專利名稱：一種治療艾滋病的藥物組合物及其制備方法、質(zhì)量控制方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物組合物，特別涉及一種用于治療治療艾滋病的藥物組合物。本發(fā)明還涉及該組合物的質(zhì)量控制方法和用途。
背景技術(shù)：
艾滋病是HIV感染引起的獲得性免疫缺陷綜合征，HIV感染進(jìn)程和發(fā)病的不同階段臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣，包括在后期發(fā)生的致命性惡性腫瘤和各類機(jī)會(huì)性感染。 人感染HIV-I后一般經(jīng)7-12年進(jìn)入發(fā)病期。照現(xiàn)行的診療標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)于無癥狀且CD+T細(xì)胞數(shù)尚未大幅度降低(例如，仍處于300個(gè)每微升以上)的HIV病毒攜帶者，不建議給予抗病毒療法，否則會(huì)使病人和社會(huì)承擔(dān)誘發(fā)嚴(yán)重抗藥性的巨大風(fēng)險(xiǎn)。根據(jù)近十年的臨床實(shí)踐，對(duì)于進(jìn)入發(fā)病期特別是發(fā)病早、中期的艾滋病患者，在實(shí)施HAART主流療法的同時(shí)，同時(shí)加服中藥進(jìn)行輔助治療，已見到在改善乏力、腹瀉、惡寒等并發(fā)癥狀、減少西藥引起的毒副作用、提高患者治療依從性、提高患者生存質(zhì)量等方面的效果。中藥應(yīng)該能夠成為艾滋病治療的選項(xiàng)。本發(fā)明發(fā)明人在專利申請(qǐng)CN101020027A公開了一種預(yù)防和治療艾滋病的藥物組合物，使用虎杖、毛冬青、淫羊霍、甘草、女貞子，并輔以其他中草藥，制得的制劑對(duì)HIV感染 者具有很好的療效，具有延緩HIV感染者發(fā)病的作用。但是，其療效仍有待改善。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種治療艾滋病的藥物組合物。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供上述藥物組合物的質(zhì)量控制方法。本發(fā)明的再一個(gè)目的在于提供上述藥物組合物的在治療艾滋病中的應(yīng)用。本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是
一種藥物組合物，其原料藥由以下質(zhì)量份的
熟附子20 30份；
淫羊藿、干姜、甘草各I0 15份；
人參、丹參、虎杖、茯苓各6 12份；
黃柏3 5份；
黃芩2 4份組成。優(yōu)選的，原料藥的有效成分經(jīng)水提，之后醇提得到。上述藥物組合物的制備方法，包括如下步驟
1)取原料藥，用水煎煮，過濾，取濾液；
2)將濾液離心，取上清液，濃縮，得水提濃液；
3)在水提濃液中加入乙醇，攪拌，靜置，之后離心，取上清液，去除乙醇，得到醇提物；
4)將醇提物與其他可接受的藥用輔料，制備得到藥物制劑。
更進(jìn)一歩的，其制備方法包括如下步驟
1)取原料藥,加水煎煮3次，每次加入20倍量的水，煎煮2h，放冷，濾過，合并濾液；
2)將濾液離心，取上清液并濃縮至原料藥重，得水提濃液；
3)在水提濃液加入兩倍體積濃度為95%(v/v)的こ醇，攪拌均勻，靜置6至10小時(shí)，之后離心，取上清液，去除こ醇，濃縮干燥，得到醇提物。上述藥物組合物的質(zhì)量控制方法，包括定性鑒定和指標(biāo)化合物的定量測(cè)定，包括如下步驟
1)按照中國(guó)藥典薄層色譜法項(xiàng)下規(guī)定的方法，組合物中的烏頭堿限量，不得多于規(guī)定 限度；
2)按照中國(guó)藥典薄層色譜法項(xiàng)下規(guī)定的方法，組合物中應(yīng)至少檢測(cè)出存在有淫羊蕾、甘草、虎杖、干姜、人參和黃岑；
3)按照中國(guó)藥典一部高效液相色譜法項(xiàng)下規(guī)定的方法，組合物中的雙酯型生物堿烏頭堿、新烏頭堿和次烏頭堿的總量不得超過規(guī)定限度；
4)按照中國(guó)藥典一部高效液相色譜法項(xiàng)下規(guī)定的方法，組合物中的淫羊藿苷、甘草酸、虎杖苷、黃芩苷的含量不低于規(guī)定限度。本發(fā)明的有益效果是
通過國(guó)際學(xué)術(shù)界公認(rèn)的實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)艾滋病藥物體內(nèi)作用的最佳艾滋病猴模型技術(shù)，證實(shí)了本發(fā)明特定的藥物組合物對(duì)猴艾滋病病毒感染恒河猴所致艾滋病模型猴具有治療作用，擁有延長(zhǎng)生存期、提高生存質(zhì)量、改善和恢復(fù)T3、Cor水平、改善⑶4+T細(xì)胞比率、改善⑶4+/CD8+比值、抑制病毒的綜合療效指標(biāo)中的全部或部分療效指標(biāo)?；趯?duì)艾滋病猴模型這種適宜艾滋病動(dòng)物模型的療效，可以預(yù)見本發(fā)明藥物組合物制劑具有治療人類艾滋病的用途，給予HIV感染者和艾滋病患者本發(fā)明藥物組合物制齊U，能夠緩解病癥，包括穩(wěn)定或者提升HIV病毒感染者和艾滋病病人的CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)水平，緩解臨床癥狀體征、改善生存質(zhì)量。
