專利名稱：一種治療心腦血管疾病的藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種包括山楂葉提取物、川芎嗪或其藥學(xué)上可接受的鹽的藥物組合物，及其制備方法和應(yīng)用，屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。
2、背景技術(shù)心腦血管疾病如腦卒中、冠心病、心絞痛等是人類死亡的主要原因之一。近年來，隨著我國逐漸步入老齡化社會，人民生活水平提高，生活節(jié)奏加快，飲食習(xí)慣向高熱、高脂化發(fā)展，人群中心臟病、腦卒中等心血管系統(tǒng)疾病已成為危害人類健康及生命的嚴(yán)重疾病之一。因此，揭示心腦血管疾病發(fā)生、發(fā)展的機制，開展有效的預(yù)防、治療和康復(fù)，降低致殘和死亡率，一直是醫(yī)藥界人士致力于發(fā)展的方向。心絞痛、心肌梗死、缺血性心臟病等共同的病理基礎(chǔ)都是心肌缺血，心肌供血供氧不足導(dǎo)致心肌代謝紊亂，能量供應(yīng)不足，心肌收縮功能下降，血液輸出量降低，進而影響整個機體的功能，乃至引起心肌細胞死亡。腦缺血再灌注是臨床上腦血管疾病治療的關(guān)鍵。心腦缺血后影響能量代謝，繼發(fā)乳酸堆積、鈣超載、自由基損傷等多種變化；多靶點逆轉(zhuǎn)或改善這些變化，提高綜合療效是藥物治療的重要目標(biāo)。
山楂葉提取物為山楂葉經(jīng)加工制成的提取物，山楂葉為薔薇科植物山里紅(Crataegus pinnatifida Bge.var.major N.E.Br)或山楂(Crataegus pinnatifida Bge.)的干燥葉。山楂葉中的黃酮類化合物如蘆丁、金絲桃甙、槲皮素、牡荊素等，是其主要有效成分，具有促使血管擴張、增加冠狀動脈血流量、保護缺血心肌等多種藥理活性，具有降壓、降血脂和強心作用，能改善心臟活力和興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)等。大量研究表明，山楂葉總黃酮還具有抗氧化功能，對血管內(nèi)皮細胞的氧化損傷具有明顯的保護作用。研究還表明，黃酮類成分中牡荊素化合物具有良好的抗癌作用。
中國藥典2005年版一部575～576頁，益心酮片項下，有山楂葉提取物的標(biāo)準(zhǔn)。標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，山楂葉提取物按干燥品計算，含總黃酮以無水蘆丁(C27H30O16)計，不得少于80.0％；含金絲桃苷(C21H20O12)，不得少于0.40％。目前已有益心酮(山楂葉提取物)原料、片、滴丸、軟膠囊上市。
川芎嗪(Ligustrazine)為傘形科植物川芎和姜科植物溫莪術(shù)根莖及大戟科植物通風(fēng)麻風(fēng)樹莖中的主要活性成分之一，目前已可人工合成。藥理學(xué)研究表明，川芎嗪具有擴張血管、抑制血小板聚集、防止血栓形成、改善腦缺血等多種作用，臨床上主要用于缺血性腦血管病的治療并取得較好的療效。由于川芎嗪代謝快、半衰期短，為保持有效的藥物治療濃度，臨床上須頻繁給藥，故易致積蓄中毒，使其應(yīng)用受到一定限制。目前上市的有磷酸川芎嗪和鹽酸川芎嗪，主要為注射劑。磷酸川芎嗪及鹽酸川芎嗪結(jié)構(gòu)式見下圖。
