)果酸、檸檬酸、琥珀酸、馬來(lái)酸、富馬酸、灑石酸、丙二酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、水楊酸、對(duì)甲苯磺酸等等得到。
術(shù)語(yǔ)“治療”意指任何對(duì)哺乳動(dòng)物病癥的治療，包括(i)防止，即，使疾病的臨床癥狀不再發(fā)展；(ii)抑制疾病，即，阻止臨床癥狀的發(fā)展；和/或(iii)緩解疾病，即，使臨床癥狀消退。
術(shù)語(yǔ)“有效量”意指劑量足以提供治療正在治的疾病。這將取決于患者、疾病種類(lèi)和治療所要達(dá)到的效果。
式I化合物按下述命名和編號(hào) 例如，其中R1是氫，R2是3—苯硫基，R3是氫且R4是甲基的式I化合物命名為1，3—二氧代—6—(3—甲基氨丙基)—1，2，3，5—四氫—4—(苯硫—3—基)—吡咯并〔3，4—c〕咔唑。
其它例子如下所示
它們分別命名為1.1，3—二氧代—6—(3—乙基氨丙基)—1，2，3，6—四氫—4—(苯硫—3—基)—吡咯并〔3，4—c〕咔唑。
2.1，3—二氧代—8—甲基—6—(3—甲基氨丙基)—1，2，3，6—四氫—4—(苯硫—2—基)—吡咯并〔3，4—c〕咔唑。
3.1，3—二氧代—6—(3—甲基氨丙基)—1，2，3，6—四氫—4—(呋喃—3—基)—吡咯并〔3，4—c〕咔唑。
4.1，3—二氧代—6—(3—(二甲氨基)丙基)—1，2，3，6—四氫—4—(吡咯—3—基)—吡咯并〔3，4—c〕咔唑。
術(shù)語(yǔ)“溶劑”、“惰性有機(jī)溶劑”或“惰性溶劑意指與此有關(guān)的反應(yīng)條件下為惰性的溶劑，例如有苯、甲苯、乙腈、四氫呋喃(“THF”)、二甲基甲酰胺(“DMF”)、氯仿、二氯甲烷、乙醚、甲醇、吡啶，等等。除非另外說(shuō)明，否則用于本發(fā)明的反應(yīng)的溶劑是惰性有機(jī)溶劑。
術(shù)語(yǔ)“q.s.”意指加入足以實(shí)現(xiàn)規(guī)定作用的量，例如使溶液達(dá)到所需體積(即100％)。
除非另外說(shuō)明，這里介紹的反應(yīng)是在大氣壓下5℃—100℃進(jìn)行的(優(yōu)選10℃—50℃；最佳于室溫，如20℃)。此外，除非另外注明，反應(yīng)時(shí)間和條件為近似的，例如在約大氣壓、約5℃—約100℃(優(yōu)選約10℃—約50℃，最佳約20℃)反應(yīng)進(jìn)行約1—約10小時(shí)(優(yōu)選約5小時(shí))。在實(shí)施例中給出的參數(shù)是特定的，不是近似的。
如果需要，通過(guò)任何合適的分離和純化步驟如過(guò)濾、萃取、結(jié)晶、柱色譜法、薄層色譜法或厚層色譜法或這些方法的組合來(lái)進(jìn)行分離和純化這里介紹的化合物和中間體。參考以下實(shí)施例可獲知合適的分離和離析方法說(shuō)明。不過(guò)，當(dāng)然也可以使用其它等同的分離或離析方法。
式I化合物可遵照參考反應(yīng)流程1介紹的方法制備。其中所用的取代基如R1，R2，R3和R4具有與本發(fā)明綜述中介紹的相同定義，除非另外注明。
式I任意選擇地取代的N，N—二(低級(jí)烷基)氨基甲基吲哚是市售的，或通過(guò)本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員使用通用合成方法很容易地制備。例如，N，N—二甲氨基甲基吲哚可從Aldrich Chemical Company，Milnaudee.WI。
反應(yīng)流程1 其中R是低級(jí)烷基 Y是氨基保護(hù)基；
如反應(yīng)流程1，步驟1中指出，式I任意選擇地取代的N，N—二(低級(jí)烷基)氨基甲基吲哚按照Canadion J.Chem.，第51卷，第792頁(yè)(1973)公開(kāi)的方法轉(zhuǎn)化為式2任意選擇地取代的磷鹽。
將式I化合物、優(yōu)選N，N—二甲氨基甲基吲哚溶于質(zhì)子溶劑、優(yōu)選甲醇中，并于10℃—50℃(優(yōu)選25℃)與過(guò)量的甲基碘反應(yīng)1—10小時(shí)(優(yōu)選3小時(shí))。然后，將約1摩爾當(dāng)量的溶于極性溶劑(優(yōu)選二甲基甲酰胺)中的三苯膦加到產(chǎn)物中，并將混合物在100—150℃、優(yōu)選于回流溫度保持6—24小時(shí)、優(yōu)選16小時(shí)。當(dāng)反應(yīng)基本完成時(shí)，分離式2任意選擇取代的磷鹽，并用傳統(tǒng)方法、優(yōu)選結(jié)晶法純化。