具體實(shí)施例方式發(fā)明人觀察研究了猴艾滋病病毒(SIV)感染的艾滋病猴模型的中醫(yī)證型分布與演變規(guī)律，總結(jié)歸納出疾病的證型分布和演變規(guī)律由感染初期階段出現(xiàn)的煩躁等“實(shí)證”演變?yōu)橹衅陔A段的攝食量減少、腹瀉、活動(dòng)減少，毛發(fā)脫落，體重增長(zhǎng)緩慢等“脾虛證”，再發(fā)展成為晩期的肌肉萎縮、蜷縮、畏寒、精神萎靡不振、機(jī)體消瘦、體重急速下降、肢體蜷縮顫抖，甚至眼瞼、臉部水腫等中醫(yī)“脾腎陽虛證”表現(xiàn)。對(duì)于艾滋病模型患猴，特別是能夠反映和評(píng)價(jià)中醫(yī)證特點(diǎn)的病癥復(fù)合猴艾滋病模型患猴的實(shí)驗(yàn)治療結(jié)果，辨證治療優(yōu)于非辨證治療；溫補(bǔ)腎陽法的療效明顯優(yōu)于清熱解毒法的療效。溫補(bǔ)腎陽法采用的中藥應(yīng)立“溫補(bǔ)腎陽”原則為君(首要治則)，“補(bǔ)益元?dú)?、ネト益脾陽”原則為臣(次要治則)，以是否能夠延長(zhǎng)生存期，提高生存質(zhì)量為目的，以能否改善和恢復(fù)T3、Cor水平、改善⑶4+Τ細(xì)胞比率、改善⑶4+/⑶8+比值作為療效指標(biāo)?；谏鲜鲇^察研究的結(jié)論和分析，本發(fā)明人按照溫補(bǔ)腎陽，益氣、活血、解毒的治則思路，以熟附子、淫羊藿溫補(bǔ)腎陽作為君藥并以干姜增強(qiáng)溫陽功效，佐以人參補(bǔ)益元?dú)猓佥o之以茯苓、甘草健脾，丹參、虎杖活血，黃柏、黃芩清熱解毒，研制得到本發(fā)明所述的藥物組合物。一種藥物組合物，其原料藥由以下質(zhì)量份的
熟附子20 30份；
淫羊藿、干姜、甘草各I0 15份；
人參、丹參、虎杖、茯苓各6 12份；
黃柏3 5份；
黃芩2 4份組成。優(yōu)選的，原料藥的有效成分經(jīng)水提，之后醇提得到。上述藥物組合物的制備方法，包括如下步驟
1)取原料藥，用水煎煮，過濾，取濾液；
2)將濾液離心，取上清液，濃縮，得水提濃液；
3)在水提濃液中加入乙醇，攪拌，靜置，之后離心，取上清液，去除乙醇，得到醇提物；
4)將醇提物與其他可接受的藥用輔料，制備得到藥物制劑。更進(jìn)一步的，其制備方法包括如下步驟
1)取原料藥,加水煎煮3次，每次加入20倍量的水，煎煮2h，放冷，濾過，合并濾液；
2)將濾液離心，取上清液并濃縮至原料藥重，得水提濃液；
3)在水提濃液加入兩倍體積濃度為95%(v/v)的乙醇，攪拌均勻，靜置6至10小時(shí)，之后離心，取上清液，去除乙醇，濃縮干燥，得到醇提物?？诜苿┻m合艾滋病患者的長(zhǎng)期治療，服用方便，生產(chǎn)成本更為低廉。因此，本發(fā)明的藥物組合的劑型優(yōu)選為膠囊劑、片劑、顆粒劑、沖劑、口服液、水滴丸、蜜丸，其中，以膠囊劑、片劑、顆粒劑、口服液為佳。上述藥物組合物的質(zhì)量控制方法，包括定性鑒定和指標(biāo)化合物的定量測(cè)定，包括如下步驟
1)按照中國(guó)藥典薄層色譜法項(xiàng)下規(guī)定的方法，組合物中的烏頭堿限量，不得多于規(guī)定限度；
2)按照中國(guó)藥典薄層色譜法項(xiàng)下規(guī)定的方法，組合物中應(yīng)至少檢測(cè)出存在有淫羊藿、甘草、虎杖、干姜、人參和黃岑；
3)按照中國(guó)藥典一部高效液相色譜法項(xiàng)下規(guī)定的方法，組合物中的雙酯型生物堿烏頭堿、新烏頭堿和次烏頭堿的總量不得超過規(guī)定限度；
4)按照中國(guó)藥典一部高效液相色譜法項(xiàng)下規(guī)定的方法，組合物中的淫羊藿苷、甘草酸、虎杖苷、黃芩苷的含量不低于規(guī)定限度。本發(fā)明藥物組合物使用的藥材如下,均應(yīng)符合中國(guó)藥典對(duì)藥材的質(zhì)量要求。附子是毛茛科植物烏頭Aconitum carmichaeli Debx.的子根的加工品。包括黑順片和白附片。淫羊藿是小檗科植物淫羊藿Epimedium brevicornum Maxim.、箭葉淫羊藿Epimedium sagittatum(Sieb. et. Zucc.)Maxim. > 柔毛淫羊藿 Epimedium pubescensMaxim.、巫山淫羊藿 Epimedium wushanense Τ· S. Ying 或車月魚羊淫羊藿 Epimedium koreanumNakai的地上部分。干姜是姜科植物姜Zingiber officinale Rose.的干燥根莖。
