專利名稱：新的二氫苯并噻喃衍生物和它們作為凝血酶抑制劑的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的領(lǐng)域本發(fā)明涉及新的藥用化合物，尤其涉及為胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶特別是凝血酶的競爭性抑制劑或其前藥的化合物，涉及它們作為藥物的用途、含有它們的藥用組合物和其制備的合成路線。背景血凝固為涉及止血(即預(yù)防血液自損傷的血管中流失)和血栓形成(即在血管中形成血凝塊，有時導(dǎo)致血管阻塞)的關(guān)鍵過程。
血凝固為一系列復(fù)雜的酶反應(yīng)的結(jié)果。這一系列反應(yīng)的最終步驟之一為酶原凝血酶原轉(zhuǎn)化為活化的酶凝血酶。
已知凝血酶在血凝固中起著重要的作用。它激活血小板導(dǎo)致血小板聚集，將血纖蛋白原轉(zhuǎn)化為血纖蛋白單體，該單體自發(fā)聚合成血纖蛋白聚合物并且激活因子XIII，該因子依次交聯(lián)所述聚合物形成不溶性血纖蛋白。此外，凝血酶激活因子V和因子VIII導(dǎo)致“正反饋”自凝血酶原產(chǎn)生凝血酶。
通過抑制血小板的聚集以及血纖蛋白的形成和交聯(lián)，可以期待有效的凝血酶抑制劑將顯示抗血栓形成活性。此外，可以期待通過有效地抑制正反饋機(jī)制將加強(qiáng)抗血栓形成活性。
此外，已知給予凝血酶抑制劑的前藥可以產(chǎn)生如下方面的改善(a)給予那些抑制劑后的某些藥物動力學(xué)性質(zhì)；和(b)與那些抑制劑有關(guān)的某些副作用的流行。
Blomback等(J.Clin.Lab.Invest.24，增補(bǔ)107，59(1969))報道基于位于血纖蛋白原Aα鏈的裂解位點(diǎn)周圍的氨基酸序列的凝血酶抑制劑。在所討論的氨基酸序列中，這些作者建議三肽序列Phe-Val-Arg(P9-P2-P1，此后稱為P3-P2-P1序列)將是最有效的抑制劑。
從美國專利第4,346,078號和國際專利申請WO 93/11152中得知基于在P1-位上帶有α，ω-氨基烷基胍的二肽基衍生物的凝血酶抑制劑。也已經(jīng)報道了類似的、結(jié)構(gòu)相關(guān)的二肽基衍生物。例如，國際專利申請WO 94/29336公開了在P1-位上具有例如氨基甲基芐脒、環(huán)狀氨基烷基脒和環(huán)狀氨基烷基胍的化合物(國際專利申請WO97/23499公開了某些這類化合物的前藥)；歐洲專利申請0 648 780公開了在P1-位上具有例如環(huán)狀氨基烷基胍的化合物。
從歐洲專利申請0 468 231、0 559 046和0 641 779中得知基于肽基衍生物并在P1-位上也具有環(huán)狀氨基烷基胍(例如3-或4-氨基甲基-1-脒基-哌啶)的凝血酶抑制劑。
在歐洲專利申請0 185 390中首次公開了基于在P1-位上具有精氨醛的三肽基衍生物的凝血酶抑制劑。
最近，已經(jīng)報道了基于精氨醛的在P3位修飾的肽基衍生物。例如，國際專利申請WO 93/18060公開了在P3位的羥基酸，歐洲專利申請0 526 877公開了在P3位的脫氨基酸，歐洲專利申請0 542 525公開了在P3位的O-甲基扁桃酸的基于精氨醛的肽基衍生物。
也已知基于在P1位的親電酮的絲氨酸蛋白酶(例如凝血酶)抑制劑。例如，歐洲專利申請0 195 212公開了P1位的肽基α-酮基酯和酰胺，歐洲專利申請0 362 002公開了P1位的氟代烷基酰胺酮，歐洲專利申請0 364 344公開了P1位的α，β，δ-三酮基化合物，歐洲專利申請0 530 167公開了P1位的精氨酸的α-烷氧基酮衍生物。
從歐洲專利申請0 293 881中得知其它基于精氨酸和異硫脲鎓類似物的碳端硼酸衍生物的胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶的結(jié)構(gòu)不同的抑制劑。
最近，歐洲專利申請0 669 317和國際專利申請WO 95/35309、WO 95/23609、WO 96/25426、WO 97/02284、WO 97/46577、WO96/32110、WO 96/31504、WO 96/03374、WO 98/06740、WO 97/49404和WO 99/29664中已經(jīng)公開了基于肽基衍生物的凝血酶抑制劑。WO97/33576中已公開了凝血酶抑制劑的某些前藥。
WO 98/57932和WO 00/35869公開了基于在P3-位具有稠合的二-或三-環(huán)酸的肽基衍生物的凝血酶抑制劑和凝血酶抑制劑的前藥。
然而，仍然需要有效的胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶例如凝血酶的抑制劑。也需要具有良好的藥代動力學(xué)類型(如低清除率)、可口服生物利用、并且選擇性抑制凝血酶優(yōu)先于其它絲氨酸蛋白酶，尤其那些涉及止血的酶的化合物?？梢云诖@示對凝血酶競爭性抑制活性的化合物尤其可以用作抗凝血藥，因此用于治療血栓形成和相關(guān)的疾病。
式I化合物的“藥學(xué)上可接受的衍生物”包括藥學(xué)上可接受的鹽。合適的鹽包括無機(jī)酸(例如氫鹵酸)和有機(jī)酸(例如乙酸、甲磺酸或三氟乙酸)的加成鹽。
當(dāng)存在足夠數(shù)目的碳原子時，R2可以表示的烷氧基的烷基部分可為線性或分支的，為飽和的或不飽和的，為環(huán)狀、無環(huán)的或部分環(huán)狀/無環(huán)，和/或由O原子任選中斷。
R1和R2可以表示和可取代R2的鹵素基團(tuán)包括氟、氯、溴和碘。
縮寫列于本說明書的末尾。
可被提及的本發(fā)明化合物包括那些其中Y表示S(O)2的化合物。
本發(fā)明的優(yōu)選化合物包括那些其中R1表示氯；R2表示H、鹵素或C1-2烷氧基(后一個基團(tuán)由一個或多個鹵素(例如氟)基團(tuán)任選取代)的化合物。
本發(fā)明的更優(yōu)選化合物包括那些其中R1表示氯；和R2表示H、氯、OCHF2、OCF3或尤其是OCH3的化合物。
式I的優(yōu)選化合物包括下文描述的實(shí)施例的化合物，尤其是實(shí)施例1的化合物。
本發(fā)明也提供制備式I化合物的方法，該方法包括(i)例如在偶聯(lián)劑(例如EDC、DCC、HBTU、HATU、TBTU、PyBOP或草酰氯的DMF溶液)、合適的堿(例如吡啶、2，4，6-三甲基吡啶、DMAP、TEA或DIPEA)和合適的有機(jī)溶劑(例如二氯甲烷、乙腈或DMF)存在下，使式III化合物 其中Y、R1和R2如上文定義，與4-脒基芐基-2-氮雜環(huán)丁烷甲酰胺偶合(參見例如國際專利申請WO97/02284)；(ii)例如在偶聯(lián)劑(例如草酰氯的DMF溶液、EDC、DCC、HBTU、HATU、PyBOP或TBTU)、合適的堿(例如吡啶、DMAP、TEA、2，4，6-三甲基吡啶或DIPEA)和合適的有機(jī)溶劑(例如二氯甲烷、乙腈或DMF)存在下，使式IV化合物 其中Y、R1和R2如上文定義，與對-脒基芐胺偶合；或者(iii)例如在合適量的適宜氧化劑(例如mCPBA、過氧化氫或過一硫酸鉀)和合適的有機(jī)溶劑(例如CH2Cl2、甲醇、水或其混合物)存在下，并且任選在合適的質(zhì)子酸(例如乙酸)存在下，完全氧化(對其中Y為S(O)2的式I化合物)或部分氧化(對其中Y為S(O)的式I化合物)相應(yīng)的式V化合物， 其中R1和R2如上文定義。
技術(shù)人員將意識到在部分氧化的情況下，可得到立體異構(gòu)體的混合物，后者可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的技術(shù)(例如通過柱層析或手性層析)分離。
例如在上文描述的合成式I化合物(步驟(iii))的條件下，通過完全或部分氧化式VI化合物可制備式III化合物 例如在上文描述的合成式I化合物(參見例如步驟(i)和(ii))的條件下，通過使如上文定義的式III化合物與氮雜環(huán)丁烷-2-甲酸偶合可制備式IV化合物。
例如在上文描述的合成式I化合物(步驟(iii))的條件下，通過完全或部分氧化式VII化合物可制備式IV化合物 其中R1和R2如上文定義。
按照肽偶聯(lián)技術(shù)，例如以與上文所述的對于式I化合物類似的方式可制備式V化合物(參見例如步驟(i)和(ii))。如果需要，也可以這種方法制備式VII化合物。
采用已知和/或標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)可以得到式VI化合物。
例如，可通過式VIII化合物 其中R1和R2如上文定義，與以下化合物的反應(yīng)制備式VI化合物(a)例如在室溫或升高的溫度(例如100℃以下)下，在合適的有機(jī)溶劑(例如氯仿或二氯甲烷)存在下，并且如果必要，在合適的堿(例如TEA)和/或合適的催化劑體系(例如芐基氯化銨或碘化鋅)存在下，與式IX化合物R”CN IX其中R”表示H或(CH3)3Si，反應(yīng)，隨后例如在20℃(例如按照或者類似于由C.F.Bigge等在J.Med.Chem.(1993)36，1977中描述的方法)下，在酸(例如HCl或H2SO4)存在下水解，然后在堿性條件(例如在水和氫氧化鋰或氫氧化鉀存在下)下水解，得到游離酸；(b)例如在NaHSO3和水存在下，與NaCN或KCN反應(yīng)，隨后進(jìn)行水解；或者(c)例如在升高的溫度(例如室溫以上但低于100℃)下，在合適的堿(例如氫氧化鈉)存在下，并且如果需要，在合適的催化劑體系(例如芐基氯化銨)存在下，與氯仿反應(yīng)，隨后進(jìn)行水解。
通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)(例如通過采用手性層析介質(zhì)的層析法)可分離式VI化合物的對映體形式(即那些就CO2H基團(tuán)的α位C原子具有不同構(gòu)型取代基的化合物)。
或者，在本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的條件(例如在低溫(如0℃)下，采用例如商品試劑AD-mix-βTM，在合適的溶劑(例如叔丁醇)存在下，通過式X化合物 其中R1和R2如上文定義，的Sharpless立體有擇二羥基化，隨后氧化得到的中間體(例如在升高的溫度(如75℃)下，在空氣流和在丙酮/水中的Pt/C(5％)存在下)可制備式VI化合物。
采用已知的和/或標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)可以得到式VIII化合物。例如在合適的催化劑(例如三氟乙酸酐，質(zhì)子酸如H2SO4或路易斯酸如BF3)存在下，任選在合適的溶劑(例如CH2Cl2)存在下，通過環(huán)化式XI化合物 其中L1表示離去基團(tuán)，例如OH、C1-4烷氧基、C1-4酰氧基(由一個或者多個鹵原子任選取代)或鹵素，R1和R2如上文定義，可制備式VIII化合物。
可按照已知的技術(shù)制備式XI化合物。例如，例如在介于室溫與回流溫度之間的溫度下，在合適的堿(例如三乙胺或Cs2CO3)和合適的溶劑(例如乙酸乙酯或丙酮)存在下，通過式XII化合物 其中R1和R2如上文定義，與式XIII化合物 其中L2表示離去基團(tuán)如鹵素，Rx表示C1-6烷基，反應(yīng)，隨后在本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的條件(例如對其中L1表示OH的式XI化合物，通過在堿性條件下水解)下使ORx基團(tuán)轉(zhuǎn)化為L1基團(tuán)可制備式XI化合物。