如反應(yīng)流程1，步驟2中指出，在堿存在下，式2任意選擇取代的磷鹽與式R2CHO的雜芳醛反應(yīng)，得到式3的乙烯基吲哚。
式2任意選擇取代的磷鹽溶于極性質(zhì)子惰性溶劑(優(yōu)選DMSO)中，在位阻堿(優(yōu)選1，5—二氮雜雙環(huán)〔4.3.0〕壬—5—烯或1，8—二氮雜雙環(huán)〔5.4.0〕十一碳—7—烯)存在下與式R2CHO的醛反應(yīng)。反應(yīng)于20℃—100℃(優(yōu)選80℃)進(jìn)行約2小時(shí)，然后于20℃攪拌6—48小時(shí)(優(yōu)選約16小時(shí))。當(dāng)反應(yīng)基本完成時(shí)，分離式3的乙烯基吲哚，并用傳統(tǒng)方法、優(yōu)選硅膠色譜法或結(jié)晶法純化。
如反應(yīng)流程1，步驟3中指出，式3的乙烯基吲哚與1—碘—3—(叔丁基)二苯基甲硅烷基氧丙烷反應(yīng)并脫保護(hù)，得到式4的N—羥丙基乙烯基吲哚。
將式3的乙烯基吲哚溶于極性質(zhì)子惰性溶劑(優(yōu)選DMF或DMSO)中并于0℃—50℃(優(yōu)選25℃)用堿金屬氫化物如氫化鉀或氫化鈉(優(yōu)選氫化鉀)處理。反應(yīng)5分鐘—3小時(shí)(優(yōu)選15分鐘)后，加入1—碘—3—(叔丁基)二苯基甲硅烷基氧丙烷，反應(yīng)于同樣溫度攪拌約1—24小時(shí)(優(yōu)選約16小時(shí))。當(dāng)反應(yīng)基本完成時(shí)，分離甲硅烷基保護(hù)的化合物并用傳統(tǒng)方法、優(yōu)選硅膠色譜法純化。通過(guò)在四氫呋喃或二甲氧基乙烷中于20—30℃用氟化四丁銨或吡啶—?dú)浞崽幚?—12小時(shí)(優(yōu)選2小時(shí))來(lái)脫除甲硅烷基。式4的N—羥丙基乙烯基吲哚最好通過(guò)硅膠色譜法純化。
如反應(yīng)流程1，步驟4指出，式4化合物的羥基轉(zhuǎn)化為二(低級(jí)烷基)氨基，得到其中R3和R4是低級(jí)烷基的式5化合物。
式4的醇溶于二氯甲烷或氯仿(優(yōu)選二氧甲烷)并于-10℃—20℃(優(yōu)選0℃)用受阻堿(如2，6—二甲基吡啶或2，4，6—可力丁，優(yōu)選2，6—二甲基吡啶)處理，再用二氟甲烷磺酸酐處理15分鐘至1小時(shí)(優(yōu)選30分鐘)。然后，在0℃—40℃(優(yōu)選25℃)使產(chǎn)物與過(guò)量的式R3R4NH胺(其中R3和R4是低級(jí)烷基)反應(yīng)約3小時(shí)，然后再于約0℃反應(yīng)6—24小時(shí)(優(yōu)選2小時(shí))。當(dāng)反應(yīng)基本完成時(shí)，離析式5的胺并用傳統(tǒng)方法、優(yōu)選硅膠色譜法純化或直接在步驟5中使用。
如反應(yīng)流程1，步驟4a指出，式4化合物(其中R3和R4的至少一個(gè)是氫)的羥基轉(zhuǎn)化為保護(hù)的氨基，得到5a化合物。
式4醇溶于二氯甲烷或氯仿(優(yōu)選二甲氯烷)，并于-10℃—20℃(優(yōu)選0℃)，用受阻硬(如，2，6—二甲基吡啶或2，4，6—可力丁，優(yōu)選2，6—二甲基吡啶)、再用三氟甲磺酸酐處理15分鐘—1小時(shí)(優(yōu)選30分鐘。然后，于0—40℃(優(yōu)選25℃)，使產(chǎn)物與過(guò)量的式R3R4NH胺(其中R3和R4中的至少一個(gè)是氫)反應(yīng)約3小時(shí)，再于約0℃反應(yīng)6—24小時(shí)(優(yōu)選12小時(shí))。當(dāng)反應(yīng)基本完成時(shí)，離析乙烯基胺并且傳統(tǒng)方法純化、優(yōu)選硅膠色譜法純化，或在后面的反應(yīng)中直接使用。
所得中間體胺是伯胺或仲胺(即，其中R3和R4中的至少一個(gè)是氫)，它通過(guò)在叔胺堿(優(yōu)選吡啶)中溶解并于約25℃與三氟乙酸酐反應(yīng)5分鐘—4小時(shí)(優(yōu)選30分鐘)而受到保護(hù)。當(dāng)反應(yīng)基本完成時(shí)，離析式5a的乙烯基三氟乙酰氨基化合物，并用傳統(tǒng)方法，優(yōu)選硅膠色譜法純化。