甘草是豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、脹果甘草 Glycyrrhizainflata Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L的干燥根及根莖。人參是五加科植物人參PanaxginsengC. A. Mey.的干燥根及根莖。包括生曬參和紅參，優(yōu)選紅參。丹參是唇形科植物丹參Salvia miotiorrhiza Bge.的干燥根及根莖。虎杖是寥科植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc.的干燥根及根莖。茯苓是多孔菌科真菌茯苓Poria cocos (Schw. ) Wolf.的干燥菌核。黃柏是蕓香科植物黃柏Phellodendron chinensis Schn eid.的干燥樹皮。黃岑是唇形科植物黃岑Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根。下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)ー步說明本發(fā)明。以下實(shí)施例中，如無特別說明，份數(shù)均指質(zhì)量份，こ醇的濃度以體積濃度計(jì)。實(shí)施例I 原料藥組成
熟附子25份、淫羊藿12. 5份、干姜12. 5份、甘草12. 5份、紅參7. 82份、茯苓7. 81份、虎杖7. 81份、丹參7. 81份、黃柏3. 75份、黃芩2. 5份。實(shí)施例2
原料藥組成
熟附子20份、淫羊藿14份、干姜15份、甘草10份、紅參10份、茯苓12份、虎杖6份、丹參10份、黃柏5份、黃岑3份。實(shí)施例3 原料藥組成
熟附子30份、淫羊藿15份、干姜10份、甘草15份、紅參6份、茯苓6份、虎杖10份、丹參12份、黃柏3份、黃芩4份。實(shí)施例4 原料藥組成
熟附子27份、淫羊藿10份、干姜12份、甘草13份、紅參12份、獲茶9份、虎杖12份、丹參6份、黃柏4份、黃岑2份。原料藥有效成分的提取
照處方比例稱取各種原料,加純水煎煮3次，每次加入20倍量的純水，煎煮2h，放冷，濾過，合并濾液；
將濾液以15000rpm的轉(zhuǎn)速離心10分鐘，取上清液，將上清液濃縮至藥液體積以升計(jì)等于藥材總質(zhì)量以千克計(jì)(即與原料藥等重)；
加入兩倍藥液體積的含體積分?jǐn)?shù)為95%的藥用こ醇，攪拌均勻，靜置6至10小吋，以15000rpm的轉(zhuǎn)速離心，取上清液，減壓下回收こ醇并減壓下濃縮成稠膏，噴霧干燥，或在80°C以下真空干燥、粉碎，即得原料藥有效成分的提取物。藥物制劑的制備
硬膠囊按上述方法，使用實(shí)施例I的原料藥配比，提取得到原料藥的有效成分，記為藥物組合物GZY提取物，提取物的得率為13%。將GZY提取物與輔料混合均勻，過80目篩，制粒，加入硬脂酸鎂混合均勻，裝填得到硬膠囊，規(guī)格0. 5g提取物/粒。
經(jīng)檢驗(yàn)，本品測(cè)得含淫羊藿苷4. 19mg/g ;含烏頭堿為O。片劑按上述方法，使用實(shí)施例I的原料藥配比，提取得到原料藥的有效成分，將提取物粉碎，過100目篩，與輔料混合均勻，過80目篩，制粒，加硬脂酸鎂，經(jīng)60目篩整粒，壓片，即得。顆粒劑按上述方法，使用實(shí)施例I的原料藥配比，提取得到原料藥的有效成分，加入適量糖粉、苯甲酸鈉和其他輔料，加純水，加熱至沸，攪拌下于80°C保溫2h，冷卻至室溫，過濾，取濾液分裝，即得。質(zhì)量控制方法
(I)按照中國(guó)藥典薄層色譜法項(xiàng)下規(guī)定的方法，本發(fā)明所說的中藥制劑中熟附子的指標(biāo)化合物的烏頭堿限量，不得多于規(guī)定限度。具體方法如下取膠囊內(nèi)容物10.0g，加氨試 液10mL，拌勻，放置2小時(shí)，加乙醚IOOmL,分兩次提取，每次振搖O. 5小時(shí)，放置分層，取乙醚層蒸干，殘?jiān)脽o水乙醇溶解使成lmL，作為供試品溶液。取烏頭堿對(duì)照品適量，加無水乙醇制成每ImL含I. Omg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液10 μ L、對(duì)照品5 μ L，分別點(diǎn)于用O. I %氫氧化鈉溶液處理過的干燥硅膠G板上，以環(huán)己烷乙酸乙酯甲醇(6.4 : 3.6 : I)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上出現(xiàn)的斑點(diǎn)應(yīng)小于對(duì)照品斑點(diǎn)，或不出現(xiàn)斑點(diǎn)。表示按照此方法，每IOg內(nèi)容物中的烏頭堿可以不被檢出；如果被檢出，其中的烏頭堿限度不得多于O. 5mg。(2)按照中國(guó)藥典薄層色譜法項(xiàng)下規(guī)定的方法，本發(fā)明所說的中藥制劑中至少應(yīng)該檢查出如下藥材的存在淫羊藿、甘草、虎杖、干姜、人參、黃芩。本實(shí)施例以淫羊藿和甘草為例說明如下。其他藥材參照藥典質(zhì)量檢查標(biāo)準(zhǔn)，按照本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員能夠理解的方法進(jìn)行檢測(cè)。