磷酸川芎嗪結(jié)構(gòu)式鹽酸川芎嗪結(jié)構(gòu)式很多研究表明，山楂葉和川芎嗪在治療心腦血管疾病方面有很好的療效。但是，利用山楂葉提取物與川芎嗪或其藥學(xué)上可接受的鹽的相互作用，配伍組方，制備治療心腦血管疾病的藥物，尚未見報道。
3、發(fā)明內(nèi)容為了滿足臨床需要，解決上述問題，更好的治療心腦血管疾病，本發(fā)明提供了一種新的藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用，其特征在于它包括山楂葉提取物、川芎嗪或其藥學(xué)上可接受的鹽。
上述藥物組合物中，山楂葉提取物與川芎嗪或其藥學(xué)上可接受的鹽的重量配比為1∶0.1～10，優(yōu)選配比為1∶0.2～5。
上述藥物組合物，可用于制備治療心腦血管疾病的藥物。具有抗血小板聚集和解聚、擴張小動脈、改善微循環(huán)、增加腦血流和活血化淤等多種藥理作用；用于氣結(jié)血瘀、胸悶憋氣、心悸健忘、眩暈耳鳴，冠心病、心絞痛、脈管炎、高血脂癥，以及腦供血不足、腦血栓、腦栓塞等。
上述藥物組合物，可以制成任一臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型，如注射劑、口服常釋劑型、緩釋控釋劑型、口服液體劑、顆粒劑、丸劑等，優(yōu)選為粉針、水針、輸液、片、膠囊、軟膠囊、滴丸、口服液、顆粒?？刹捎矛F(xiàn)有制藥領(lǐng)域中的常規(guī)方法生產(chǎn)，需要時可添加各種藥學(xué)上可接受的輔料或載體。
上述藥物組合物，其特征在于所述的山楂葉提取物中含總黃酮以無水蘆丁(C27H30O16)計，不得少于80.0％；含金絲桃苷(C21H20O12)，不得少于0.40％。
上述藥物組合物中，川芎嗪藥學(xué)上可接受的鹽為磷酸鹽、鹽酸鹽、乳酸鹽、硫酸鹽、甲磺酸鹽、苯甲酸鹽、門冬氨酸鹽、酒石酸鹽，優(yōu)選為磷酸鹽和鹽酸鹽。
另外，本發(fā)明還提供了一種優(yōu)選的山楂葉提取物制備工藝，由于注射劑對原料質(zhì)量要求較高，進行了進一步精制，去除雜質(zhì)等，使其有關(guān)物質(zhì)等符合注射用要求。
藥理藥效研究表明，上述組合物具有保護膠原蛋白-腎上腺素誘導(dǎo)的小鼠腦血栓死亡的作用，明顯推遲大鼠實驗性動脈血栓形成時間，明顯減輕兔腦缺血再灌注和降低結(jié)扎大鼠冠狀動脈所致心肌缺血的損傷，顯著降低飲食性高血脂大鼠的血清膽固醇和甘油三酯。
上述藥物組合物，山楂葉提取物中有效成分明確，磷酸川芎嗪、鹽酸川芎嗪結(jié)構(gòu)明確，以山楂葉提取物和磷酸川芎嗪或鹽酸川芎嗪直接投料，制備工藝簡便，制劑質(zhì)量穩(wěn)定，雜質(zhì)含量少。兩藥協(xié)同作用，藥效增強，療效確切，安全性更高；并且可以解決川芎嗪由于代謝快、半衰期短，為保持有效的藥物治療濃度，須頻繁給藥，易致積蓄中毒的問題。
下面通過試驗例進一步說明本發(fā)明。下面試驗例中用SAC代替山楂葉提取物與磷酸川芎嗪或鹽酸川芎嗪組合物。
試驗例1 山楂葉提取物優(yōu)選制備工藝取山楂葉，加70％乙醇回流提取三次，每次1小時，每次加乙醇8倍量，合并提取液，濾過，濾液減壓回收乙醇至相對密度約1.04～1.06(60℃)的濃縮液，加等量水稀釋后，用1/2倍量的石油醚(60～90℃)振搖提取，棄去石油醚液，分出水層，用醋酸乙酯振搖提取，提取液減壓回收醋酸乙酯并濃縮至干，得山楂葉提取物(供口服制劑用)。