另外，其中R3和R4中至少一個(gè)為氫的中間體胺也可以通過(guò)在叔胺堿(優(yōu)選三乙胺)存在下溶于惰性溶劑中并與二碳酸二叔丁酯反應(yīng)形成叔丁氧基氨基甲酸酯衍生物而得到保護(hù)。
如反應(yīng)流程1，步驟5中指出，式5的乙烯基胺或保護(hù)的乙烯基胺，如式5a的乙烯基三氟乙酰氨基化合物通過(guò)與馬來(lái)酰亞胺反應(yīng)轉(zhuǎn)化為式I化合物。
式5或5a的乙烯基胺或保護(hù)的乙烯基胺溶于芳烴(優(yōu)選甲苯)并與2—3摩爾當(dāng)量(優(yōu)選2摩爾當(dāng)量)馬來(lái)酰亞胺一起回流6—24小時(shí)(優(yōu)選16小時(shí))。當(dāng)反應(yīng)基本完成時(shí)，離析Diels—Alder加合物并優(yōu)選用硅膠色譜法純化。這種加合物溶于惰性溶劑(如苯，甲苯，二氯甲烷，優(yōu)選苯)中并用2—3摩爾當(dāng)量(優(yōu)選2摩爾當(dāng)量)二氯二氰基苯醌于20—50℃(優(yōu)選25℃)處理15分鐘—3小時(shí)(優(yōu)選30分鐘)。當(dāng)反應(yīng)基本完成時(shí)，用傳統(tǒng)方法離析所得咔唑。如果起始乙烯基胺具有式5a結(jié)構(gòu)，則脫除保護(hù)基Y。保護(hù)基的脫除可通過(guò)公知方法進(jìn)行。如果例如存在三氟乙酸酯保護(hù)基的話(huà)，在質(zhì)子溶劑(如甲醇，乙醇，或其混合物)與四氫呋喃的混合物中，用無(wú)機(jī)堿(氫氧化鈉，氫氧化鉀等等，優(yōu)選氫氧化鈉)處理咔唑約15分鐘(于約25℃)，以便使三氟乙酸酯保護(hù)基裂鍵。另外，如果用t—BOC基保護(hù)胺的話(huà)，則用酸處理脫除保護(hù)基。離析所得式I的吡咯并咔唑，并優(yōu)選用硅膠色譜法純化。
式I化合物可轉(zhuǎn)化成相應(yīng)的酸加成鹽。轉(zhuǎn)化是用化學(xué)計(jì)量量的合適的酸如鹽酸(如，3摩爾當(dāng)量成三鹽酸鹽)處理來(lái)進(jìn)行。典型地，將游離堿溶于極性有機(jī)溶劑甲醇或乙醇中，并將酸加入水、甲醇或乙醇中。溫度保持在0℃—50℃。相應(yīng)的鹽自發(fā)地沉淀，也可從有少量的極性溶劑的溶液中得到。
通過(guò)用過(guò)量的合適的堿如氨水或碳酸氫鈉，一般在含水溶液中及0℃—50℃處理，可將式I化合物的酸加成鹽分解成相應(yīng)的游離堿。通過(guò)傳統(tǒng)方法如用有機(jī)溶劑萃取離析游離堿形式。
優(yōu)選其中R1是氫且R2是3—苯硫基的式I化合物。還優(yōu)選其中R3是氫且R4是低級(jí)烷基、更優(yōu)選甲基的化合物。進(jìn)一步優(yōu)選結(jié)合了上述特性的化合物。最佳是1，3—二氧代—6—(3—甲基氨丙基)—1，2，3，6—四氫—4—(苯硫—3—基)—吡咯并〔3，4—c〕咔唑化合物。
本發(fā)明化合物是蛋白激酶C抑制劑，用作化學(xué)療法藥劑，治療哺乳動(dòng)物、特別是人的各種惡性病癥，包括小細(xì)胞肺癌、結(jié)腸癌、相當(dāng)于MCS7、MDA—MB—435和MDA—N細(xì)胞系的胸腫瘤和PKC過(guò)快速(overexpressing)腫瘤，如相應(yīng)的CHO/PKC—ε的腫瘤。本發(fā)明的不同化合物與其它化合物相比，對(duì)某些腫瘤顯示了更高的活性，這可通過(guò)通用方法測(cè)定。
蛋白激酶C抑制的體外活性，是通過(guò)測(cè)定來(lái)自γ—32P ATP的32P結(jié)合入合成的肽基質(zhì)的情況用數(shù)量表示。
化學(xué)治療藥劑、特別是用于治療惡性疾病的藥劑的體內(nèi)活性，是通過(guò)腫瘤抑制試驗(yàn)測(cè)定的，例如參見(jiàn)Maneckjee等人在Proc.Natl.Acad.Sci.USA，第89卷，1169—1173(1992年2月)介紹的方法。例如使用HT—29結(jié)腸癌細(xì)胞、SCLCH82細(xì)胞、CHO/PKC—β和CHO/PKC—ε細(xì)胞進(jìn)行不同分析。
以治療有效劑量如足以提供治療前述病癥的劑量服用式1化合物。本發(fā)明的化合物或其藥用鹽的治療可借助于用于類(lèi)似應(yīng)用的藥劑的任何可接受的給藥方式。