其中，淫羊藿的檢測(cè)方法為取膠囊內(nèi)容物5g，加水20mL，加熱使溶解，放冷，加二氯甲烷脫脂，振搖2次，每次20mL ;水層加正丁醇振搖提取3次，每次20mL，合并正丁醇液，減壓蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。取淫羊藿苷對(duì)照品，加甲醇制成每ImL含Img的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取供試品溶液及對(duì)照品溶液各5μ L，分別點(diǎn)于同一塊硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-稀氨水(8.5 1.5 1.5)的上層為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛高氯酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與淫羊藿苷對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。其中，甘草的檢測(cè)方法為取膠囊內(nèi)容物5g，加水20mL加熱使溶解，放冷，加入氨水調(diào)PH9 10，放置，濾過，濾液加稀鹽酸調(diào)pH 2 3，放置，濾過，留取固體不溶物，力口正丁醇20mL溶解，用正丁醇飽和水溶液萃取3次，每次20mL，合并正丁醇液，蒸干,加甲醇2mL溶解，作為供試品溶液。另取甘草酸單銨鹽對(duì)照品，加甲醇制成每ImL含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典一部附錄)試驗(yàn)，吸取上述溶液各5 μ L，分別點(diǎn)于同一塊硅膠G薄層板上，以正丁醇-95%乙醇-氨水(5 I 2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。(3)按照中國(guó)藥典高效液相色譜法項(xiàng)下規(guī)定的方法，本發(fā)明所說的中藥制劑中熟附子中的雙酯型生物堿烏頭堿、新烏頭堿和次烏頭堿總量，不得超過規(guī)定限度。以烏頭堿為例，其測(cè)定方法如下色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-O. 04mol/L醋酸銨(53 47)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為235nm。理論板數(shù)按烏頭堿峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。對(duì)照品溶液的制備取烏頭堿對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇溶液制成每ImL含20 μ g的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品粉末，研細(xì)粉，取約5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，カロ濃氨液4mL，混勻，加入こ醚30mL，密塞，超聲處理15分鐘，放置過夜，攪拌，分取こ醚液，殘?jiān)尤毪趁烟崛?次(毎次IOmL)，合并こ醚液，減壓蒸干，殘?jiān)蛹状既芤喝芙?，定容?0mL，搖勻，即得。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，測(cè) 定，即得。(4)按照中國(guó)藥典高效液相色譜法項(xiàng)下規(guī)定的方法，本發(fā)明所說的中藥制劑中其他ー些中藥材的指標(biāo)化合物，不得少于規(guī)定限度，特別地，淫羊藿以淫羊藿苷計(jì)、甘草以甘草酸計(jì)、虎杖以虎杖苷計(jì)、黃芩以黃芩苷計(jì)，分別不得少于規(guī)定限度。以淫羊藿為例，其測(cè)定方法如下
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以こ臆-水(27 73)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為270nm。理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。對(duì)照品溶液的制備取淫羊藿苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每ImL含