通過上述工藝制備的山楂葉提取物，總黃酮含量不得少于80.0％，金絲桃苷含量不得少于0.40％。
由于注射劑對原料要求較高，對上述山楂葉提取物進行了進一步精制，用于制備注射劑。
取上述山楂葉提取物，加入適量水使溶解，加于已處理好的聚酰胺柱(粒度30～60目，用95％乙醇濕法裝柱，先用3倍柱體積的95％乙醇洗脫，后用3倍柱體積的水洗脫至無醇味，備用)上，先用2倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液，然后用3倍柱體積的80％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并濃縮至相對密度約1.04～1.06(60℃)的濃縮液，噴霧干燥，得山楂葉提取物(供注射用)。
通過上述工藝制備的山楂葉提取物，總黃酮含量不得少于80.0％，金絲桃苷含量不得少于0.40％，有關(guān)物質(zhì)必須符合注射用要求。
試驗例2 山楂葉提取物與磷酸川芎嗪合并用的藥樹研究——小鼠實驗性體內(nèi)血栓形成試驗受試動物 雄性小鼠，360只，體重23～28g，隨機分為36組，每組10只。
供試品 山楂葉提取物含總黃酮83.07％、金絲桃苷0.48％，自制；磷酸川芎嗪北京華豐圣心藥業(yè)有限公司；磷酸川芎嗪注射液2ml∶50mg，河南天方藥業(yè)股份有限公司。
給藥劑量 各受試組的給藥藥物及給藥劑量見表1。
試驗方法 按照表1所列給藥劑量，灌胃給藥1小時后，尾靜脈注射膠原蛋白-腎上腺素混合血栓誘導(dǎo)劑每只0.1mg。注射后20min內(nèi)記錄小鼠偏癱恢復(fù)數(shù)，并計算各給藥組對小鼠腦血栓形成的保護率(死亡保護率＝對照組死亡數(shù)一給藥組死亡數(shù)/對照組死亡數(shù))，按公式q＝EAB/(EA+EB-EA*EB)求出各組q值。
試驗結(jié)果及結(jié)論 試驗結(jié)果見表1。結(jié)果表明，山楂葉提取物與磷酸川芎嗪1∶0.2～1∶5.0均對膠原蛋白-腎上腺素誘導(dǎo)小鼠腦血栓死亡有保護作用，并且均高于相對應(yīng)的山楂葉提取物或磷酸川芎嗪注射液單獨用藥的效果。概率相加法表明，山楂葉提取物與磷酸川芎嗪按表1所示比例配伍，藥效增強，呈現(xiàn)協(xié)同作用。根據(jù)計算所得的q值，其中山楂葉提取物±磷酸川芎嗪給藥劑量為15±15mg/kg組的q值最大，q＝2.22；并且每一系列組中，山楂葉提取物/磷酸川芎嗪為1∶0.5的比例時，q值最大，提示此比例可能為最佳比例。
表1 山楂葉提取物與磷酸川芎嗪合并用藥給藥組、給藥劑量以及對膠原蛋白-腎上腺素誘導(dǎo)小鼠腦血栓死亡的保護作用(n＝10)
試驗例3 山楂葉提取物與鹽酸川芎嗪合并用藥對大鼠實驗性動脈血栓形成的影響試驗受試動物 雄性大鼠，120只，體重200～220g，隨機分為6組，每組20只。
供試品 SAC注射液II(1)5ml∶90mg(含山楂葉提取物50mg、鹽酸川芎嗪40mg)，自制；SAC注射液II(2)5ml∶70mg(含山楂葉提取物50mg、鹽酸川芎嗪20mg)，自制；SAC注射液II(3)5ml∶110mg(含山楂葉提取物50mg、鹽酸川芎嗪60mg)，自制；山楂葉提取物含總黃酮82.39％、金絲桃苷0.49％，自制；鹽川芎嗪注射液2ml∶40mg，上海第一生化藥業(yè)有限公司。
給藥劑量 15mg/kg。