對(duì)于本發(fā)明化合物來(lái)說(shuō)，盡管人體劑量水平還必須要最佳化，但日劑量為約0.1—20.0mg/kg體重、優(yōu)選約0.5—10.0mg/kg體重、最佳約1.0—5.0mg/kg體重。因此，對(duì)于70kg人的給藥來(lái)說(shuō)，劑量范圍將是約7.0—1,400mg/天，優(yōu)選約35.0—700mg/天，最佳約70—350mg/gd?；钚曰衔锏慕o藥量當(dāng)然取決于要治療的病癥和狀態(tài)、損害的嚴(yán)重性、給藥的方式和時(shí)間安排以及藥劑師的判斷力。
在使用本發(fā)明的化合物治療上述疾病中，可以采用任何藥用給藥方式。式I的化合物既可單獨(dú)給藥，也可與其它藥用賦形劑結(jié)合給藥，包括固體、半固體、液體或氣溶膠劑量形式在內(nèi)，如片劑、膠囊、粉末、液體、懸浮液、栓劑、氣溶膠等等。式I化合物也可以緩釋或控制釋放劑量形式給藥，包括積存(depot)注射、滲透泵、丸劑、透皮(包括電遷移)補(bǔ)片，等等，用于以預(yù)定速率將化合物延時(shí)給藥，優(yōu)選以精確劑量的一次給藥適合的單位劑量形式給藥。組合物一般包括一種傳統(tǒng)的藥用載體或賦形劑和一種式I化合物或其藥用鹽。另外，這些組合物可包括其它醫(yī)藥劑、藥物、載體、助劑等等，例如多藥抗性的逆轉(zhuǎn)劑。
一般來(lái)說(shuō)，取決于給藥的目的方式，藥物組合物將含有約0.1％—90％、優(yōu)選約0.5％—50％(重量)的式I化合物或鹽，其余是合適的藥物賦形劑，載體，等等。
上述詳細(xì)介紹的病癥的一種優(yōu)選給藥方式是口服，采用按照損害程度可調(diào)節(jié)的方便的日量規(guī)定。對(duì)于這種口服給藥，通過(guò)結(jié)合任何通常使用的賦型劑和山梨醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、滑石、纖維素、Crosscarmellose鈉、葡萄糖、明膠、蔗糖、碳酸鎂，等等形成無(wú)毒的藥物組合物。這種組合物的形式呈溶液、懸浮液、片劑可分散片劑、丸劑、膠囊、粉末、緩釋配方等等。
組合物最好呈丸劑或片劑形式，因此組合物與活性成分一起含有稀釋劑，如乳糖、蔗糖、磷酸二鈣等等；潤(rùn)滑劑，如硬脂酸鎂等等；以及粘合劑，如淀粉、阿拉伯膠、聚乙烯基吡咯烷、明膠、纖維素以及它們的衍生物，等等。
舉例來(lái)說(shuō)，液體藥物給藥的組合物可通過(guò)將上述定義的活性化合物和任選的藥物助劑在載體如水、鹽水、葡萄糖水溶液、甘油、二醇、乙醇等等中溶解、分散等等形成溶液或懸浮液而制備。需要的話(huà)，待給藥的藥物組合物還可含有微量的無(wú)毒輔助物質(zhì)，如濕潤(rùn)劑、乳化劑或增溶劑、pH緩沖劑等等，例如乙酸鈉、檸檬酸鈉、環(huán)糊精衍生物、單月桂酸山梨糖、乙酸三乙醇胺、油酸三乙醇胺，等等。制備這類(lèi)劑型的實(shí)際方法是已知的，或?qū)楸绢I(lǐng)域?qū)I(yè)人員所理解；例如，參見(jiàn)Remington＇s Pharmaceutical Sciences，Mack Publising Compa-ny，Easton，Phennsylvania，15th Edition，1975。待給藥的組合物或配方終將含有一定量的活性化合物，該量能有效地減緩要治療的主題癥狀。
可以制備含0.005^—95％活性成分、余量為無(wú)毒載體的劑型或組合物。
對(duì)于口服給藥，通過(guò)摻入任何常用的賦形劑如藥品級(jí)山梨醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、滑石、纖維素衍生物、Crosscarmellossse鈉、葡萄糖、蔗糖、碳酸鎂、糖精鈉、滑石等等制成藥用無(wú)毒組合物。這類(lèi)組合物呈溶液、懸浮液，片劑，膠囊、粉末、緩釋配方等等。這類(lèi)組合物可含有0.01—95％活性賦型劑、優(yōu)選0.1—50％。
對(duì)于固體劑型，在例如碳酸亞丙酯、植物油或三甘油酯中的溶液或懸浮液優(yōu)選封裝在明膠膠囊中。這種二酯溶液及其制備和包封在美國(guó)專(zhuān)利4,328,245；4,409,239；和4,410,545中有介紹。對(duì)于液體劑型，例如在聚乙二醇中的溶液可以用足夠量的藥用液體載體如水稀釋?zhuān)砸子诮o藥測(cè)定。