式IX、X、XII和XIII化合物及其衍生物是可以買到的，是文獻(xiàn)中已知的，或者是可通過本文所述方法的類似方法，或者通過常規(guī)合成方法，按照標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)由易于得到的原料，采用合適的試劑和反應(yīng)條件(如下文所述)得到的。
可采用常規(guī)技術(shù)由它們的反應(yīng)混合物分離式I化合物。
采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的技術(shù)，可以引入和/或互變式I、III、IV、V、VI、VII、VIII、X、XI和XII的化合物中芳族環(huán)上的取代基。例如，通過與合適的鹵化劑反應(yīng)(如下文所述)，可以將鹵素引入芳族環(huán)和R2可表示的烷氧基的烷基部分中。
按照本發(fā)明，式I化合物的藥學(xué)上可接受的衍生物也包括式I化合物的“被護(hù)”衍生物和/或作為式I化合物的前藥的化合物。
在這方面，本發(fā)明另一方面提供如本文定義的式I化合物的衍生物，其為式IA化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽， 其中Y、R1和R2如上文定義；D1和D2獨(dú)立表示H、-OR7或R8，或者D1、D2和R3與它們連接的脒基一起形成式IIa、IIb、IIc、IId或IIe的環(huán)狀基團(tuán)， 其中波浪線表明與苯環(huán)的連接點(diǎn)；R3表示H、或者R3、D1和D2與它們連接的脒基一起形成式IIa、IIb、IIc、IId或IIe的環(huán)狀基團(tuán)；R4和R5獨(dú)立表示H或C1-4烷基；R6表示H、C1-6烷基(后一個基團(tuán)由一個或者多個鹵素任選取代)或C(O)OR12；R7表示H、C6-10芳基、C1-10烷基(后一個基團(tuán)由一個或者多個鹵素任選取代)、C1-3烷基苯基、-C(R9a)(R9b)R10、-C(O)R11a、-C(O)OR12、-C(O)N(R13)R14或-(CH2)n(O)mR15；R8表示-C(R9a)(R9b)R10、-C(O)R11b或-C(O)OR12；R9a和R9b在各種情況下獨(dú)立表示H或C1-6烷基；R10在各種情況下表示-OC(O)R16a、-OC(O)OR17、-N(R18a)C(O)OR17或-OC(O)N(R18b)R17；R11a和R11b在各種情況下獨(dú)立表示C6-10芳基、C1-3烷基苯基(后兩個基團(tuán)由一個或者多個選自C1-6烷基和鹵素的取代基任選取代)、-[C(R19a)(R19b)]pOC(O)R16b，或者R11a表示C1-17烷基(由C1-6烷氧基、C1-6酰氧基、氨基或鹵素任選取代)或者R11b表示C1-6烷基；R12在各種情況下表示C1-17烷基(由一個或者多個選自C1-6烷氧基、C1-6酰氧基、-Si(R20a)(R20b)(R20c)和鹵素的取代基任選取代)、C6-10芳基、C1-3烷基苯基(后兩個基團(tuán)由C1-6烷基、C1-6烷氧基、氰基或鹵素任選取代)、-[C(R19a)(R19b)]qOC(O)R16b或-CH2R21；R13表示H或C1-7烷基，或與R14一起表示C4-5亞烷基；R14表示C6-10芳基或C1-10烷基(后一個基團(tuán)由一個或者多個選自O(shè)H、鹵素、CO2H、C1-6烷氧基、C1-6酰氧基和C6-10芳基的取代基任選取代)，或者與R13一起表示C4-5亞烷基；R15表示由一個或者多個-OC(O)C(H)(R22)N(G)(Ga)基團(tuán)任選取代的C1-7烷基；R16a、R16b和R17在各種情況下獨(dú)立表示C6-10芳基或C1-17烷基(后一個基團(tuán)由一個或者多個選自-OH、鹵素、-CO2H、C1-6烷氧基、C1-6酰氧基和C6-10芳基的取代基任選取代)，或者R16b表示C1-6烷氧基(由一個或者多個選自C1-6烷基和鹵素的取代基任選取代)；R18a和R18b獨(dú)立表示H或C1-4烷基；R19a和R19b在各種情況下獨(dú)立表示H或C1-6烷基；R20a至R20c在各種情況下獨(dú)立表示C1-6烷基或苯基；R21表示結(jié)構(gòu)片段IIf R22表示C3-4烷基；G和Ga獨(dú)立表示H、氨基保護(hù)基團(tuán)，或者G和Ga一起表示氨基保護(hù)基團(tuán)；m表示0或1；n表示1、2或3；p表示3或4；q表示2或3，條件是(a)D1和D2都不表示H；和(b)當(dāng)D1和D2中的一個表示-OR7時，另一個表示H。
式IA化合物的合適的“藥學(xué)上可接受的鹽”包括無機(jī)酸(例如氫鹵酸)和有機(jī)酸(例如乙酸、甲磺酸或三氟乙酸)的加成鹽。
本發(fā)明化合物可表現(xiàn)出互變異構(gòu)。所有的互變異構(gòu)形式及其混合物包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。可被提及的具體互變異構(gòu)形式包括那些與脒官能團(tuán)中雙鍵的位置、與式IA化合物中取代基D1或D2的位置連接的形式。
為避免疑問，在式IA化合物中取代基D1和D2彼此完全獨(dú)立。例如，D1和D2可都由R8表示，其中在這兩種情況下，R8都表示-C(O)R11b(其中R11b在這兩種情況下都表示C1-6烷基)。然而，在這樣的情況下，C1-6烷基可以相同或不同。
式I和IA化合物也包含至少兩個不對稱碳原子，因此可表現(xiàn)出光學(xué)和/或非對映異構(gòu)現(xiàn)象。采用常規(guī)技術(shù)，例如層析法或分級結(jié)晶可分離所有的非對映異構(gòu)體。通過用常規(guī)的，例如分級結(jié)晶或HPLC技術(shù)分離所述化合物的外消旋或其它混合物可分離各種立體異構(gòu)體?；蛘?，通過在不引起外消旋或差向異構(gòu)作用的條件下，使合適的光學(xué)活性原料反應(yīng)；或者通過例如用純手性酸衍生，隨后通過常規(guī)方法(例如HPLC、硅膠層析)分離非對映體衍生物，可制備要求的光學(xué)異構(gòu)體。所有的立體異構(gòu)體包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
本文所用的術(shù)語“芳基”包括苯基、萘基(例如2-萘基)等。除非另外指明，芳基由一個或者多個選自C1-6烷基和鹵素的取代基任選取代。
當(dāng)存在足夠數(shù)目的碳原子時，式IA化合物中的烷基和亞烷基以及烷氧基的烷基部分、烷基苯基和酰氧基可以是線性的或分支的，可以是飽和的或不飽和的，可以是環(huán)狀的、無環(huán)的或部分環(huán)狀/無環(huán)的，和/或由O原子任選中斷。技術(shù)人員應(yīng)意識到，當(dāng)式IA化合物中的烷基為環(huán)狀且由氧中斷時，則它們表示含氧雜環(huán)，例如四氫呋喃基或(適當(dāng)時)四氫吡喃基。
式IA化合物中的鹵素包括氟、氯、溴和碘。
本文所用的術(shù)語“氨基保護(hù)基團(tuán)”包括在“Protective Groups inOrganic Synthesis”，第2版，TW Greene & Wutz，Wiley-Interscience(1991)中提及的基團(tuán)，特別是在該文獻(xiàn)的標(biāo)題為“Protection for theAmino”(參見第309-315頁)的一章的開頭索引的那些基團(tuán)，通過引用將該文獻(xiàn)的公開內(nèi)容結(jié)合到本文中作為參考。
因此，氨基保護(hù)基團(tuán)的具體實(shí)例包括(a)氨基甲酸酯基(例如甲基、環(huán)丙基甲基、1-甲基-1-環(huán)丙基甲基、二異丙基甲基、9-芴基甲基、9-(2-磺基)芴基甲基、2-呋喃基甲基、2，2，2-三氯乙基、2-鹵代乙基、2-三甲代甲硅烷基乙基、2-甲基硫代乙基、2-甲基磺?；一?、2(對甲苯磺?；?乙基、2-磷鎓基乙基、1，1-二甲基丙炔基、1，1-二甲基-3-(N，N-二甲基酰胺基)-丙基、1，1-二甲基-3-(N，N二乙基氨基)丙基、1-甲基-1-(1-金剛烷基)乙基、1-甲基-1-苯基乙基、1-甲基-1-(3，5-二甲氧基苯基)乙基、1-甲基-1-(4-聯(lián)苯基)乙基、1-甲基-1-(對苯基苯偶氮基)乙基、1，1-二甲基-2-鹵代乙基、1，1-二甲基-2，2，2-三氯乙基、1，1-二甲基-2-氰基乙基、異丁基、叔丁基、叔戊基、環(huán)丁基、1-甲基環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、1-甲基環(huán)己基、1-金剛烷基、異冰片基、乙烯基、烯丙基、肉桂基、苯基、2，4，6-三叔丁基苯基、間-硝基苯基、S-苯基、8-喹啉基、N-羥基哌啶基、4-(1，4-二甲基哌啶基)、4，5-二苯基-3-噁唑啉-2-酮、芐基、2，4，6-三甲基芐基、對-甲氧基芐基、3，5-二甲氧基芐基、對-癸氧基芐基、對-硝基芐基、鄰-硝基芐基、3，4-二甲氧基-6-硝基芐基、對-溴芐基、氯代芐基、2，4-二氯-芐基、對-氰基芐基、鄰-(N，N-二甲基酰胺基芐基)芐基、間-氯-對-酰氧基芐基、對-(二羥基硼基)芐基、對-(苯基偶氮)芐基、對-(對’-甲氧基苯基偶氮)芐基、5-苯并異噁唑基甲基、9-蒽基甲基、二苯基甲基、苯基(對-硝基苯基)甲基、二(2-吡啶基)甲基、1-甲基-1-(4-吡啶基)-乙基、異煙酰基或S-芐基氨基甲酸酯基)；(b)酰胺基(例如N-甲?；-乙?；?、N-氯代乙酰基、N-二氯代乙?；-三氯代乙?；-三氟代乙?；?、N-鄰-硝基苯基乙酰基、N-鄰-硝基苯氧基乙?；?、N-乙酰乙?；?、N-乙?；拎ゆf、N-3-苯基丙?；-3-(對-羥基苯基)丙?；-3-(鄰-硝基苯基)丙?；?、N-2-甲基-2-(鄰-硝基苯氧基)丙?；?、N-2-甲基-2-(鄰-苯基偶氮苯氧基)丙?；?、N-4-氯代丁?；?、N-異丁?；?、N-鄰硝基肉桂?；?、N-甲基吡啶?；?、N-(N’-乙酰基-甲硫氨?；?、N-(N’-苯甲?；交滨；?、N-苯甲酰基、N-對-苯基-苯甲酰基、N-對-甲氧基苯甲酰基、N-鄰-硝基苯甲?；騈-鄰-(苯甲酰氧基-甲基)苯甲酰基酰氨基)；(c)烷基(例如N-烯丙基、N-苯甲酰甲基、N-3-乙酰氧基丙基、N-(4-硝基-1-環(huán)己基-2-氧代-吡咯啉-3-基)、N-甲氧基甲基、N-氯代乙氧基甲基、N-芐氧基甲基、N-新戊酰氧基甲基、N-2-四氫吡喃基、N-2，4-二硝基苯基、N-芐基、N-3，4-二甲氧基芐基、N-鄰-硝基芐基、N-二(對-甲氧基苯基)甲基、N-三苯基甲基、N-(對-甲氧基苯基)二苯基甲基、N-二苯基-4-吡啶基甲基、N-2-吡啶甲基N’-氧化物或N-二苯并環(huán)庚基)；(d)氧膦基和磷?；?例如N-二苯基氧膦基、N-二甲基硫代氧膦基、N-二苯基硫代氧膦基、N-二乙基-磷酰基、N-二芐基磷?；騈-苯基磷?；?；(e)硫基(例如N-苯硫基、N-鄰-硝基苯硫基、N-2，4-二硝基苯硫基、N-五氯苯硫基、N-2-硝基-4-甲氧基苯硫基或N-三苯基甲基硫基)；(f)磺?；?例如N-苯磺酰基、N-對-甲氧基苯磺?；?、N-2，4，6-三甲基苯磺酰基、N-甲苯磺酰基、N-芐基磺?；-對-甲基芐基磺?；-三氟甲基磺?；騈-苯甲酰甲基磺?；?；和(g)N-三甲代甲硅烷基。優(yōu)選其中片段 為S-構(gòu)型的式I和IA化合物。