試驗方法 大鼠用2.5％戊巴比妥鈉(25mg/kg)腹腔注射麻醉，仰臥位固定，分離右側(cè)頸總動脈，采用電流損傷頸動脈內(nèi)膜法，用BT87-3實驗性體內(nèi)血栓形成儀測定不同組別動物頸動脈血栓形成時間。將刺激電極和溫度探頭掛于頸總動脈上，按表2所示給藥，給藥后10min開始刺激，刺激強度為2mA，刺激5min后關(guān)閉刺激開關(guān)，取下電極，3min后調(diào)節(jié)溫控表至零位，觀察動脈溫度突降時間。記錄電刺激開始至主動脈溫度突降的時間，該時間定為頸動脈血栓形成時間(超過3000秒者以3000秒計)。
試驗結(jié)果及結(jié)論 試驗結(jié)果見表2。SAC注射液II給藥組、山楂葉提取物給藥組、鹽酸川芎嗪注射液給藥組與對照組相比較，動脈血栓形成時間均推遲。表明，SAC注射液II、山楂葉提取物、鹽酸川芎嗪注射液均對大鼠實驗性動脈血栓形成有保護作用。并且各個配比的SAC注射液II組的作用均強于山楂葉提取物組和鹽酸川芎嗪注射液組，提示兩藥有協(xié)同增效作用。
表2 山楂葉提取物與鹽酸川芎嗪合并用藥對實驗性大鼠頸動脈血栓形成時間的影響(n＝10)
試驗例4 山楂葉提取物與磷酸川芎嗪合并用藥對兔腦缺血再灌注損傷的保護作用受試動物 家兔，114只，體重2.2～2.5kg，隨機分為19組，每組6只。
供試品 SAC注射液I(1)5ml∶100mg(含山楂葉提取物50mg、磷酸川芎嗪50mg)，自制；SAC注射液I(2)5ml∶75mg(含山楂葉提取物50mg、磷酸川芎嗪25mg)，自制；SAC注射液I(3)5ml∶125mg(含山楂葉提取物50mg、磷酸川芎嗪75mg)，自制；山楂葉提取物含總黃酮83.04％、金絲桃苷0.53％，自制；磷酸川芎嗪注射液2ml∶50mg，河南天方藥業(yè)股份有限公司。
試驗方法 將兔隨機分為缺血再灌注組(I/R組)、SAC注射液I治療組、山楂葉提取物治療組、磷酸川芎嗪注射液治療組和假手術(shù)對照組(SOC組)。(1)缺血再灌注組(I/R組)18只，用25％的氨基甲酸乙脂溶液1g/kg體重耳緣靜脈麻醉，頸部正中切口分離氣管插入氣管套管，暴露兩側(cè)頸總動脈，以動脈夾兩側(cè)夾閉20min，造成腦缺血，松夾分別再灌注1h、6h和12h，三個時間點各6只。分別在松夾10min后，耳緣靜脈推注生理鹽水5ml/kg體重。(2)SAC注射液I治療組每一配比的SAC注射液I為一大組，共三大組，每大組18只，手術(shù)方法同I/R組，三個時間點各6只，分別在松夾10min后，耳緣靜脈推注SAC注射液I 30mg/kg。(3)山楂葉提取物治療組18只，手術(shù)方法同I/R組，三個時間點各6只，分別在松夾10min后，耳緣靜脈推注山楂葉提取物供試液30mg/kg。(4)磷酸川芎嗪注射液治療組18只，手術(shù)方法同I/R組，三個時間點各6只，分別在松夾10min后，耳緣靜脈推注磷酸川芎嗪注射液30mg/kg。(5)假手術(shù)對照組(SOC組)6只，動物僅行麻醉和動脈分離術(shù)而不夾閉，1h后處死。上述各組實驗結(jié)束后即斷頭，在冰浴中剝出大腦，冰盤上解剖出雙側(cè)海馬區(qū)組織，用錫紙包裹放在4℃冰箱中儲存，備用。應(yīng)用pH酸度計檢測海馬組織PLA2的活性；采用干濕重法、TTC染色法測定皮層腦組織含水量、梗死面積；光鏡下觀察腦組織病理變化。