另外，通過(guò)將活性化合物或鹽溶解或分散在植物油、二醇、三甘油酯、丙二醇酯(如碳酸亞丙酯)等等中，并將這些溶液或懸浮液包封在硬和軟明膠膠囊壁內(nèi)可制備液體或半固體口服配方。
其它可以使用的配方有美國(guó)專(zhuān)利Re，28,819和4,358,603提出的配方。
非腸胃給藥一般是以注射，即皮下、肌內(nèi)或靜脈內(nèi)注射為特征。注射藥物以傳統(tǒng)形式制備，既可以作為液體溶液或懸浮液、在注射前適用于液體溶液或懸浮液的固體形式，也可以作為乳液、合適的賦形劑的例子是水、鹽水、葡萄糖、甘油、乙醇等等。另外，如需要可含有微量無(wú)毒輔助物質(zhì)，如濕潤(rùn)劑或乳化劑，pH緩沖劑，增溶劑等等，例如乙酸鈉、單月桂酸脫水山梨糖醇、油酸三乙醇胺、環(huán)糊精等等。近來(lái)推出的非腸胃給藥的手段使用了植入緩釋或延釋系統(tǒng)，以便維持藥劑含量恒定。參見(jiàn)例如美國(guó)專(zhuān)利3,710,795。
這種腸胃外給藥的組合物中含有的活性化合物百分?jǐn)?shù)高度依賴(lài)于其特殊性質(zhì)以及化合物的活性和主題需要。不過(guò)，在溶液中可以使用0.01％—10％活性成分的百分?jǐn)?shù)，而且如果組合物是隨后將稀釋到上述百分?jǐn)?shù)的固體的話(huà)，活性成分的百分?jǐn)?shù)將會(huì)更高。優(yōu)選組合物在溶液中包括0.2—2％活性成分。
單獨(dú)的活性化合物或與其它藥用賦形劑結(jié)合使用的嗅液也可以給藥。
活性化合物或鹽的配方也可以單獨(dú)或與惰性載體如乳糖結(jié)合作為氣溶膠或噴霧器用的溶液或作為吸入用的微細(xì)粉用于呼吸道給藥。在此情況下，配方顆粒的直徑低于50微米、優(yōu)選低于10微米。
以下制備例如實(shí)施例旨在使本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員更清楚地理解和實(shí)施本發(fā)明。它們不應(yīng)被當(dāng)作是限定本發(fā)明的范圍，而只是用于舉例說(shuō)明。
實(shí)施例1制備式2化合物1A.R1是氫將2—N，N—二甲氨基甲基喲哚(5.4g)(Acta.Chim.Acad.Sci.Hung.，第34卷，439頁(yè)(1962)的40ml甲醇溶液與甲基碘(15ml)混合并放置3小時(shí)。溶液蒸發(fā)后得到一種玻璃狀物，往里加三苯膦(11.6g)和二甲基甲酰胺(DMF)(100ml)?；旌衔锘亓鬟^(guò)夜，然后在減壓下蒸掉大部分DMF，殘余物用苯(75ml)研制。濾掉形成的晶體，用少量苯洗滌，并真空干燥，得到吲哚—2—甲基三苯基碘化磷(10.4g)。1B.變化R1
采用實(shí)施例1A的工序，用所需R1取代基取代的2—二乙氨基甲吲哚替代2—二乙氨基甲基吲哚，得到式2的相應(yīng)化合物，其中R1是甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，叔丁基，正戊基，正己基，等等，例如4—甲基吲哚—2—甲基三苯基碘化磷；5—乙基吲哚—2—甲基三苯基碘化磷；6—正丙基吲哚—2—甲基三苯基碘化磷；以及7—正丁基基吲哚—2—甲基三苯基碘化磷。
實(shí)施例2制備式3化合物2A.R1是氫且R2是苯硫—3—基往溶有1.04g吲哚—2—甲基三苯基碘化磷的60ml二甲亞硫溶液中加入175μl噻吩—3—甲醛，然后加250μl1，8—二氮雜雙環(huán)〔5.4.0〕十一碳—7—烯?；旌衔镉?0℃充氮情況下攪拌1小時(shí)，于80℃攪拌2小時(shí)，最終于20℃攪拌過(guò)夜?；旌衔锏谷胨?，并用乙醚萃取。干燥有機(jī)層，減壓脫除溶劑，殘余物用甲醇結(jié)晶純化。2—〔2—(苯硫—3—基)乙烯基〕吲哚的產(chǎn)量為200mg(44％)。
2B變化R1和R2采用實(shí)施例2A的工序，并任意選擇地用例如實(shí)施例1制備的其它式2化合物替代吲哚—2—甲基三苯基碘化磷，并用式R2CHO的其它化合物任意替代噻吩—3—甲醛，得到以下式3的化合物2—〔2—(苯硫基—2—基)乙烯基〕吲哚；2—〔2—(呋喃—3—基)乙烯基〕吲哚；2—〔2—(吡咯—3—基)乙烯基〕吲哚；
2—〔2—(吡啶—3—基)乙烯基〕吲哚；4—甲基—2—〔2—(苯硫—3—基)乙烯基〕吲哚；5—乙基—2—〔2—(苯硫—3—基)乙烯基〕吲哚；6—正丙基—2—〔2—(苯硫—3—基)乙烯基〕吲哚；7—正丁基—2—〔2—(苯硫—3—基)乙烯基〕吲哚。