優(yōu)選其中片段 為R-構(gòu)型的式I和IA化合物。
以上兩個片段中鍵上的波浪線表明片段的結(jié)合位置。
以與式I化合物類似的方法，或者采用對制備式I化合物的方法適當(dāng)改進(jìn)的方法，可直接從式I化合物制備式IA化合物。在這方面，可用于制備式IA化合物的方法包括(1)對于其中D1和D2之一表示-OR7(其中R7表示H、C6-10芳基、C1-10烷基(其后一個基團(tuán)由一個或者多個鹵素任選取代)或C1-3烷基苯基)的式IA化合物，例如在40-60℃下，在合適的堿(例如TEA)和合適的有機(jī)溶劑(例如THF、CH3CN、DMF或DMSO)存在下，使式XIV的化合物 其中Y、R1和R2如上文定義，與式XV的化合物反應(yīng)，H2NORaXV其中Ra表示H、C6-10芳基、C1-10烷基(其后一個基團(tuán)由一個或者多個鹵素任選取代)或C1-3烷基苯基，任選在例如0℃下，在低級烷基(例如C1-6烷基)醇(例如乙醇)存在下，通過用氣態(tài)HCl預(yù)處理式XIV化合物，形成式XVI化合物， 其中Rb表示低級(例如C1-6)烷基，例如乙基，Y、R1和R2如上文定義，如果需要可分離該化合物；(2)對于其中D1和D2之一表示-OR7(其中R7表示H、C6-10芳基、C1-10烷基(其后一個基團(tuán)由一個或者多個鹵素任選取代)或C1-3烷基苯基)的式IA化合物，例如在室溫至回流溫度下，在合適的有機(jī)溶劑(例如TNF、CH3CN、DMF或DMSO)存在下，使其中D1和D2之一表示-C(O)OR12(例如-C(O)O-CH2CH2-Si(CH3)3)，另一個表示H的相應(yīng)式IA化合物與如上文定義的式XV化合物反應(yīng)，隨后在本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的條件下除去-C(O)OR12基團(tuán)；(3)對于其中D1或D2表示R8的式IA化合物，例如在0℃-室溫下，在合適的堿(例如NaOH)和合適的有機(jī)溶劑(例如THF)和/或水的存在下，使相應(yīng)的式I化合物或其中D1或D2(合適時)表示H的相應(yīng)式IA化合物與式XVII化合物反應(yīng)，L3-R8XVII其中L2表示離去基團(tuán)，例如鹵素或?qū)?硝基苯氧基，R8如上文定義；(4)對于其中D1和D2之一表示-OR7(其中R7不表示H)的式IA化合物，例如在0℃-回流溫度下，任選在合適的溶劑(例如DCM、THF、MeCN或DMF)和合適的堿(例如Et3N或吡啶)存在下，使其中D1和D2之一表示-OH的相應(yīng)式IA化合物與式XVIII化合物反應(yīng)，L3-R7aXVIII其中R7a表示如上文定義的R7，除了其不表示H外，L3如上文定義；或者(5)對于其中D1和D2之一表示H而另一個表示-C(R9a)(R9b)R10，(其中R10表示-OC(O)R16a、-OC(O)OR17或-OC(O)N(R18b)R17)的式IA化合物，例如在上文描述的條件(例如在上述步驟(4)中)下，使相應(yīng)的式XIX化合物 其中Y、R1、R2、R9a和R9b如上文定義，與式XX化合物反應(yīng)，L3-C(O)RcXX其中Rc表示R16a、-OR17或-N(R18b)R17，L3、R16a、R17和R18b如上文定義。
可以與式I化合物類似的方式制備式XIV化合物，例如在如上文所述合成式I化合物的那些條件下，通過使對-氰基芐胺與如上文定義的式IV化合物偶合(參見例如步驟(i)和(ii))。
可以例如在本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的條件下，通過相應(yīng)的式I化合物與過量的式XXI化合物反應(yīng)R9aC(O)R9bXXI其中R9a和R9b如上文定義，制備式XIX化合物。
例如，在室溫下，在合適的堿(例如三乙胺)和合適的有機(jī)溶劑(例如二氯甲烷)存在下，通過其中D1表示OH的相應(yīng)式IA化合物與式XXII化合物反應(yīng)，HalC(O)CH(R4)Hal XXII其中Hal表示鹵素(例如氯)，R4如上文定義，隨后在合適的有機(jī)溶劑(例如THF)中，在合適的堿(例如氫化鈉)存在下，例如通過回流使得到的中間體環(huán)化，可制備其中D1、D2和D3與它們連接的脒基一起表示IIa基團(tuán)的式IA化合物。
例如，在室溫下，在合適的堿(例如三乙胺)和合適的有機(jī)溶劑(例如乙醇)存在下，通過相應(yīng)的式XXIII化合物 其中Y、R1和R2如上文定義，與式XXIV化合物反應(yīng)，H2NCH(R4)C(O)ORbXXIV其中Rb和R4如上文定義，可制備其中D1、D2和R3與它們連接的脒基一起表示IIb基團(tuán)的式IA化合物。
例如，在室溫下，通過其中D1表示OH的相應(yīng)式IA化合物與式XXV的化合物反應(yīng)，R4CHO XXV其中R4如上文定義，隨后在本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的條件下，通過使得到的中間體氧化，可制備其中D1、D2和R3與它們連接的脒基一起表示IIc基團(tuán)的式IA化合物。
例如，在室溫下，在合適的堿(例如DIPEA)和合適的溶劑(例如二氯甲烷)存在下，通過環(huán)化式XXVI化合物 其中Hal如上文定義(尤其是碘)，Y、R1、R2、R4、R5和R6如上文定義，可制備其中D1、D2和R3與它們連接的脒基一起表示IId基團(tuán)的式IA化合物。
例如，在室溫下，在合適的堿(例如三乙胺)和合適的有機(jī)溶劑(例如二氯甲烷)存在下，通過式XXVII化合物 其中Y、R1、R2和R6如上文定義，與式XXVIII化合物反應(yīng)，Hal-C(O)OC(R4)(R5)Hal XXVIII其中Hal、R4和R5如上文定義，可制備式XXVI化合物。優(yōu)選在式XXVIII化合物中Hal表示氯。在這種情況下，所形成的式XXVI中間體包括氯代基，優(yōu)選在環(huán)化前采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的技術(shù)(例如用NaI反應(yīng))將其轉(zhuǎn)化為碘代基。
例如在回流溫度下，通過相應(yīng)的式XXIX化合物 其中Y、R1、R2和R6如上文定義，與甲醛的水溶液反應(yīng)，可制備其中D1、D2和R3與它們連接的脒基一起表示IIe基團(tuán)的式IA化合物。
式XV、XVII、XVIII、XX、XXI、XXII、XXIII、XXIV、XXV、XXVII、XXVIII和XXIX的化合物及其衍生物是可以買到的，是文獻(xiàn)中已知的，或者可通過本文描述的類似方法得到，或者通過常規(guī)合成方法，按照標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，采用合適的試劑和反應(yīng)條件(例如在上文中描述的)由易于獲得的原料制備。
采用常規(guī)技術(shù)可以由它們的反應(yīng)混合物中分離式IA化合物。
采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的技術(shù)，在式IA、XIV、XV、XVI、XVII、XVIII、XIX、XX、XXI、XXIII、XXVI、XXVIII和XXIX的化合物中的芳族和/或非芳族、碳環(huán)和雜環(huán)上的取代基可被引入和/或互變。例如，可將羥基烷基化以得到烷氧基或者?；缘玫锦Ｑ趸?，可將烷氧基和酰氧基水解得到羥基。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)意識到在以上描述的方法(有關(guān)式I和IA化合物)中，中間體化合物的官能團(tuán)可能需要由保護(hù)基團(tuán)保護(hù)。
要求保護(hù)的官能團(tuán)包括羥基、氨基、醛、酮、2-羥基羧酸和羧酸。羥基的合適保護(hù)基團(tuán)包括三烷基甲硅烷基或二芳基烷基甲硅烷基(例如叔丁基二甲代甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基或三甲代甲硅烷基)和四氫吡喃基。羧酸的合適保護(hù)基團(tuán)包括C1-6烷基或芐基酯。氨基和脒基的合適保護(hù)基團(tuán)包括叔丁氧羰基、芐氧羰基或2-三甲代甲硅烷基乙氧羰基(Teoc)。脒基氮也可被羥基或烷氧基保護(hù)，并且可以單-或二保護(hù)。醛和酮可通過與乙二醇反應(yīng)而分別以縮醛和縮酮的形式被保護(hù)。2-羥基羧酸可通過與丙酮縮合而被保護(hù)。
官能團(tuán)的保護(hù)和脫保護(hù)可以在偶合之前或之后發(fā)生，或者可在上述流程中任何其它反應(yīng)之前或之后發(fā)生。
按照本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的且在下文中描述的技術(shù)可除去保護(hù)基團(tuán)。
本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)意識到，為了以可選擇的和在某些情況下更便利的方式得到式I或式IA化合物，可以不同的順序進(jìn)行上述的各步驟，和/或可在總路線的不同階段進(jìn)行各反應(yīng)(即結(jié)合具體的反應(yīng)，取代基可以加到此前提及的化合物的不同中間體上和/或化學(xué)轉(zhuǎn)化可以在其上發(fā)生)。該過程可能需要也可能不需要保護(hù)基團(tuán)。
例如，對于式IA化合物的合成尤其如此。在該情況下，采用在上文中描述的步驟(參見，例如以上步驟(1)-(5))，可在總合成的早期階段引入其不表示H的D1或D2基團(tuán)。另外，在式I化合物的合成中，在以上描述的偶合步驟前，在式III和IV化合物的羧酸的α位的-OH基團(tuán)可能需要被保護(hù)。
因此，所涉及化學(xué)的次序和類型將決定是否需要保護(hù)基、保護(hù)基的類型以及用于完成該合成的順序。
保護(hù)基的用途在由JWF McOmie編輯的“Protective Groups inOrganic Chemistry”(Plenum Press(1973))和“Protective Group inOrganic Synthesis”，第3版，TW Greene & PGM Wutz，Wiley-Interscience(1991))中有全面的描述。
采用標(biāo)準(zhǔn)的脫保護(hù)技術(shù)(例如氫化)可以將式I和IA化合物的保護(hù)衍生物化學(xué)轉(zhuǎn)化為式I和IA化合物。醫(yī)學(xué)和藥學(xué)用途本發(fā)明化合物本身可以具有藥理活性?？梢跃哂性摶钚缘谋景l(fā)明化合物包括(但不限于)式I化合物。
然而，本發(fā)明的其它化合物(包括式IA化合物)可能不具有此類活性，但可以胃腸外或口服給予，此后在體內(nèi)代謝形成具有藥理活性的化合物(包括但不限于式I的相應(yīng)化合物)。因此這類化合物(也包括可以具有某些藥理活性，但該活性適當(dāng)?shù)陀谒鼈兇x產(chǎn)生的“活性”化合物的那些化合物)可以稱作所述活性化合物的“前藥”。