O.Img的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品，研細(xì)，取約O. 5g，精密稱定，置50mL量瓶中，加稀こ醇45mL,超聲處理(功率250W，頻率25kHz) 30分鐘，放冷，加稀こ醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。測(cè)定法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μ L，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。其他藥材參照藥典質(zhì)量檢查標(biāo)準(zhǔn)，按照本領(lǐng)域?qū)I(yè)人員能夠理解的方法進(jìn)行檢測(cè)。本發(fā)明藥物組合物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)主要要求如下
按照高效液相色譜法(中國(guó)藥典一部附錄)試驗(yàn)，本品含附子雙酯型生物堿以烏頭堿(C34H47NO11)、新烏頭堿(C33H45NO11)、次烏頭堿(C33H45NO10)等的總量計(jì),不得過O. 10mg/g;含淫羊藿以淫羊藿苷(C33H4ciO15)計(jì),不得少于I. 5mg/g0藥物組合物GZY提取物膠囊安全性評(píng)價(jià)
委托廣州醫(yī)藥エ業(yè)研究院藥物非臨床評(píng)價(jià)研究中心，在GLP實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行了一般藥理學(xué)的相關(guān)研究。結(jié)果如下
(一)急性毒性試驗(yàn)研究
GZY提取物膠囊88. 9g提取物/kg. bw. Cf1 (以公斤體重折算為人用量的759倍，以體表面積折算為人用量的64倍)一天兩次灌胃給藥，可致NIH小鼠15%的動(dòng)物死亡，能引起動(dòng)物活動(dòng)減少、稀便、閉目等，上述癥狀在第3天恢復(fù)正常，井能引致給藥前期體重減輕及雌性動(dòng)物攝食量減少。而通過對(duì)第2及第3天死亡及瀕死動(dòng)物系統(tǒng)解剖所見，均表現(xiàn)為胃膨大、內(nèi)含大量棕色未消化物，不排除為藥物對(duì)胃腸動(dòng)能影響所致，建議追加安全性藥理試驗(yàn)，以作進(jìn)ー步研究。
在本試驗(yàn)條件下，GZY提取物膠囊最大耐受劑量(MTD)約為88. 9g/kg. bw. cf1。( 二 )長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)研究
連續(xù)經(jīng)口給予藥物組合物GZY提取物膠囊180天，高劑量組即10. 2g/kg · bw(按公斤體重計(jì)為人臨床擬用量87. O倍，按體表面積計(jì)為人臨床擬用量14. 6倍)可引致①雄性動(dòng)物給藥前2周的攝食量的減少及部分動(dòng)物出現(xiàn)短期的稀便，雌性大鼠給藥中、后期體重增長(zhǎng)緩慢。②血液學(xué)檢查紅細(xì)胞數(shù)的減少及不均一性、血紅蛋白量及紅細(xì)胞壓積的減少，網(wǎng)織紅細(xì)胞數(shù)、網(wǎng)織紅細(xì)胞比率的增高，可能與受試物引起紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白量、紅細(xì)胞壓積減少相關(guān)，考慮為代償性的變化，但各值在正常變化范圍內(nèi)，認(rèn)為沒有毒理學(xué)意義，③血液生化學(xué)檢查鈉離子的降低及鉀離子的升高，在恢復(fù)期后未完全恢復(fù)，但該值在正常變化范圍內(nèi)，且相關(guān)的組織病理學(xué)未見異常，因此認(rèn)為上述變化沒有毒理學(xué)意義。④給藥期間，動(dòng)物肝臟及腎臟增大，雌性動(dòng)物在恢復(fù)期肝臟、腎臟的臟器系數(shù)仍大于陰性對(duì)照組，但在正常變化范圍內(nèi)，并結(jié)合血液學(xué)、相關(guān)血生化及組織病理學(xué)等檢測(cè)均未見異常，故將該藥物導(dǎo)致的此種反應(yīng)傾向于判斷為無毒理學(xué)意義，但建議臨床研究在大劑量給患者用藥時(shí)關(guān)注患者用藥時(shí)期及停藥后肝、腎功能的檢測(cè)，確保患者安全用藥。中劑量組即5. lg/kg · bw(按公斤體重計(jì)為人臨床擬用量43. 5倍，按體表面積計(jì)為人臨床擬用量7. 3倍)可引致①雄性動(dòng)物給藥前2周的攝食量的減少。②血液學(xué)檢查紅細(xì)胞數(shù)的減少及不均一性、血紅蛋白量及紅細(xì)胞壓積的減少。③血液生化學(xué)檢查鈉離子(Na+)的降低及鉀離子(K+)的升高，但該值在正常變化范圍內(nèi)，且相關(guān)的組織病理學(xué)未見異常，因此認(rèn)為上述變化沒有毒理學(xué)意義；④給藥期間，雄性動(dòng)物腎臟增大，但在正常變化范圍內(nèi)，并結(jié)合血液學(xué)、相關(guān)血生化及組織病理學(xué)等檢測(cè)均未見異常，同時(shí)在4周恢復(fù)期后此變化可恢復(fù)。低劑量組即1.7g/kg · bw (按公斤體重計(jì)為人臨床擬用量14. 4倍，按體表面積計(jì)為人臨床擬用2. 4倍)未見有毒理學(xué)意義的異常改變。恢復(fù)期未見其他有毒理學(xué)意義的改變，提不受試物對(duì)SD大鼠未見延遲性毒性反應(yīng)。綜上所述，①藥物組合物GZY提取物膠囊對(duì)SD大鼠的無毒副作用劑量為I. 7g/kg · bw (按公斤體重計(jì)為人臨床擬用量14. 4倍，按體表面積計(jì)為人臨床擬用2. 4倍)。②藥物組合物GZY提取物膠囊對(duì)SD大鼠的無毒理學(xué)意義的劑量為10. 2g/kg · bw(按公斤體重計(jì)為人臨床擬用量87. O,按體表面積計(jì)為人臨床擬用量14. 6倍)。(三)一般藥理學(xué)試驗(yàn)研究