實(shí)施例3制備式4化合物3A.R1是氫且R2是苯硫—3—基將2—〔2—(苯硫—3—基)乙烯基〕吲哚(200mg)溶于3ml二甲基甲酰胺并用40mg氫化鉀于25℃處理15分鐘。然后加1—碘—3—(叔丁基二苯甲硅烷基氧)丙烷(500mg)，反應(yīng)混合物于25℃攪拌過(guò)夜。在乙醚和水之間分配混合物之后，干燥有機(jī)層，并減壓除溶劑。殘余物在硅膠上用制備TLC純化(用5∶1己烷/EtPAc洗脫)。1—〔3—(叔丁基二苯基甲硅烷基氧)丙基〕—2—〔2—(苯硫—3—基)乙烯基〕吲哚的產(chǎn)量為330mg(71％)。
將該物質(zhì)溶于2nd四氫呋喃并用2ml 1M氟化四丁銨溶液于25℃處理2小時(shí)?；旌衔镌谝颐押退g分配后，干燥有機(jī)層，并減壓除溶劑。殘余物在硅膠上用制備TLC純化(用2∶1己烷/EtOAc)洗脫，得到121mg 1—(3—羥丙基)—2—〔2—(苯硫—2基)乙烯基〕吲哚(68％)。
3B.變化R1和R2采用實(shí)施例3A的工序，用例如上述實(shí)施例2制備的式3其它化合物替代2—〔2—(苯硫—3—基)乙烯基)吲哚，得到式4的相應(yīng)羥丙基化合物。
實(shí)施例4制備式5a化合物A.R1是氫，R2是苯硫—3—基，R3是氫，且R4是甲基將1—(3—羥丙基)—2—〔2—(苯硫—3—基)乙烯基〕吲哚(121mg)的3ml二氯甲烷溶液用120μl2，6—二甲基吡啶處理并冷卻到0℃。加三氟甲磺酸酐(100μl)，攪拌30分鐘后，引入5ml40％含水甲胺，反應(yīng)混合物于25℃攪拌3小時(shí)。于0℃進(jìn)一步攪拌12小時(shí)后，反應(yīng)混合物在二氯甲烷和水之間分配，干燥有機(jī)層，減壓除溶劑。硅膠制備TLC(用10％甲醇/二氯甲烷洗脫)得到83mg1—〔3—甲氨)丙基)—2—〔2—(苯硫—3—基)乙烯基〕吲哚(67％)。將該產(chǎn)物溶于3ml含150μl吡啶的二氯甲烷并加三氟乙酸酐(40ml)。30分鐘后，在乙醚和碳酸氫鈉水溶液之間分配混合物，干燥有機(jī)層，并減壓脫溶劑。硅膠制備TLC(用3∶1己烷/EtOAc洗脫)得到80mg 1—〔3—(N—甲基三氟甲基乙酰氨基)丙基)—2—〔2—苯硫—3—基)乙烯基〕吲哚(73％)。
4B.變化R1，R2，R3和R4采用4A的工序并用例如以上實(shí)施例3中制備式4化合物任意選擇地替代1—(3—羥丙基)—2—〔2—(苯硫—3—基)乙烯基〕吲哚，得到式5和5a的相應(yīng)化合物。 實(shí)施例5式I化合物的制備 5A.R1是氫，R2是苯硫—3—基，R3是氫，且R4是甲基用40mg馬來(lái)酰亞胺處理1—〔3—(N—甲基三氟甲基乙酰氨基)丙基)—2—〔2—苯硫—3—基)乙烯基〕吲哚(80mg)的2ml甲苯溶液。回流過(guò)夜后，減壓蒸掉溶劑，殘余物用硅膠制備TLC純化，得到20mg Diels—Alder加合物(20％)。
1H NMR(CDCl3)7.96(m，1H)，7.35-7.15(m，4H)，7.13(m，1H)，7.02(m，1H)，4.40(d，1H)，4.13(t，2H)，3.73(m，2H)，3.45(t，2H)，3.12(m，2H)，3.06(s，3H)，2.02(5.2H).
該物質(zhì)溶于3ml甲苯，并用20mg二氯二氰苯醌(DPQ)處理。20分鐘后，另加10mg DDQ。10分鐘后，反應(yīng)混合物涂到制備TLC板上并以2∶1己烷/EtOAc洗脫。以此方式，得到18mg 1，3—二氧—6—(N—甲基三氟甲基乙酰氨基)—1，2，3，6—四氫—4—(苯硫—3—基)—吡咯并〔3，4—c〕咔唑黃色泡沫。
該產(chǎn)物溶于4ml 1∶1 MeOH/THF，加1ml 1M NaOH。攪拌15分鐘后，在二氯甲烷和水之間分配混合物。分離有機(jī)層并減壓除溶劑。殘余物的制備TLC(用10％甲醇的二氯甲烷洗脫)得到15mg 1，3—二氧代—(3—甲氨基丙基)—1，2，3，6—四氫—4—(苯硫—3—基)—吡咯并〔3，4—c〕咔唑。
1H NMR(d6—DMSO)8.96(d，H)，8.00(s，1H)，795(m，1H)，7.74(d，1H)，7.62(m，3H)，7.3 5(t，1H)，4.5 9(t，2H)，2.55(t，2H)，2.29(s，3H)，1.97(t，2H).HRMS分析C22H19N3O2S389.1197；實(shí)測(cè)389.1198.