因此，本發(fā)明的化合物是有用的，因?yàn)樗鼈兙哂兴幚砘钚院?或口服或胃腸外給藥后在體內(nèi)代謝形成具有藥理活性的化合物。因此，本發(fā)明化合物適合作為藥物。
因此，本發(fā)明的另一個方面提供用作藥物的本發(fā)明化合物。
特別是，本發(fā)明化合物是本身是有效的凝血酶抑制劑和/或(例如在前藥的情況下)在給藥后代謝形成有效的凝血酶抑制劑，例如在下述試驗(yàn)中所證實(shí)的。
“凝血酶抑制劑的前藥”包括在口服或胃腸外給藥后，在實(shí)驗(yàn)可檢測量下并在預(yù)定的時間(例如約1小時)內(nèi)形成凝血酶抑制劑的化合物。
因此，期待將本發(fā)明化合物用于那些需要抑制凝血酶的疾病中。
因此，本發(fā)明的化合物適用于治療和/或預(yù)防動物包括人的血液和組織中血栓形成和凝固性過高。
已知凝固性過高可以導(dǎo)致血栓栓塞病?？梢蕴峒暗呐c凝固性過高和血栓栓塞病有關(guān)的癥狀包括遺傳性或獲得性激活蛋白C抗性，例如因子V-突變(因子V Leiden)以及抗凝血酶III、蛋白C、蛋白S或肝素輔因子II的遺傳性或獲得性缺乏。其它已知與凝固性過高和血栓栓塞病有關(guān)的癥狀包括循環(huán)抗磷脂抗體(Lupus抗凝藥)、高胱氨酸尿癥(homocysteinemi)、肝素誘導(dǎo)的血小板減少癥和纖維蛋白溶解缺陷。因此，本發(fā)明化合物適用于這些癥狀的療效性和/或預(yù)防性治療。
本發(fā)明化合物還適用于治療其中有不合乎需要的過量的凝血酶而無凝固性過高跡象的病癥，例如在神經(jīng)變性疾病例如Alzheimer病中的癥狀。
可以提及的具體病癥包括療效性和/或預(yù)防性治療靜脈血栓形成和肺栓塞、動脈血栓形成(例如在心肌梗塞、不穩(wěn)定性心絞痛、基于血栓形成的中風(fēng)和外周動脈血栓形成)以及通常在房顫期間來自于心房或在透壁心肌梗塞后來自于左心室或由充血性心力衰竭引起的系統(tǒng)性栓塞。
此外，期待本發(fā)明化合物具有在預(yù)防血栓溶解、經(jīng)皮經(jīng)腔血管成形術(shù)(PTA)和冠脈旁路手術(shù)后的再阻塞(即血栓形成)；防止在顯微手術(shù)和普通血管手術(shù)后再次血栓形成中的用途。
其它適應(yīng)癥包括療效性/或預(yù)防性治療由細(xì)菌、多發(fā)性損傷、中毒或任何其它機(jī)制引起的播散性血管內(nèi)凝血；當(dāng)血液與體內(nèi)的異質(zhì)表面例如血管移植物、血管斯滕特固定膜、血管導(dǎo)管、機(jī)械和生物的修復(fù)瓣膜或任何其它的醫(yī)療裝置接觸時抗凝藥處理；和當(dāng)血液在例如使用心-肺機(jī)的心血管手術(shù)期間或在血液透析中與體外的醫(yī)療裝置接觸時抗凝藥處理。
除了其在血凝固過程中的作用外，已知凝血酶激活大量的細(xì)胞(例如中性白細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞)。因此，本發(fā)明化合物也可用于療效性和/或預(yù)防性治療特發(fā)性和成人呼吸窘迫綜合征、放療或化療治療后肺纖維化、敗血癥性休克、敗血癥、炎性反應(yīng)(包括但不限于水腫)、急性或慢性動脈粥樣硬化癥例如冠狀動脈疾病、腦動脈疾病、外周動脈疾病、再灌注損傷和經(jīng)皮經(jīng)腔血管成形術(shù)(PTA)后再狹窄。
抑制胰蛋白酶/或凝血酶的本發(fā)明化合物也可以用于治療胰腺炎。
本發(fā)明的另一個方面提供治療其中需要抑制凝血酶的癥狀的方法，該方法包括給予患有或者易患該癥狀的人治療有效量的本發(fā)明的化合物。
本發(fā)明的化合物一般可以口服、靜脈內(nèi)、皮下、向頰、直腸、經(jīng)皮、鼻腔、氣管、支氣管、通過任何其它的胃腸外的途徑或經(jīng)吸入，以藥學(xué)上可接受的劑型中含有游離堿或藥學(xué)上可接受的、非毒性有機(jī)酸或無機(jī)酸加成鹽形式的活性化合物的藥用制劑形式給予。根據(jù)所述疾病、所治療的患者和給藥途徑，可以按不同的劑量給予所述組合物。
本發(fā)明化合物也可以與任何具有不同作用機(jī)理的抗血栓形成藥聯(lián)合和/或同時給藥，例如抗血小板藥乙酰水楊酸、噻氯匹定、氯吡格雷、血栓烷受體和/或合成酶抑制劑、血纖蛋白原受體拮抗劑、前列環(huán)素模擬物、磷酸二酯酶抑制劑、ADP-受體(P2T)拮抗劑和羧肽酶U(CPU)的抑制劑。
本發(fā)明化合物在治療血栓形成疾病尤其是心肌梗塞時還可以與血栓溶解劑例如組織溶酶原激活物(天然、重組或修飾)、鏈激酶、尿激酶、尿激酶原、茴香?；苊冈?鏈激酶激活物復(fù)合物(APSAC)、動物唾腺溶酶原激活物等聯(lián)合和/或同時給藥。
因此，本發(fā)明的另一個方面提供包含以與藥學(xué)上可接受的輔劑、稀釋劑或載體的混合物形式的本發(fā)明的化合物的藥用制劑。
本發(fā)明化合物在治療人時的合適日劑量為經(jīng)口給藥大約0.001-100mg/kg體重，胃腸外給藥0.001-50mg/kg體重。
本發(fā)明的化合物本身或其所代謝產(chǎn)生的化合物具有更有效、毒性更低、作用更長久的優(yōu)點(diǎn)，具有比先有技術(shù)中已知的化合物更廣泛的活性、更有效、產(chǎn)生的副作用更小、更容易吸收或者具有更好的藥代動力學(xué)類型或具有其它有用的藥理學(xué)、物理學(xué)或化學(xué)性質(zhì)。生物學(xué)試驗(yàn)可以使用下述測試方法。試驗(yàn)A測定凝血酶凝固時間(TT)將所述抑制劑溶液(25μl)與血漿(25μl)溫育3分鐘。然后，加入在pH7.4的緩沖液中的人凝血酶(T 6769；Sigma Chem.Co.或Hematologic Technologies)(25μl，4.0NIH單位/ml)并在自動裝置(KC10；Amelung)中測定該凝固時間。
所述凝血酶凝固時間(TT)表示為絕對值(秒)以及不含有抑制劑的TT(TT0)與含有抑制劑的TT(TTi)的比值。將所述比值(范圍1-0)對抑制劑的濃度(log轉(zhuǎn)換)作圖并且根據(jù)以下的方程式擬合為S形的劑量-反應(yīng)曲線y＝a/[1+(x/IC50)s]其中a＝最大范圍，即1；s＝該劑量-反應(yīng)曲線的斜率；IC50＝使凝固時間加倍的抑制劑濃度。使用GraFit第3版的軟件程序在PC上進(jìn)行計算，設(shè)定方程等于于0開始，規(guī)定結(jié)束＝1(Erithacus Software，Robin Leatherbarrow，Imperial College of Science，London，UK)。試驗(yàn)B采用生色、自動(Robotic)測試測定凝血酶抑制采用生色底物法，在Plato 3300自動微量培養(yǎng)板處理器(Rosys AG，CH-8634 Hombrechtikon，Switzerland)中，使用96孔、半體積微量滴定板(Costar，Cambridge，MA，USA；目錄號3690)測定所述凝血酶抑制劑的效能。采用DMSO以1∶3(24+48μl)系列稀釋試驗(yàn)物質(zhì)在DMSO(72μl)中的貯備液(0.1-1mmol/L)得到十種不同的濃度，作為樣品在本測試中分析。用124μl測試緩沖液稀釋2μl的試驗(yàn)樣品，加入12μl生色底物在測試緩沖液中的溶液(S-2366，Chromogenix，Mǒlndal，Sweden)和最終12μlα-凝血酶在測試緩沖液中的溶液(人α-凝血酶，Sigma Chemical Co.或Hematologic Technologies)并且混合樣品。其最終測試濃度為試驗(yàn)物質(zhì)0.00068-13.3μmol/L，S-2366 0.30mmol/L，α-凝血酶0.020 NIHU/ml。使用在40分鐘的37℃溫育期間線性吸光度遞增，以便于計算當(dāng)與無抑制劑的空白對比時的試驗(yàn)樣品的百分抑制率。由log濃度對％抑制率曲線計算相應(yīng)于引起凝血酶活性50％抑制率的抑制劑濃度的IC50-自動測定值。試驗(yàn)C對于人凝血酶的抑制常數(shù)Ki的測定使用生色底物法，于37℃在Cobas Bio離心分析儀(Roche，Basel，Switzerland)上進(jìn)行，完成Ki測定。三種不同的底物濃度下，測定在人α-凝血酶與各種濃度的試驗(yàn)化合物溫育后殘余酶活性，測定結(jié)果以在405nm下吸光度變化表示。
將試驗(yàn)化合物溶液(100μl；通常在含有BSA 10g/L的緩沖液或鹽水中)與200μl 人α-凝血酶(Sigma Chemical Co)在含有BSA(10g/L)的測試緩沖液(0.05mol/L Tris-HCl pH7.4，用氯化鈉調(diào)節(jié)離子濃度為0.15)中混合并且作為在Cobas Bio中的樣品分析。將60μl樣品以及20μl水加入到320μl的測試緩沖液中的底物S-2238(Chromogenix AB，Mǒlndal，Sweden)中，并且監(jiān)測吸光度變化(ΔA/分鐘)。S-2238的最終濃度為16、24和50μmol/L，凝血酶的最終濃度為0.125NIH U/mL。
使用穩(wěn)定態(tài)反應(yīng)速率構(gòu)建Dixon曲線即抑制劑濃度對1/(ΔA/分鐘)的圖。對于可逆、競爭性抑制劑而言，對于不同底物濃度的數(shù)據(jù)點(diǎn)一般形成直線，其在x處的截距為-Ki。試驗(yàn)D測定激活部分促凝血酶原激酶時間(APTT)用由Stago制備的試劑PTT Automated 5，在收集的正常人檸檬酸化的血漿中測定APTT。將所述抑制劑加入到該血漿(10μl抑制劑溶液比90μl血漿)中，與所述APTT試劑溫育3分鐘，然后加入100μl氯化鈣溶液(0.025M)，并且根據(jù)該試劑制造商的說明使用血凝固分析儀KC10(Amelung)測定APTT。
所述凝固時間表示為絕對值(秒)以及不加抑制劑的APTT(APTT0)與加入抑制劑的APTT(APTTi)的比值。將所述比值(范圍1-0)對抑制劑的濃度(log轉(zhuǎn)換)作圖并且根據(jù)以下方程擬合為S形的劑量-反應(yīng)曲線y＝a/[1+(x/IC50)s]其中a＝最大范圍，即1；s＝該劑量-反應(yīng)曲線的斜率；和IC50＝使凝固時間加倍的抑制劑濃度。使用GraFit第3版的軟件程序在PC上進(jìn)行計算，設(shè)定方程等于于0開始，規(guī)定結(jié)束＝1(Erithacus Software，Robin Leatherbarrow，Imperial College of Science，London，UK)。
IC50APTT定義為使激活部分促凝血酶原激酶時間加倍的人血漿中抑制劑的濃度。試驗(yàn)E測定體內(nèi)凝血酶時間檢測清醒大鼠在口服或胃腸外給予溶解在乙醇∶SolutolTM∶水(5∶5∶90)中的式I化合物后凝血酶的抑制，在實(shí)驗(yàn)前一或兩天為該大鼠安放導(dǎo)管以便從頸動脈采血。在實(shí)驗(yàn)的當(dāng)天，在給予化合物后的固定時間采血樣到含有1份檸檬酸鈉溶液(0.13mol/L)和9份血的塑料試管中。離心該試管以便得到貧血小板血漿。如下所述使用該血漿測定凝血酶時間或ecarin凝固時間(ECT)。
用100μl 0.9％鹽水稀釋100μl檸檬酸化的大鼠血漿，通過加入在100μl pH7.4緩沖溶液中的人凝血酶(T 6769，Sigma Chem.Co.USA或Hematologic Technologies)或ecarin(Pentapharm)引起血漿凝固。在自動裝置(KC 10，Amelung，Germany)中測定所述凝固時間。