I、通過“藥物組合物GZY提取物膠囊對(duì)麻醉Beagle犬呼吸及循環(huán)系統(tǒng)的影響試驗(yàn)”來考察藥物組合物GZY提取物膠囊對(duì)循環(huán)及呼吸系統(tǒng)功能的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明，藥物組合物GZY提取物膠囊在給藥劑量為O. 32、O. 96、2. 88g藥粉/kg (按體表面積等效劑量法折算，約相當(dāng)于成人臨床擬用量的I. 5,4. 4、13. 2倍)時(shí)，未見對(duì)麻醉Beagle犬呼吸及循環(huán)系統(tǒng)產(chǎn)生具有毒理學(xué)意義的影響。2、通過“藥物組合物GZY提取物膠囊對(duì)昆明種小鼠自主活動(dòng)次數(shù)的影響試驗(yàn)研究”來考察藥物組合物GZY提取物膠囊對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明藥物組合物GZY提取物膠囊在給藥劑量為I. 56,4. 68、14. 04g藥粉/kg(按等效體表面積折算法折算，相 當(dāng)于成人臨床擬用量的1.5、4.4、13.2倍)時(shí)，對(duì)昆明種小鼠自主活動(dòng)未見明顯影響。3、通過“藥物組合物GZY提取物膠囊對(duì)NIH小鼠機(jī)體協(xié)調(diào)能力的影響試驗(yàn)研究”來考察藥物組合物GZY提取物膠囊給藥后對(duì)NIH小鼠機(jī)能協(xié)調(diào)能力的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明藥物組合物GZY提取物膠囊在給藥劑量為I. 56,4. 68、14. 04g藥粉/kg (按等效體表面積折算法折算，相當(dāng)于成人臨床擬用量的1.5、4.4、13.2倍)時(shí)，對(duì)小鼠機(jī)體協(xié)調(diào)能力無明顯影響。4、通過“藥物組合物GZY提取物膠囊對(duì)腹腔注射閾下催眠劑量戊巴比妥鈉NIH小鼠的影響”來考察藥物組合物GZY提取物膠囊與閾下催眠劑量的戊巴比妥鈉是否有協(xié)同催眠作用。試驗(yàn)結(jié)果表明藥物組合物GZY提取物膠囊在給藥劑量為I. 56,4. 68、14. 04g藥粉/kg(按等效體表面積折算法折算，相當(dāng)于成人臨床擬用量的I. 5,4. 4、13. 2倍)給藥后I小吋，與閾下催眠劑量的戊巴比妥鈉(30mg/kg)未見協(xié)同催眠作用。5、通過“藥物組合物GZY提取物膠囊對(duì)NIH小鼠一般行為活動(dòng)的影響”來考察藥物組合物GZY提取物膠囊是否對(duì)NIH小鼠一般行為活動(dòng)情況的產(chǎn)生影響。試驗(yàn)結(jié)果表明藥物組合物GZY提取物膠囊在給藥劑量為I. 56,4. 68、14. 04g藥粉/kg (按等效體表面積折算法折算，相當(dāng)于成人臨床擬用量的1.5、4.4、13.2倍)時(shí)，對(duì)NIH小鼠一般行為活動(dòng)情況的未見明顯影響。綜上所述，藥物組合物GZY提取物膠囊在按約相當(dāng)于成人臨床擬用量的I. 5,4. 4、13. 2倍給藥劑量給藥時(shí)，對(duì)小鼠的自主活動(dòng)、機(jī)體協(xié)調(diào)能力、一般行為活動(dòng)情況未見明顯影響，與閾下催眠劑量的戍巴比妥鈉未見協(xié)同作用，對(duì)麻醉Beagle犬呼吸及循環(huán)系統(tǒng)未見有毒理學(xué)意義的影響。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，藥物組合物GZY提取物膠囊在臨床應(yīng)用中當(dāng)給予臨床擬用量時(shí)出現(xiàn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)和循環(huán)系統(tǒng)的不良反應(yīng)可能性較小。SIV感染的艾滋病猴模型的中醫(yī)證型分布與演變研究結(jié)果 I、實(shí)驗(yàn)材料
1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、場(chǎng)地及其等相關(guān)方面