HRMS分析C22H19N3O2S389.1197；實(shí)測(cè)值389.1198。
5B.變化R1，R2和R3
采用實(shí)施例5A的工序并用例如上述實(shí)施例4B中制備式5或5a其它化合物替代1—〔3—(N—甲基三氟甲基乙酰氨基)丙基)—2—〔2—(苯硫—3—基)乙烯基〕吲哚，得到式I的相應(yīng)的吡咯并咔唑衍生物。
實(shí)施例6本例說(shuō)明了用于口服的含式I活性化合物，如1，3—二氧代—6—(3—甲氨基丙基)—1，2，3，6—四氫—4—(苯硫—3—基)—吡咯并〔3，4—c〕咔唑的代表性藥物組合物的制備。
成分 每片量，mg活性化合物 200乳糖，噴霧干燥 148硬脂酸鎂 2將上述成分混合并引入硬殼明膠膠囊。
式I其它化合物，例如按照實(shí)施例1—6制得的化合物，可用作制備本例口服配方中的活性化合物。
實(shí)施例6本例說(shuō)明了用于口服的含式I活性化合物，例如1，3—二氧代—6—(3—甲氨基丙基)—1，2，3，6—四氫—4—(苯硫—3—基)—吡咯并〔3，4—c〕咔唑的另一代表性藥物組合物的制備。
成分每片量，mg活性化合物 400玉米淀粉50乳糖145硬脂酸鎂5
將上述成分緊密混合并壓成單刻痕片劑。
在本例口服配方的制備中，式I的其它化合物，例如按照實(shí)施例1—6制備的化合物，可用作活性化合物。
實(shí)施例7本例說(shuō)明了含式I活性化合物，例如1，3—二氧代—6—(3—甲氨基丙基)—1，2，3，6—四氫—4—苯硫—3—基)吡咯并〔3，4—c〕咔唑的代表性藥物組合物的制備。
制備具有以下組成的口服用懸浮液成份 用量活性化合物 1.0g富馬酸 0.5g氯化鈉 2.0g羥苯甲酸甲酯 0.1g粒狀糖 25.5g山梨醇(70％溶液) 12.85gVeegum K(Vanderbilt Co.) 1.0g香味劑0.035ml著色劑 0.5mg蒸餾水足量到100ml在本例口服配方的制備中，可以使用式I的其它化合物，例如按照實(shí)施例1—6制備的化合物作為活性化合物。
實(shí)施例8本例說(shuō)明了含式I活性化合物，例如1，3—二氧代—6—(3—甲氨基丙基)—1，2，3，6—四氫—4—(苯硫—3—基)—吡咯并〔3，4—c〕咔唑的代表性藥物組合物的制備。
制備緩沖到pH7.4的注射制劑，它具有以下組成成分用量活性化合物 0.2g乙酸鈉緩沖液(0.4M) 2.0mlHCl(1N) 加足到pH7.4水(蒸餾，無(wú)菌)加足到20ml在制備本例注射制劑中，可以使用式I的其它化合物，例如按照實(shí)施例1—6制備的化合物作為活性化合物。
實(shí)施例9本例說(shuō)明了含式I活性化合物，例如1，3—二氧代—6—(3—甲氨基丙基)—1，2，3，6—四氫—4—(苯硫—3—基)吡咯并〔3.4—c〕咔唑的代表性藥物組合物的制備。
制備共2.5克的栓劑，它具有以下組成活性化合物500mgWitepsol H—15*余量(*飽和植物脂肪酸的三甘油酯；Riches—Nelson，Inc.，New，York，N.Y.的產(chǎn)品)在制備本例的栓劑配方中，可以使用式I的其它化合物，例如按照實(shí)施例1—6制備的化合物作為活性化合物。
實(shí)施例10采用蛋白激酶C抑制試驗(yàn)體外測(cè)定活性通過(guò)測(cè)定來(lái)自γ—32P ATP的32P結(jié)合入合成肽基質(zhì)的情況用數(shù)量表示蛋白激酶C(PKC)抑制活性。使用取自大芯腦髓的PKC的β1同功酶和合成的肽底物ala—lys—arg—arg—arg—leu—ser—ser—leu—arg—ala測(cè)定抑制可能性。
含25mM Tris—HCl、pH7.5、2.5mM Mg(NO3)、1.0mMEGTA、20μM底物、1μg/ml磷脂酰絲氨酸(PS)、5×10-6M二?；视?di—C8)和50μM ATP的反應(yīng)混合物用γ—32P ATP(＞5,000Ci/mmol)作標(biāo)記)以提供每次反應(yīng)約106CPM和每孔50μl體積的0.08μg/ml PKC。該試驗(yàn)是在存在或不存在試驗(yàn)化合物的條件下進(jìn)行，并以下同的濃度加入。于室溫保溫5分鐘后，通過(guò)加0.2V50％TCA溶液來(lái)中止反應(yīng)。然后，將各孔取出的30μl樣品(對(duì)照和試驗(yàn)化合物)滴在Whatman P—81離子交換色譜紙上，然后在Beckman LS5000TA液體閃爍計(jì)數(shù)器上計(jì)數(shù)32—P參入率。按照下式測(cè)定由5×10-6MdiC8和1μg/ml磷脂酰絲氨酸活化的PKC抑制率。抑制率＝1.0－〔(樣品CPM－基體CPM)/(總的CPM－基體CPM)〕×100以及測(cè)定達(dá)到50％抑制率所需的濃度。
當(dāng)用此法試驗(yàn)時(shí)，本發(fā)明的化合物是蛋白激酶C的活性抑制劑；例如1，3—二氧代—6—(3—甲氨基丙基)—1，2，3，6—四氫—4—(苯硫—3—基)—吡咯并〔3，4—c〕咔—IC5030nM。
實(shí)施例11采用小細(xì)胞肺癌異種移植試驗(yàn)體內(nèi)測(cè)定活性。