當(dāng)給予式I的“前藥”化合物(如式IA的“前藥”化合物)時，通過使用使收集的檸檬酸化的大鼠血漿中的凝血酶時間或ecarin凝固時間與相應(yīng)于溶解在鹽水中的“活性”凝血酶抑制劑的已知濃度相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，評估大鼠血漿中式I的合適活性凝血酶抑制劑的濃度。
基于評估的大鼠中活性凝血酶抑制劑的血漿濃度(假定凝血酶時間或ECT延長是由上述化合物引起的)，使用梯形法則并外推數(shù)據(jù)到無窮大，計算口服和/或胃腸外給予相應(yīng)的式I前體化合物后曲線下的面積(AUCpd)。
如下計算口服或胃腸外給予所述前藥后活性凝血酶抑制劑的生物利用率[(AUCpd/劑量)/(AUC活性，胃腸外/劑量)]×100其中AUC活性，胃腸外代表如上所述胃腸外給予清醒大鼠相應(yīng)的活性凝血酶抑制劑后獲得的AUC。試驗(yàn)F測定來自體內(nèi)尿中凝血酶時間通過測定來自體內(nèi)尿中凝血酶時間(假定凝血酶時間延長是由上述化合物引起的)，估計口服或胃腸外給予溶解在乙醇∶SolutolTM∶水(5∶5∶90)中的本發(fā)明“前藥”化合物后，尿中所排泄的“活性”凝血酶抑制劑的量。
將清醒大鼠置于代謝籠中，在口服給予本發(fā)明的化合物后分別收集尿和糞便24小時。按如下所述方法測定所收集尿中凝血酶時間。
將收集的正常檸檬酸化的人血漿(100μl)與濃的大鼠尿或其鹽水稀釋液溫育1分鐘。然后，通過給予緩沖溶液(pH7.4；100μl)中的人凝血酶(T 6769，Sigma Chem Company)引發(fā)血漿凝固。在自動裝置(KC10；Amelung)中測定該凝固時間。
通過使用使收集的正常檸檬酸化的人血漿中的凝血酶時間與溶解在濃的大鼠尿(或其鹽水稀釋液)中的上述活性凝血酶抑制劑的已知濃度相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)曲線估計大鼠尿中活性凝血酶抑制劑的濃度。通過用估計的大鼠尿中的上述活性抑制劑的平均濃度乘以24小時內(nèi)總的大鼠排尿量，可以計算出在所述尿中排泄的活性抑制劑的量(量pd)。
如下計算口服或胃腸外給予所述前藥后活性凝血酶抑制劑的生物利用率[(量pd/劑量)/(量活性，胃腸外/劑量)]×100其中量活性，胃腸外代表如上所述胃腸外給予清醒大鼠相應(yīng)的活性凝血酶抑制劑后在尿中所排泄的量。試驗(yàn)G體外前藥化合物的代謝活化于37℃下，將式IA的前藥化合物與肝微粒體或由人或大鼠肝勻漿制備的10000g(指離心速度)上清液部分(即s9部分)溫育。在所述溫育液中總的蛋白質(zhì)濃度為1或3mg/ml(溶解在0.05mol/L TRIS緩沖液(pH7.4)中)，同時存在輔因子NADH(2.5mmol/L)和NADPH(0.8mmol/L)。溫育液的總體積為1.2ml。初始的前藥濃度為5或10μmol/L。在開始溫育后以超過60分鐘的定期間隔從溫育液中收集樣品。將來自所述溫育液的樣品(25μl)與等體積的人或大鼠血漿和適量的凝血酶混合，在凝固儀(KC 10；Amelung)上測定凝固時間(即凝血酶時間)。通過使用使收集的檸檬酸化的人或大鼠血漿中凝血酶時間與相應(yīng)的“活性凝血酶抑制劑”的已知濃度相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)曲線估計所形成的“活性”凝血酶抑制劑的量。
或者，通過使用LC-MS估計“活性”凝血酶抑制劑的量；或除使用上述方法外，還通過使用LC-MS估計“活性”凝血酶抑制劑的量。試驗(yàn)H大鼠血漿清除率的測定在雄性Sprague Dawley大鼠上評價血漿清除率。將所述化合物溶于水中并作為皮下大劑量注射液以4μmol/kg的劑量給藥。給藥后以高達(dá)5小時的頻繁間隔收集血樣。將血樣離心并自血細(xì)胞分離血漿并將其轉(zhuǎn)移至裝有檸檬酸鹽(10％最終濃度)的管形瓶中。然后通過使用凝血儀(KC10；Amelung)在各血漿樣品中測定ecarin凝固時間(ECT)。通過使用使收集的檸檬酸化血漿樣品中ECT與所述化合物的已知濃度相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)曲線測定各樣品中的血漿濃度。使用log/線性梯形法則并外推到無限時間，評價血漿濃度-時間曲線下的面積。然后如下測定所述化合物的血漿清除率(CL)CL＝劑量/AUC以mL/分鐘/kg報道這些值。試驗(yàn)I活性凝血酶抑制劑的體外穩(wěn)定性測定按照內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)操作步驟，自Sprague-Dawley大鼠和人肝樣品制備肝微粒體。在輔因子NADH(2.5mmol/L)和NADPH(0.8mmol/L)存在下，于37℃下以3mg/mL在pH7.4的0.05mol/L TRIS緩沖液中的總微粒體蛋白濃度溫育所述化合物?；衔锏淖畛鯘舛葹?或10μmol/L。溫育開始后長達(dá)60分鐘采樣用以分析。通過加入相當(dāng)于總樣品體積3.3％的20％肉豆蔻酸，迅速停止收集的樣品中的酶活性?；衔锏臐舛缺３?最終濃度)60分鐘。采用零時間收集的樣品作為參比物(起始濃度)，通過LCMS測定樣品。如下計算降解的凝血酶抑制劑的％ 試驗(yàn)J動脈血栓形成模型通過將三氯化鐵(FeCl3)局部應(yīng)用于頸動脈引起血管損傷。腹膜內(nèi)注射戊巴比妥鈉(80mg/kg；Apoteksbolaget；Umea，Sweden)麻醉大鼠，隨后在整個實(shí)驗(yàn)過程中持續(xù)灌輸(12mg/kg/小時)。通過外部加熱在整個實(shí)驗(yàn)過程中將大鼠體溫維持在38℃。實(shí)驗(yàn)以5分鐘控制期開始。5分鐘后，靜脈給予人125I-血纖蛋白原(80kBq；IM53；AmershamInternational，Buckinghamshire，UK)并將其用作隨后向血栓中引入血纖蛋白(原)的標(biāo)記。將頸動脈片段的近端放入縱向開口的塑料管(6mm；Silastic；Dow Corning，MI，USA)中，該塑料管中裝有浸泡了三氯化鐵(2μl；55％ w/w；Merck，Darmstadt，Germany)的濾紙(直徑3mm；1F；Munktell，Grycksbo，Sweden)。將左頸動脈暴露于FeCl310分鐘，然后從塑料管中移出并浸泡在鹽水中。50分鐘后，移出頸動脈并用鹽水沖洗。注射125I-血纖蛋白原10分鐘后以及在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，也采參比血樣以測定血液125I-活性。在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的同一天，在γ計數(shù)器(1282Compugamma；LKB Wallac Oy，Turku，F(xiàn)inland)中測量參比血樣和血管片段中的125I-活性。血栓體積被測定為引入血管片段中的125I-活性相對于血中的125I-活性的量(cpm/mg)。
實(shí)施例借助以下實(shí)施例闡述本發(fā)明。如果沒有另外指明，氨基酸Aze被定義為S-異構(gòu)體。如果沒有另外指明，實(shí)施例作為非對映體得到。
也分離雙(4-氯-2-甲氧基苯基)二硫化物(1.7g，4.9mmol)(見上)。將該物質(zhì)溶于THF∶EtOH(80mL，1∶1)中并在N2(g)下攪拌。加入硼氫化鈉(0.38g，10mmol)在2M NaOH水溶液(2mL)和水(10mL)中的溶液。黃色消失。在室溫下1小時后，加入3-溴代丙酸乙酯(1.3mL，10mmol)，導(dǎo)致放出氣體并形成白色沉淀。攪拌過夜后，真空除去溶劑，并將殘余物轉(zhuǎn)移至含有水和二氯甲烷的分液漏斗中。干燥(MgSO4)有機(jī)相，真空濃縮，得到另外2.36g(88％)為黃色油的副標(biāo)題化合物，幾小時后固化。1H NMR(400 MHz；CDCl3)δ7.29(d，1H)，6.94(dd，1H)，6.87(d，1H)，4.17(q，2H)，3.92(s，3H)，3.15(t，2H)，2.61(t，2H)，1.18(t，3H)。(ii)3-(4-氯-2-甲氧基苯硫基)丙酸向3-(4-氯-2-甲氧基苯硫基)-丙酸乙酯(2.31g，8.41mmol；參見以上步驟(i))在THF(50mL)中的冰/水冷卻的溶液中加入氫氧化鋰單水合物(0.43g，10mmol)在水(25mL)中的溶液。使溫度緩慢升至環(huán)境溫度過夜。真空除去THF，用乙醚洗滌殘余物，用2M HCl水溶液酸化，然后用乙醚萃取。用飽和碳酸氫鈉水溶液萃取合并的醚部分。用HCl水溶液小心酸化，得到沉淀，將其濾出并風(fēng)干。產(chǎn)量1.71g(82％)。MS(m/z)245(M-1)-。(iii)6-氯-8-甲氧基-4-二氫苯并噻喃酮在N2(g)下，向3-(4-氯-2-甲氧基苯硫基)丙酸(1.46g，5.92mmol；參見以上步驟(ii))在二氯甲烷(50mL)中的溶液/懸浮液中加入三氟化硼二甲基醚合物(1.4mL，15mmol)和三氟乙酸酐(2.1mL，15mmol)。在室溫下2.5小時后，用水(2mL)猝滅反應(yīng)物，然后用更多的水洗滌。當(dāng)用飽和碳酸氫鈉水溶液進(jìn)一步洗滌時，深綠色消失。干燥(MgSO4)，真空除去溶劑，得到為黃色固體的副標(biāo)題化合物。產(chǎn)量1.19g(88％)。1H NMR(300 MHz；CDCl3)δ 7.73(d，1H)，6.92(d，1H)，3.91(s，3H)，3.21(m，2H)，2.95(m，2H)(iv)6-氯-4-羥基-8-甲氧基二氫苯并噻喃-4-基-甲酸乙酯在N2(g)下，向6-氯-8-甲氧基-4-二氫苯并噻喃酮(2.24g；9.79mmol；參見以上步驟(iii))和碘化鋅(0.078g；0.24mmol)在無水二氯甲烷(20mL)中的攪拌的溶液/懸浮液中加入三甲代甲硅烷基氰化物(1.35mL；10.1mmol)。在室溫下2天后，將反應(yīng)混合物緩慢加入到攪拌的冰/水冷卻的純乙醇(50mL)(在0℃下用HCl(g)預(yù)飽和)中。之后，移去冷卻浴并使用反相HPLC監(jiān)測反應(yīng)。在室溫下2小時后，真空除去溶劑。把殘余物溶于THF(40mL)和H2SO4(水溶液；0.5M；40mL)中并攪拌過夜。減壓濃縮(除去THF)后，用EtOAc萃取并真空除去溶劑，得到3.7g粗品油。使用制備反相HPLC(乙腈0.1M乙酸銨水溶液)純化，用二氯甲烷萃取適當(dāng)?shù)牟糠趾?，得到為油的副?biāo)題化合物，其緩慢結(jié)晶。產(chǎn)量2.26g(76％)。1H NMR(300MHz；CDCl3)δ6.80(d，1H)，6.73(d，1H)，4.20-4.35(m，2H)，3.98(s，1H)，3.87(s，3H)，3.19(m，1H)，2.98(m，1H)，2.27-2.42(m，2H)，1.23(t，3H)(v)6-氯-4-羥基-8-甲氧基二氫苯并噻喃-4-基-甲酸向6-氯-4-羥基-8-甲氧基二氫苯并噻喃-4-基-甲酸乙酯(2.26g，7.46mmol；參見以上步驟(iv))在THF(20mL)中的冰/水冷卻的溶液中加入氫氧化鋰單水合物(0.68g，16mmol)在水(10mL)中的溶液。