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇恒河猴，排除TB感染(pro試驗(yàn)陰性和胸片X光片正常)、沙門氏菌、志賀氏菌和體內(nèi)外寄生蟲、血清SRV、血清STLV-I、血清SIV等項(xiàng)目檢測(cè)陰性，外觀健康，經(jīng)體檢無淺表淋巴結(jié)腫大的3-6歲齡,體重4-7Kg健康恒河猴35只。實(shí)驗(yàn)場(chǎng)地生物安全2級(jí)實(shí)驗(yàn)室。動(dòng)物的飼養(yǎng)和管理動(dòng)物單籠飼養(yǎng)在不銹鋼籠具中，攝食專用的飼料及自由飲水。室溫20-25 °C，相対濕度50-70 %。按照有關(guān)規(guī)定給予動(dòng)物福利。I. 2猴艾滋病病毒感染
I. 2. I猴艾滋病病韋株SIVmac239
1.2. 2感染劑量及感染途徑接種劑量I : (1000 5000)，使用1640稀釋液進(jìn)行稀釋，靜脈注射感染，注射量lmL。2、觀察及檢測(cè)指標(biāo)
2.I SIV病毒感染相關(guān)檢測(cè)指標(biāo)
病毒載量、血常規(guī)、淋巴細(xì)胞亞群(⑶3+、⑶4+、⑶8+、⑶4+/⑶8+)。2. 2病理檢測(cè)1、無菌手術(shù)取淋巴結(jié)，固定于10%中性甲醛液，石蠟包埋，H. E染色后光鏡觀察病理形態(tài)學(xué)。2、部分組織器官免疫組化檢查。2. 3死亡動(dòng)物處理試驗(yàn)期間死亡動(dòng)物做尸檢。 3、實(shí)驗(yàn)方案
(I)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物檢疫合格后移入實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)環(huán)境，期間進(jìn)行觀察，測(cè)量基本數(shù)據(jù)，確定感染前各恒河猴臨床基線特征。分組。(2)分組完成后用SIVmac239株靜脈注射進(jìn)行SIV病毒感染，于感染后14天左右抽血測(cè)病毒載量判定感染情況，確認(rèn)感染病毒。待感染后血漿病毒載量降至調(diào)定點(diǎn)(setpoint)，即平臺(tái)期時(shí)實(shí)施給藥治療。期間定期檢測(cè)SIV病毒載量和其他指標(biāo)。(3)各組進(jìn)入停藥后觀察期后進(jìn)行8周的臨床觀察，定期抽血檢測(cè)血液學(xué)指標(biāo)和進(jìn)行相關(guān)觀察實(shí)驗(yàn)及測(cè)試。4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
SIVmac239病毒株感染正常健康恒河猴后，病毒載量由O迅速上升，同時(shí)⑶4+比率和⑶4+/⑶8+比值出現(xiàn)下降(表I)。使用30只SIV感染猴開展了中醫(yī)證型分布與演變規(guī)律 觀察研究，在SIV感染的初期階段出現(xiàn)眼紅、煩躁，攻擊性強(qiáng)等“實(shí)證”跡象(25/30);隨后出現(xiàn)攝食量減少(為正常進(jìn)食量的50% -75% )、排便異常(主要表現(xiàn)為腹瀉)、活動(dòng)減少，刺激反應(yīng)速度下降，毛發(fā)干澀、脫落，體重增長(zhǎng)緩慢或輕度下降等中醫(yī)“脾(氣)虛”表現(xiàn)和證型轉(zhuǎn)變(15/30);隨著病情進(jìn)展，“脾虛”癥狀加重，到猴艾滋病中晚期/終末期，出現(xiàn)嚴(yán)重腹瀉(完谷不化)、攝食量減少(不足正常50%)、無食欲、毛發(fā)干澀脫落、肌肉萎縮明顯、體重迅速下降、喜蜷縮、嗜睡、畏寒、水腫(眼瞼部多見)等中醫(yī)“脾腎陽虛證”的表現(xiàn)(10/30)；到最后死亡前仍處于精神萎靡不振、對(duì)外界刺激反應(yīng)能力降低、肢體蜷縮顫抖、機(jī)體消瘦、眼瞼、臉部水腫等中醫(yī)“脾腎陽虛證型”。甚至衰竭死亡(6/30)。此期相當(dāng)于感染末期或衰竭期階段(表2)。表ISIV感染恒河猴模型的病毒載量與淋巴細(xì)胞亞群數(shù)據(jù)
感染后2個(gè)月
_(平臺(tái)期)
病毒載量對(duì)數(shù)(IogVL)O4.49±1.36
CD4+%30.4 牡9.2 20.80±7.03
CD4+/CD8+比值 1.73±1.23 1.08±0.51
表2SIV感染恒河猴模型的病情發(fā)展過程指標(biāo)變化
. ZZ感染中期感染末期衰竭死亡~
0^(n=30)(n=15) (n=10)(n=6)
T3 (nmol/1) 4.93±1.87 3.37±1.08 2.33±0.66 1.42±1.02 Cor (nmol/1) 1191.9±478.8 842.9±365.9 793.2±434.5 1646.2±1376.3