該方法是由Maneckjee等人，在Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89卷，1169—1173頁(yè)(1992年2月)中介紹的方法的改型。
H82小細(xì)胞肺癌(SCLC)細(xì)胞由冷凍的備料中解凍并在RP-MI中生長(zhǎng)。在注射之前，將該細(xì)胞受胰蛋白酶作用，計(jì)數(shù)，并再懸浮于PBS溶解的基膜制劑(MatrigelR)(1∶2)至5×105或1.5×106細(xì)胞/ml的濃度。雌性無(wú)胸腺裸鼠，4—5周齡(Harlan SpragueDawley)在激發(fā)前一天，接受200R/鼠輻射，并通過(guò)在脅腹中皮下注射，提供0.2ml SCLC/鼠(濃度1×105或3×105SCLC細(xì)胞/鼠)。30只小鼠組每天用10mg/kg試驗(yàn)化合物腹膜內(nèi)處理一次(該化合物溶于DMSO并稀釋到最終20％DMSO于PBS的媒體濃度)。激發(fā)后2小時(shí)開(kāi)始處理，持續(xù)45天。媒體處理和未處理過(guò)鼠用作對(duì)照。
統(tǒng)計(jì)分析采用Fisher Exact試驗(yàn)〔Kendall M.Stuart A.，TheAdvanced Theory of Statistics，第2卷(MacMillan Pub.Co.NY，1979)〕比較各組之間的腫瘤出現(xiàn)率。用Mann Whitney U試驗(yàn)〔Hollander N.，Wolfe D.A.，Non—parametric Statisticol Meth-ods(John Wiley and Sons，Inc.，NY，1973)〕比較存活時(shí)間的差別并用對(duì)數(shù)等級(jí)試驗(yàn)(Kalbfleisch J.D.，Prentice R.L.，The Statisti-cal Analysis of Failure Time Data(John Wiley and Sons，Inc.，NY1980)〕比較各腫瘤達(dá)到2000mm3的時(shí)間。
當(dāng)采用這種方法檢測(cè)時(shí)，本發(fā)明的化合物抑制腫瘤生長(zhǎng)。
實(shí)施例12采用結(jié)腸癌異種移植試驗(yàn)體內(nèi)側(cè)定活性采用實(shí)施例2的方法并用HT—29結(jié)腸癌細(xì)胞替代H82小細(xì)胞肺癌細(xì)胞，所述細(xì)胞生長(zhǎng)到濃度為5×106個(gè)細(xì)胞/ml，并以1×106個(gè)細(xì)胞/鼠濃度給藥，測(cè)定抗結(jié)腸癌活性。
當(dāng)用這種方法檢測(cè)時(shí)，本發(fā)明的化合物抑制了腫瘤生長(zhǎng)。
盡管參考其具體實(shí)施方案已介紹了本發(fā)明，但本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員應(yīng)理解，可以做出不同改變，且在不背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)和范圍內(nèi)可以替換其等同物。另外，可以做出各種改進(jìn)以將具體情況、物質(zhì)、物質(zhì)組合物、方法、方法步驟適應(yīng)本發(fā)明的目的、精神實(shí)質(zhì)和范圍。所有這些改進(jìn)旨在包括在所附權(quán)利要求的范圍內(nèi)。在此引用的所有專(zhuān)利和出版物結(jié)合入本文作參考。
權(quán)利要求
1.一種下式表示的化合物 其中R1是氫或低級(jí)烷基；R2是雜芳基；以及R3和R4獨(dú)立地是氫或低級(jí)烷基；或其藥用鹽。
2.權(quán)利要求1的化合物，其中R1是氫。
3.權(quán)利要求2的化合物，其中R2是3—苯硫基。
4.權(quán)利要求3的化合物，其中R3是氫R4是低級(jí)烷基。
5.權(quán)利要求4的化合物，其中R3是氫且R4是甲基，即1，3—二氧代—6—(3—甲氨基丙基)—1，2，3，6—四氫—4—(苯硫—3—基)—吡咯并〔3，4—c〕咔唑。
6.一種藥物組合物，它包括一種式I化合物或其鹽和一種藥用載體。
7.一種制備權(quán)利要求1定義的式I化合物及其鹽的方法，它包括使式5或5a化合物 其中R1—R4按權(quán)利要求1中定義，y是氨基保護(hù)基，與馬來(lái)酰亞胺反應(yīng)，需要的話(huà)，脫除保護(hù)基，且需要的話(huà)，使式I化合物轉(zhuǎn)化成藥用鹽。
8.按權(quán)利要求7的方法或顯然與其化學(xué)等同的方法制備的權(quán)利要求1—5中任一項(xiàng)的化合物。
9.權(quán)利要求1的化合物或其鹽制造用于治療惡性疾病、特別是小細(xì)胞肺癌、結(jié)腸癌以及腎和前列腺腫瘤的藥物組合物的用途。
10.前述新型化合物、組合物、方法和用途。
全文摘要
式I代表的化合物，其中R
文檔編號(hào)A61P35/00GK1123280SQ9510868
公開(kāi)日1996年5月29日 申請(qǐng)日期1995年8月3日 優(yōu)先權(quán)日1994年8月4日
發(fā)明者C·A·布羅卡 申請(qǐng)人:弗·哈夫曼-拉羅切有限公司