使溫度緩慢升至環(huán)境溫度過夜。真空除去THF，用乙醚洗滌殘余物，用2MHCl水溶液酸化，然后用乙酸乙酯萃取。干燥(MgSO4)，真空除去溶劑，得到副標(biāo)題化合物。產(chǎn)量1.53g(75％)。MS(m/z)273(M-1)-。(vi)(R)-6-氯-4-羥基-8-甲氧基二氫苯并噻喃-4-基-甲酸采用手性層析法(Kromasil TBB；庚烷∶乙酸乙酯∶甲酸)分離6-氯-4-羥基-8-甲氧基二氫苯并噻喃-4-基-甲酸(3.00g，10.9mmol；參見以上步驟(v))的對映體，得到1.13g移動較快的、不想要的S-對映體和1.19g(79％)移動較慢的副標(biāo)題化合物。ee＝94.6％1H NMR(500MHz；CD3OD)δ 6.97(d，1H)，6.83(d，1H)，3.83(s，3H)，3.07(m，1H)，2.98(m，1H)，2.40(m，1H)，2.27(m，1H)(vii)(R)-6-氯-4-羥基-8-甲氧基-1，1-二氧代二氫苯并噻喃-4-基-甲酸在環(huán)境溫度下，將(R)-6-氯-4-羥基-8-甲氧基二氫苯并噻喃-4-基-甲酸(0.55g，2.0mmol；得自以上步驟(vi))和過氧化氫水溶液(1.0mL，35％，10mmol)在乙酸(20mL)中的溶液攪拌過夜。真空除去溶劑，之后將殘余物溶于水中，然后冷凍干燥。產(chǎn)量0.63g(100％)。MS(m/z)305(M-1)-。1H NMR(400MHz；CD3OD)δ 7.23(d，1H)，7.06(d，1H)，3.96(s，3H)，3.61(m，2H)，2.85(m，1H)，2.53(m，1H)(viii)(R)-6-氯-4-羥基-8-甲氧基-1，1-二氧代二氫苯并噻喃-4-基-C(0)-Aze-Pab(Teoc)在0℃下，將HATU(0.94g；2.5mmol)加入到(R)-6-氯-4-羥基-8-甲氧基-1，1-二氧代二氫苯并噻喃-4-基-甲酸(0.63g；2.05mmol；參見以上步驟(vii))在DMF(10mL)中的溶液中。1小時后，滴加H-Aze-Pab(Teoc)x2 HCl(1.1g；2.5mmol；參見國際專利申請WO 98/57932)和N，N-二異丙基乙基胺(1.4mL；8.0mmol)在DMF(5mL)中的溶液。使溫度緩慢升至環(huán)境溫度過夜。真空除去溶劑，使用反相HPLC(乙腈0.1M乙酸銨水溶液)純化殘余物。將適宜的部分冷凍干燥，得到為無色固體的副標(biāo)題化合物。產(chǎn)量0.50g(37％)MS(m/z)663(M-1)-；665(M+1)+。
(另一種得到(R)-6-氯-4-羥基-8-甲氧基-1，1-二氧代二氫苯并噻喃-4-基-C(O)-Aze-Pab(Teoc)的方法如下在0℃下，將HATU(0.47g，1.2mmol)加入到(R)-6-氯-4-羥基-8-甲氧基二氫苯并噻喃-4-基-甲酸(0.31g，1.1mmol；參見以上步驟(vi))在DMF(7mL)中的溶液中。1小時后，滴加H-Aze-Pab(Teoc)x2 HCl(0.61g，1.4mmol；如在國際專利申請WO 98/57932中描述的那樣制備)和2，4，6-可力丁(0.67mL，5.1mmol)在DMF(9mL)中的溶液。2小時后，將反應(yīng)混合物放在冰箱中過夜。真空除去溶劑，將殘余物溶于乙酸乙酯中，然后用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌。使用反相HPLC(乙腈0.1M乙酸銨水溶液)純化，使適宜的部分冷凍干燥后，得到為無色固體的副標(biāo)題化合物。向如此得到的(R)-6-氯-4-羥基-8-甲氧基二氫苯并噻喃-4-基-C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.25g，0.39mmol)在二氯甲烷(20mL)中的冰/水冷卻的溶液中加入溶于少量二氯甲烷中的間-氯過苯甲酸(0.25g，約60％，0.86mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌2，5小時，然后用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，真空濃縮，使用反相HPLC(乙腈0.1M乙酸銨水溶液)純化。濃縮關(guān)心的部分并用乙酸乙酯萃取。干燥(MgSO4)，真空除去溶劑，得到副標(biāo)題化合物。產(chǎn)量0.201g(76％))。(ix)(R)-6-氯-4-羥基-8-甲氧基-1，1-二氧代二氫苯并噻喃-4-基-C(O)Aze-Pab x HOAc向(R)-6-氯-4-羥基-8-甲氧基-1，1-二氧代二氫苯并噻喃-4-基-C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.092g，0.14mmol；參見以上步驟(viii))在THF(15mL)中的溶液中加入四丁基氟化銨(0.18mL，1.0M，0.18mmol)。在50℃下，將溶液攪拌20小時，在60℃下攪拌5小時，然后，在室溫下放置過夜。真空除去溶劑。使用反相HPLC(乙腈0.1M乙酸銨水溶液)純化殘余物，使適宜的部分冷凍干燥后，得到為白色固體的標(biāo)題化合物。產(chǎn)量0.044g(50％)。MS(m/z)519(M-1)-；521(M+1)+。1H NMR(600MHz；CD3OD)(作為非對映體/旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的復(fù)合物)δ7.76(d，0.9H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)；7.66(d，1.1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)；7.54(d，0.9H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)；7.47(d，1.1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)；7.12-7.25(幾個峰，2H)；5.54(dd，0.45H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)；4.54-4.65(幾個峰，1.55H)；4.43-4.51(幾個峰，1H)；4.30(m，0.55H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)；4.09(m，0.45H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)；3.99(m，0.45H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)；3.92(m，0.55H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)；3.90(s，3H)；3.76(m，0.45H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)；3.60(m，1.1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)；3.40(m，0.45H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)；2.70-2.88(幾個峰，1.45H)；2.46-2.61(幾個峰，1.55H)；2.28(m，0.55H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)；2.14(m，0.45H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)；1.90(s，3H)。13C NMR(75 MHz；CD3OD)(作為非對映體/旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的復(fù)合物，羰基和/或脒碳)δ179.8；174.2；173.8；172.9；168.1。實(shí)施例2(R)-6，8-二氯-4-羥基-1，1-二氧代二氫苯并噻喃-4-基-C(O)-Aze-Pab(i)3-(2，4-二氯苯硫基)丙酸乙酯在N2(g)下，將在丙酮(100mL)中的2，4-二氯苯硫酚(5.04g，28.2mmol)、碳酸銫(10.1g，31mmol)和3-溴代丙酸乙酯(4.2mL，33mmol)回流過夜。過濾并減壓濃縮后，在二氯甲烷和水之間分配殘余物。分離后，用二氯甲烷萃取水相一次。干燥并真空除去溶劑，得到液體殘余物，其含有約30％(HPLC)未反應(yīng)的2，4-二氯苯硫酚。在N2(g)下，將混合物與碳酸銫(4.7g)和3-溴代丙酸乙酯(2mL)在乙腈(100mL)中再次回流2小時。過濾并減壓濃縮后，將殘余物溶于乙醚中，并用2M氫氧化鈉水溶液和水洗滌。干燥并真空除去溶劑，得到副標(biāo)題化合物。產(chǎn)量5.85g(74％)。1H NMR(300MHz；CDCl3)δ 7.39(d，1H)，7.25(d，1H)，7.18(dd，1H)，4.13(q，2H)，3.15(t，2H)，2.61(t，2H)，1.13(t，3H)。(ii)3-(2，4-二氯苯硫基)丙酸使用在以上實(shí)施例1(ii)中描述的方法，由3-(2，4-二氯苯硫基)丙酸乙酯(5.8g，20.8mmol；得自以上步驟(i))開始制備副標(biāo)題化合物。產(chǎn)量3.43g(66％)。MS(m/z)249(M-1)-。(iii)6，8-二氯-4-二氫苯并噻喃酮當(dāng)將3-(2，4-氯苯硫基)丙酸(1.20g，4.78mmol；得自以上步驟(ii))加入到濃硫酸(30mL)中時，立即觀察到深紅色。在環(huán)境溫度下攪拌過夜后，把反應(yīng)混合物傾入冰中。紅色消失。用乙醚萃取，用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，干燥(MgSO4)，真空除去溶劑，得到深黃色固體。產(chǎn)量0.93g(84％)。1H NMR(400MHz；CDCl3)δ 8.01(d，1H)，7.47(d，1H)，3.23(m，2H)，2.96(m，2H)。(iv)6，8-二氯-4-羥基二氫苯并噻喃-4-基-甲酸乙酯按照C.F.Bigge等在J.Med.Chem.，(1993)，36，1977中的方法，使用6，8-二氯-4-二氫苯并噻喃酮(2.20g，9.44mmol；得自以上步驟(iii))，制備副標(biāo)題化合物。產(chǎn)量2.75g(95％)。1H NMR(500MHz；CDCl3)δ 7.30(d，1H)，7.08(d，1H)，4.24-4.35(m，2H)，3.23(m，1H)，3.04(ddd，1H)，2.29-2.41(m，2H)，1.25(t，3H)。(v)6，8-二氯-4-羥基二氫苯并噻喃-4-基-甲酸使用在以上實(shí)施例1(v)中描述的方法，由6，8-二氯-4-羥基二氫苯并吡喃-4-基-甲酸乙酯(2.74g，8.92mmol；得自以上步驟(iv))開始制備副標(biāo)題化合物。產(chǎn)量2.17g(87％)。MS(m/z)277(M-1)-。1H NMR(400MHz；CDCl3)δ 7.34(d，1H)，7.21(d，1H)，3.21(m，1H)，3.12(ddd，1H)，2.35-2.50(m，2H)，2.13(s，1H)。