SIV感染恒河猴模型病情發(fā)展過程中的一些生化指標(biāo)發(fā)生了規(guī)律性變化。其中的血清總?cè)饧紫僭彼?T3)水平明顯下降，皮質(zhì)醇(Cor)水平明顯下降(死亡患猴瀕死前Cor值會(huì)出現(xiàn)反跳性升高)，⑶4+%明顯下降、⑶4+/⑶8+比值明顯下降。提示中醫(yī)藥治療艾滋病的治則，在總體上應(yīng)以溫補(bǔ)腎陽為主線，以延緩、阻止、甚至逆轉(zhuǎn)CD4+比率(或CD4計(jì)數(shù))、⑶4+/⑶8+比值的下降趨勢(shì)，改善T3、Cor的下降為治療有效的標(biāo)志，以所獲中醫(yī)對(duì)艾滋病的新認(rèn)識(shí)為依據(jù)，針對(duì)艾滋病的“腎陽虛”本質(zhì)實(shí)施中醫(yī)藥治療。在猴艾滋病病毒感染猴模型上的藥效學(xué)研究結(jié)果
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、場(chǎng)地、猴艾滋病病毒、感染造模、觀察檢測(cè)指標(biāo)、具體實(shí)驗(yàn)方案等實(shí)驗(yàn)條件與
SIV感染的艾滋病猴模型的中醫(yī)證型分布與演變研究結(jié)果相同。藥物及劑量 藥物組合物GZY ；
劑量大劑量2. Og (提取物)/kg. d ;小劑量I. Og/kg. d。給藥途徑與劑型ロ服(灌胃)；膠囊內(nèi)容物以O(shè). 5% CMC-Na在臨用前配制成20%濃度(lmL = 200mg)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果
一般情況，見表3。表3結(jié)果說明本發(fā)明藥物組合物有助于治療，在治療期間不治療的SIV病毒模型組有I只患猴死亡(死亡率為1/4)，治療組無論大、小劑量組均無患猴死亡。表3治療期間一般情況
權(quán)利要求
1.ー種藥物組合物，其原料藥由以下質(zhì)量份的 熟附子20 30份； 淫羊藿、干姜、甘草各I0 15份； 人參、丹參、虎杖、茯苓各6 12份； 黃柏3 5份； 黃芩2 4份組成。
2.ー種藥物組合物，其特征在于原料藥的有效成分經(jīng)水提，之后醇提得到。
3.權(quán)利要求I所述藥物組合物的制備方法，包括如下步驟 1)取原料藥，用水煎煮，過濾，取濾液； 2)將濾液離心，取上清液，濃縮，得水提濃液； 3)在水提濃液中加入こ醇，攪拌，靜置，之后離心，取上清液，去除こ醇，得到醇提物； 4)將醇提物與其他可接受的藥用輔料，制備得到藥物制劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于所述制備步驟包括如下操作 1)取原料藥,加水煎煮3次，每次加入20倍量的水，煎煮2h，放冷，濾過，合并濾液； 2)將濾液離心，取上清液并濃縮至原料藥重，得水提濃液； 3)在水提濃液加入兩倍體積濃度為95%(v/v)的こ醇，攪拌均勻，靜置6至10小時(shí)，之后離心，取上清液，去除こ醇，濃縮干燥，得到醇提物。
5.權(quán)利要求I或2所述藥物組合物的質(zhì)量控制方法，包括定性鑒定和指標(biāo)化合物的定量測(cè)定，包括如下步驟 1)按照中國(guó)藥典薄層色譜法項(xiàng)下規(guī)定的方法，組合物中的烏頭堿限量，不得多于規(guī)定限度； 2)按照中國(guó)藥典薄層色譜法項(xiàng)下規(guī)定的方法，組合物中應(yīng)至少檢測(cè)出存在有淫羊蕾、甘草、虎杖、干姜、人參和黃岑； 3)按照中國(guó)藥典一部高效液相色譜法項(xiàng)下規(guī)定的方法，組合物中的雙酯型生物堿烏頭堿、新烏頭堿和次烏頭堿的總量不得超過規(guī)定限度； 4)按照中國(guó)藥典一部高效液相色譜法項(xiàng)下規(guī)定的方法，組合物中的淫羊藿苷、甘草酸、虎杖苷、黃芩苷的含量不低于規(guī)定限度。
6.權(quán)利要求I所述藥物組合物在制備治療艾滋病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療艾滋病的藥物組合物及其制備方法、質(zhì)量控制方法和用途。組合物的原料藥由熟附子、淫羊藿、干姜、甘草、人參、丹參、虎杖、茯苓、黃柏、黃芩組成。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，本發(fā)明特定的藥物組合物制劑對(duì)猴艾滋病病毒感染恒河猴所致艾滋病模型猴的實(shí)驗(yàn)治療作用，基于對(duì)艾滋病猴模型這種適宜艾滋病動(dòng)物模型的療效，本發(fā)明藥物組合物制劑具有治療人類艾滋病的用途，給予HIV感染者或艾滋病患者本發(fā)明藥物組合物制劑，能夠緩解病癥，包括穩(wěn)定或者提升HIV病毒感染者和艾滋病病人的CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)水平，緩解臨床癥狀體征、改善生存質(zhì)量。
文檔編號(hào)A61K36/9068GK102641489SQ201210119628
公開日2012年8月22日 申請(qǐng)日期2012年4月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月20日
發(fā)明者符林春, 胡英杰 申請(qǐng)人:廣州中醫(yī)藥大學(xué)