(vi)(R)-6，8-二氯-4-羥基二氫苯并噻喃-4-基-甲酸使用手性層析法(Kromasil TBB；庚烷∶乙酸乙酯∶甲酸)分離6，8-二氯-4-羥基二氫苯并吡喃-4-基-甲酸(2.17g，7.77mmol；來自以上步驟(v))的對映體，得到0.74g移動較快的、不想要的S-對映體和0.72g(66％)移動較慢的副標(biāo)題化合物。ee＝98.4％(vii)(R)-6，8-二氯-4-羥基二氫苯并噻喃-4-基-C(0)-Aze-Pab(Teoc)以類似于在以上實(shí)施例1(viii)中描述的方法，由(R)-6，8-二氯-4-羥基苯并二氫吡喃-4-基-甲酸(0.19g，0.68mmol；得自以上步驟(vi))和H-Aze-Pab(Teoc)(0.37g，0.82mmol；如在國際專利申請WO 98/57932中描述的那樣制備)開始制備副標(biāo)題化合物。產(chǎn)量0.28g(65％)。MS(m/z)635(M-1)-，637(M+1)+。(viii)(R)-6，8-二氯-4-羥基-1，1-二氧代二氫苯并噻喃-4-基-C(O)-Aze-Pab(Teoc)以類似于在以上實(shí)施例1(viii)(或者制備，第二步)中描述的方法，從(R)-6，8-二氯-4-羥基-二氫苯并噻喃-4-基-C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.100g，0.157mmol；得自以上步驟(vii))和間-氯過苯甲酸(0.125g，60％；0.72mmol)開始制備副標(biāo)題化合物。產(chǎn)量0.040g(38％)。MS(m/z)667(M-1)-，669(M+1)+。(ix)(R)-6，8-二氯-4-羥基-1，1-二氧代二氫苯并噻喃-4-基-C(O)-Aze-Pabx CF3COOH將三氟乙酸(1.0mL)加入到(R)-6，8-二氯-4-羥基-1，1-二氧代二氫苯并噻喃-4-基-C(O)-Aze-Pab(Teoc)(40mg，60μmol；得自以上步驟(viii))在二氯甲烷(10mL)中的攪拌的冰/水冷卻的溶液中。30分鐘后，移去冷卻浴。在室溫下1小時后，加入乙腈(30mL)，減壓下小心除去溶劑。把殘余物溶于水中，然后冷凍干燥。產(chǎn)量27mg(68％)。MS(m/z)525(M-1)-，523(M+1)+。1H NMR(400MHz；CD3OD)(作為非對映體/旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的復(fù)合物)δ8.74(m，1H)，7.45-7.80(幾個峰，6H)，5.53(dd，0.4H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.35-4.88(幾個峰，3.8H)，4.09(m，0.4H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.00(m，0.4H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.87(m，0.4H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.68(m，1.2H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.45(ddd，0.4H)，2.78-2.90(m，1H)，2.73(m，0.4H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)；2.46-2.64(幾個峰，1.6H)；2.31(m，0.6H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)；2.15(m，0.4H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)。13C NMR(100MHz；CD3OD)δ174.2；173.4；168.2。
另一種方法使用在以上實(shí)施例1(v)中的方法，從6-氯-4-羥基-二氫苯并噻喃-4-基-甲酸甲酯(0.63g，2.4mmol；得自以上步驟(i))也得到副標(biāo)題化合物。產(chǎn)量0.55g(92％)。(iv)(R)-6-氯-4-羥基二氫苯并噻喃-4-基-甲酸使用手性層析法(Kromasil TBB；庚烷∶乙酸乙酯∶甲酸)分離6-氯-4-羥基二氫苯并噻喃-4-基-甲酸的對映體(1.4g，5.7mmol；得自以上步驟(iii))，得到0.500g(71％)移動較慢的副標(biāo)題化合物。(v)(R)-6-氯-4-羥基苯并二氫吡喃-4-基-C(O)-Aze-Pab(Teoc)以類似于在以上實(shí)施例1(viii)(或者制備，第一步驟)中描述的方法，由(R)-6-氯-4-羥基苯并二氫吡喃-4-基-甲酸(0.178g，0.727mmol；得自以上步驟(iv))和H-Aze-Pab(Teoc)(0.36g，0.80mmol；如在國際專利申請WO 98/57932中描述的那樣制備)開始制備副標(biāo)題化合物。產(chǎn)量0.31g(71％)。MS(m/z)601(M-1)-，603(M+1)+。(vi)(R)-6-氯-4-羥基-1，1-二氧代二氫苯并噻喃-4-基-C(O)-Aze-Pab(Teoc)以類似于在以上實(shí)施例1(viii)(或者制備，第二步)中描述的方法，由(R)-6-氯-4-羥基二氫苯并噻喃-4-基-C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.113g，0.187mmol；得自以上步驟(v))和間-氯過苯甲酸(0.16g，約60％；0.56mmol)開始制備副標(biāo)題化合物。產(chǎn)量0.029g(27％)。MS(m/z)633(M-1)-，635(M+1)+。(vii)(R)-6-氯-4-羥基-1，1-二氧代二氫苯并噻喃-4-基-C(O)-Aze-Pab xHOAc以類似于在以上實(shí)施例1(ix)中描述的方法，由(R)-6-氯-4-羥基-1，1-二氧代二氫苯并噻喃-4-基-C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.029g，0.046mmol；得自以上步驟(vi))和四丁基氟化銨(0.080mL，1.0M；0.080mmol)開始制備標(biāo)題化合物。產(chǎn)量0.023g(91％)。MS(m/z)489(M-1)-，491(M+1)+。1H NMR(400MHz；CD3OD)(作為非對映體/旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的復(fù)合物)δ7.47-7.84(幾個峰，7H)；5.55(dd，0.3H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)；4.43-4.66(幾個峰，2.7H)；4.30(m，0.7H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)；4.09(m，0.5H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)；4.00(m，0.5H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)；3.77(ddd，0.5H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)；3.54-3.67(幾個峰，1.3H)；3.43(ddd，0.5H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)；2.52-2.99(幾個峰，3H)；2.24-2.33(m，1H)；2.10-2.20(m，0.7H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)；1.92(s，3H)；1.75-1.85(m，0.3H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)。13C NMR(100MHz；CD3OD)(作為非對映體/旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的復(fù)合物，羰基和/或脒碳)δ 173.5；172.9；168.1。實(shí)施例4(R)-6-氯-4-羥基-8-甲氧基-1，1-二氧代二氫苯并噻喃-4-基-C(O)-Aze-Pab(OBn)(i)(R)-6-氯-4-羥基-8-甲氧基-1，1-二氧代二氫苯并噻喃-4-基-C(O)-Aze-Pab(OBn)(Teoc)將在THF(15mL)中的(R)-6-氯-4-羥基-8-甲氧基-1，1-二氧代二氫苯并噻喃-4-基-C(O)-Aze-Pab-(Teoc)(0.040g，0.060mmol；參見以上實(shí)施例1(viii))和O-芐基羥胺x HCl(0.047g，0.29mmol)加熱至60℃ 2天。減壓濃縮后，將殘余物溶于乙酸乙酯中，并用水和鹽水洗滌。干燥(MgSO4)，真空除去溶劑，得到無色固體殘余物。產(chǎn)量0.046g(99％)。MS(m/z)771(M+1)+，793(M+23)+。(ii)(R)-6-氯-4-羥基-8-甲氧基-1，1-二氧代二氫苯并噻喃-4-基-C(O)-Aze-Pab(OBn)將(R)-6-氯-4-羥基-8-甲氧基-1，1-二氧代二氫苯并噻喃-4-基-C(O)-Aze-Pab(OBn)(Teoc)(0.046g，0.060mmol；得自以上步驟(i))和四丁基氟化銨(0.20mL，1.0M，0.20mmol)在乙腈(3mL)中的溶液加熱至60℃ 3小時。減壓濃縮后，將殘余物溶于乙酸乙酯中并用水和鹽水洗滌。真空蒸發(fā)溶劑，僅得到0.019g。將含水部分冷凍干燥，與得自有機(jī)相的蒸發(fā)殘余物合并，使用反相HPLC(乙腈0.1M乙酸銨水溶液)純化，將適宜的部分冷凍干燥后，得到為無色固體的標(biāo)題化合物。產(chǎn)量0.009g(24％)。MS(m/z)625(M-1)-，627(M+1)+。1H NMR(400MHz；CDCl3)δ7.59(d，2H)，7.23-7.45(幾個峰，7H)，6.99(d，1H)，6.81(d，1H)，5.12(s，2H)；4.90(dd，1H)，4.85(bs，2H)，4.40-4.54(ABX-系統(tǒng)中的AB-部分，2H)，4.09(m，1H)，3.97(s，3H)，3.84(ddd，1H)，3.28(ddd，1H)，3.09(m，1H)，2.79(ddd，1H)，2.63(m，1H)，2.32(m，1H)，2.21(m，1H)。13C NMR(100MHz；CDCl3)(羰基和/或脒碳)δ 169.1，158.3，151.6。
權(quán)利要求
1.一種式I化合物或其藥學(xué)上可接受的衍生物， 其中Y表示S(O)或S(O)2；R1表示鹵素；和R2表示H、鹵素或C1-4烷氧基(后一個基團(tuán)任選被一個或多個鹵素基團(tuán)取代)。
2.一種權(quán)利要求1的化合物，其中R1表示氯。
3.一種權(quán)利要求1或2的化合物，其中R2表示H、鹵素或C1-2烷氧基(后一個基團(tuán)任選被一個或者多個鹵素基團(tuán)取代)。
4.一種權(quán)利要求1-3中任一項的化合物，其中R1表示氯，R2表示H、氯、OCH3、OCHF2或OCF3。
5.一種權(quán)利要求4的化合物，其中R2表示OCH3。
6.(R)-6-氯-4-羥基-8-甲氧基-1，1-二氧代二氫苯并噻喃-4-基-C(O)-(S)-Aze-Pab或其藥學(xué)上可接受的衍生物。
7.一種制備權(quán)利要求1中定義的式I化合物的方法，該方法包括(i)使式III化合物 其中Y、R1和R2如權(quán)利要求1中定義，與4-脒基芐基-2-氮雜環(huán)丁烷甲酰胺偶合；(ii)使式IV化合物 其中Y、R1和R2如權(quán)利要求1中定義，與對-脒基芐胺偶合；(iii)使相應(yīng)的式V化合物完全或部分氧化， 其中R1和R2如權(quán)利要求1中定義；(iv)使如權(quán)利要求1中定義的式I化合物的保護(hù)的衍生物脫保護(hù)；或者(v)引入或互變?nèi)鐧?quán)利要求1中定義的式I化合物中芳環(huán)上的取代基。
8.一種權(quán)利要求1的化合物，其為式I化合物的藥學(xué)上可接受的衍生物，該衍生物為式IA化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽， 其中Y、R1和R2如權(quán)利要求1-6中任一項定義；D1和D2獨(dú)立表示H、-OR7或R8，或者D1、D2和R3與它們連接的脒基一起形成式IIa、IIb、IIc、IId或IIe的環(huán)狀基團(tuán)， 其中波浪線表明與苯環(huán)的連接點(diǎn)；R3表示H，或者R3、D1和D2與它們連接的脒基一起形成式IIa、IIb、IIc、IId或IIe的環(huán)狀基團(tuán)；R4和R5獨(dú)立表示H或C1-4烷基；R6表示H、C1-6烷基(其后一個基團(tuán)由一個或者多個鹵素任選取代)或C(O)OR12；R7表示H、C6-10芳基、C1-10烷基(其后一個基團(tuán)由一個或者多個鹵素任選取代)、C1-3烷基苯基、-C(R9a)(R9b)R10、-C(O)R11a、-C(O)OR12、-C(O)N(R13)R14或-(CH2)n(O)mR15；R8表示-C(R9a)(R9b)R10、-C(O)R11b或-C(O)OR12；R9a和R9b在各種情況下獨(dú)立表示H或C1-6烷基；R10在各種情況下表示-OC(O)R16a、-OC(O)OR17、-N(R18a)C(O)OR17或-OC(O)N(R18b)R17；R11a和R11b在各種情況下獨(dú)立表示C6-10芳基、C1-3烷基苯基(其后兩個基團(tuán)由一個或者多個選自C1-6烷基和鹵素的取代基任選取代)、-[C(R19a)(R19b)]pOC(O)R16b，或者R11a表示C1-17烷基(由C1-6烷氧基、C1-6酰氧基、氨基或鹵素任選取代)或者R11b表示C1-6烷基；R12在各種情況下表示C1-17烷基(由一個或者多個選自C1-6烷氧基、C1-6酰氧基、-Si(R20a)(R20b)(R20c)和鹵素的取代基任選取代)、C6-10芳基、C1-3烷基苯基(其后兩個基團(tuán)由C1-6烷基、C1-6烷氧基、氰基或鹵素任選取代)、-[C(R19a)(R19b)]qOC(O)R16b或-CH2R21；R13表示H或C1-7烷基，或與R14一起表示C4-5亞烷基；R14表示C6-10芳基或C1-10烷基(其后一個基團(tuán)由一個或者多個選自O(shè)H、鹵素、CO2H、C1-6烷氧基、C1-6酰氧基和C6-10芳基的取代基任選取代)，或者與R13一起表示C4-5亞烷基；R15表示由一個或者多個-OC(O)C(H)(R22)N(G)(Ga)基團(tuán)任選取代的C1-7烷基；R16a、R16b和R17在各種情況下獨(dú)立表示C6-10芳基或C1-17烷基(其后一個基團(tuán)由一個或者多個選自-OH、鹵素、-CO2H、C1-6烷氧基、C1-6酰氧基和C6-10芳基的取代基任選取代)，或者R16b表示C1-6烷氧基(由一個或者多個選自C1-6烷基和鹵素的取代基任選取代)；R18a和R18b獨(dú)立表示H或C1-4烷基；R19a和R19b在各種情況下獨(dú)立表示H或C1-6烷基；R20a至R20c在各種情況下獨(dú)立表示C1-6烷基或苯基；R21表示結(jié)構(gòu)片段IIf R22表示C3-4烷基；G和Ga獨(dú)立表示H、氨基保護(hù)基團(tuán)，或者G和Ga一起表示氨基保護(hù)基團(tuán)；m表示0或1；n表示1、2或3；p表示3或4；q表示2或3，條件是(a)D1和D2都不表示H；和(b)當(dāng)D1和D2中的一個表示-OR7時，則另一個表示H。
9.一種如在權(quán)利要求1-5或者8中任一項定義的化合物，其中片段 以S-構(gòu)型存在。
10.一種如在權(quán)利要求1-5或者8或9中任一項定義的式I化合物，其中片段 以R-構(gòu)型存在。
11.一種制備權(quán)利要求8中定義的式IA化合物的方法，該方法包括(1)對其中D1和D2之一表示-OR7(其中R7表示H、C6-10芳基、C1-10烷基(其后一個基團(tuán)由一個或者多個鹵素任選取代)或C1-3烷基苯基)的式IA化合物，使式XIV化合物 其中Y、R1和R2如權(quán)利要求8中定義，與式XV化合物反應(yīng)，H2NORaXV其中Ra表示H、C6-10芳基、C1-10烷基(其后一個基團(tuán)由一個或者多個鹵素任選取代)或C1-3烷基苯基，任選在低級烷基醇存在下，通過用氣態(tài)HCl預(yù)處理式XIV化合物，形成式XVI化合物， 其中Rb表示低級烷基，且Y、R1和R2如在權(quán)利要求8中定義；(2)對于其中D1和D2之一表示-OR7(其中R7表示H、C6-10芳基、C1-10烷基(其后一個基團(tuán)由一個或者多個鹵素任選取代)或C1-3烷基苯基)的式IA化合物，使其中D1和D2之一表示-C(O)OR12并且另一個表示H的相應(yīng)式IA化合物與如在上文定義的式XV化合物反應(yīng)，隨后除去-C(O)OR12基團(tuán)；(3)對其中D1或D2表示R8的式IA化合物，使其中D1或D2(合適時)表示H的相應(yīng)式I化合物或者相應(yīng)式IA化合物與式XVII化合物反應(yīng)，L3-R8XVII其中L3表示離去基團(tuán)，R8如在權(quán)利要求8中定義；(4)對其中D1和D2之一表示-OR7(其中R7不表示H)的式IA化合物，使其中D1和D2之一表示-OH的相應(yīng)式IA化合物與式XVIII的化合物反應(yīng)，L3-R7aXVIII其中R7a表示如在權(quán)利要求8中定義的R7，除了其不表示H外，且L3如上文定義；(5)對其中D1和D2之一表示H而另一個表示-C(R9a)(R9b)R10(其中R10表示-OC(O)R16a、-OC(O)OR17或-OC(O)N(R18b)R17)的式IA化合物，使相應(yīng)的式XIX化合物 其中Y、R1、R2、R9a和R9b如在權(quán)利要求8中定義，與式XX化合物反應(yīng)，L3-C(O)RcXX其中Rc表示R16a、-OR17或-N(R18b)R17，R16a、R17和R18b如在權(quán)利要求8中定義，L3如上文定義；(6)對其中D1、D2和D3與它們連接的脒基一起表示如在權(quán)利要求8中定義的基團(tuán)IIa的式IA化合物，使其中D1表示OH的相應(yīng)式IA化合物與式XXII化合物反應(yīng)，HalC(O)CH(R4)HalXXII其中Hal表示鹵素，R4如在權(quán)利要求8中定義，隨后使得到的中間體環(huán)化；(7)對其中D1、D2和D3與它們連接的脒基一起表示如在權(quán)利要求8中定義的基團(tuán)IIb的式IA化合物，使式XXIII的相應(yīng)化合物 其中Y、R1和R2如在權(quán)利要求8中定義，與式XXIV化合物反應(yīng)，H2NCH(R4)C(O)ORbXXIV其中Rb如上文定義，R4如在權(quán)利要求8中定義；(8)對其中D1、D2和D3與它們連接的脒基一起表示如在權(quán)利要求8中定義的基團(tuán)IIc的式IA化合物，使其中D1表示OH的相應(yīng)式IA化合物與式XXV化合物反應(yīng)，R4CHOXXV其中R4如在權(quán)利要求8中定義；(9)對其中D1、D2和D3與它們連接的脒基一起表示如在權(quán)利要求8中定義的基團(tuán)IId的式IA化合物，使式XXVI的化合物環(huán)化， 其中Hal如上文定義，Y、R1、R2、R4、R5和R6如在權(quán)利要求8中定義；(10)對其中D1、D2和D3與它們連接的脒基一起表示如在權(quán)利要求8中定義的基團(tuán)IIe的式IA化合物，使式XXIX的相應(yīng)化合物 其中Y、R1、R2和R6如在權(quán)利要求8中定義，與甲醛反應(yīng)；(11)對如在權(quán)利要求8中定義的式IA化合物的保護(hù)的衍生物脫保護(hù)；或者(12)對如在權(quán)利要求8中定義的式IA化合物中的芳族和/或非-芳族、碳環(huán)和雜環(huán)上引入或者互變?nèi)〈?br> 12.一種藥用制劑，它包括與藥學(xué)上可接受的輔劑、稀釋劑或載體混合的權(quán)利要求1-6或者8-10中任一項定義的化合物、或其藥學(xué)上可接受的衍生物或鹽(合適時)。
13.一種用作藥物的權(quán)利要求1-6或者8-10中任一項定義的化合物、或其藥學(xué)上可接受的衍生物或鹽(合適時)。
14.一種用于治療需要抑制凝血酶的病癥的權(quán)利要求1-6或者8-10中任一項定義的化合物、或其藥學(xué)上可接受的衍生物或鹽(合適時)。
15.一種用于治療血栓形成的權(quán)利要求1-6或者8-10中任一項定義的化合物、或其藥學(xué)上可接受的衍生物或鹽(合適時)。
16.一種用作抗凝血藥的權(quán)利要求1-6或者8-10中任一項定義的化合物、或其藥學(xué)上可接受的衍生物或鹽(合適時)。
17.權(quán)利要求1-6或者8-10中任一項定義的化合物、或其藥學(xué)上可接受的衍生物或鹽(合適時)作為在制備治療需要抑制凝血酶的病癥的藥物中的活性成分的用途。
18.權(quán)利要求17的用途，其中所述病癥為血栓形成。
19.權(quán)利要求17的用途，其中所述病癥為血液和/或組織中的血凝過快。
20.權(quán)利要求1-6或者8-10中任一項定義的化合物、或其藥學(xué)上可接受的衍生物或鹽(合適時)作為抗凝血藥的制備中的活性成分的用途。
21.一種治療需要抑制凝血酶的病癥的方法，該方法包括給予患有或者易患這種病癥的患者治療有效量的如在權(quán)利要求1-6或者8-10中任一項定義的化合物、或其藥學(xué)上可接受的衍生物或鹽(合適時)。
22.一種權(quán)利要求21的方法，其中所述病癥為血栓形成。
23.一種權(quán)利要求21的方法，其中所述病癥為血液和/或組織中的血凝過快。
全文摘要
提供式(I)和(IA)的化合物，其中Y、R
文檔編號A61P7/00GK1441799SQ01812748
公開日2003年9月10日 申請日期2001年5月14日 優(yōu)先權(quán)日2000年5月16日
發(fā)明者K·安德松, T·因哈德特, O·卡爾松, M·林肖藤, J·E·奈斯特倫, G·松登 申請人:阿斯特拉曾尼卡有限公司