試驗結(jié)果 (1)對海馬組織PLA2活性的影響I/R組再灌注1h、6h和12h后，海馬組織PLA2活性較SOC明顯增高(p＜0.01)，且隨灌注時間延長，PLA2活性呈遞減趨勢，但各時間點間比較差異不顯著(p＞0.05)；各個配比的SAC注射液I治療組(1h、6h、12h)PLA2活性明顯降低，與SOC組和I/R各相應(yīng)時間點比較具有顯著性差異(p＜0.01，p＜0.001)，且隨再灌時間延長，PLA2活性逐漸向正常水平恢復(fù)；山楂葉提取物治療組和磷酸川芎嗪注射液治療組(1h、6h、12h)PLA2活性降低，與SOC組和I/R各相應(yīng)時間點比較具有明顯差異(p＜0.05，p＜0.01)，山楂葉提取物的作用低于磷酸川芎嗪注射液。(2)對皮層組織含水量(％)和梗死面積(％)的影響I/R組各時間點腦含水量均增高；各個配比的SAC注射液I治療組各時間點腦水含量與I/R組相比明顯減輕(p＜0.001)，腦梗死面積與I/R組相比明顯縮小(p＜0.01)；山楂葉提取物治療組和磷酸川芎嗪注射液治療組各時間點腦水含量與I/R組相比均減輕(p＜0.01)，腦梗死面積與I/R組相比均縮小(p＜0.05，p＜0.01)。(3)腦組織病理改變SOC組無梗死灶，神經(jīng)元結(jié)構(gòu)形態(tài)正常，無間質(zhì)水腫；I/R組有梗死灶，梗死灶周神經(jīng)元腫脹，細胞輪廓不清，間質(zhì)水腫明顯；各個配比的SAC注射液I治療組、山楂葉提取物治療組、磷酸川芎嗪注射液治療組梗死灶面積均縮小，梗死灶周神經(jīng)元腫脹不明顯，間質(zhì)水腫明顯減輕；SAC注射液I治療組作用更明顯。
結(jié)論 上述試驗結(jié)果表明，SAC注射液I、山楂葉提取物、磷酸川芎嗪注射液均可通過降低PLA2活性，改善腦循環(huán)，減輕腦缺血再灌注損傷，而發(fā)揮腦保護作用。各個配比的SAC注射液I在各項指標(biāo)中均高于山楂葉提取物和磷酸川芎嗪注射液單獨用藥的效果，提時兩藥具有協(xié)同增效作用。
試驗例5 山楂葉提取物與鹽酸川芎嗪合并用藥對結(jié)扎大鼠冠狀動脈所致心肌缺血的影響受試動物 大鼠，60只，體重200～220g，雌雄兼用，隨機分為6組，每組10只。
供試品 SAC注射液II(1)5ml∶90mg(含山楂葉提取物50mg、鹽酸川芎嗪40mg)，自制；SAC注射液II(4)5ml∶120mg(含山楂葉提取物100mg、鹽酸川芎嗪20mg)，自制；SAC注射液II(5)5ml∶125mg(含山楂葉提取物25mg、鹽酸川芎嗪100mg)，自制；山楂葉提取物含總黃酮83.04％、金絲桃苷0.53％，自制；鹽川芎嗪注射液2ml∶40mg，上海第一生化藥業(yè)有限公司。
給藥劑量 15mg/kg試驗方法 大鼠用烏拉坦1g/kg腹腔注射麻醉，背位固定，記錄心電，接人工呼吸機進行人工呼吸，打開胸腔，剪開心包，各組動物按各自藥物靜脈注射給藥15mg/kg，3min后結(jié)扎左側(cè)冠狀動脈前降枝，全程記錄心電30min，結(jié)扎后1h取血，檢測磷酸肌酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)。取出大鼠心臟，沿結(jié)扎線將心室肌均勻橫切4片，0.5％氯化硝基四氮唑蘭染色，用求積儀測每片心肌兩面的缺血面積，計算心肌缺血面積占心室面積的百分比。
試驗結(jié)果及結(jié)論 試驗結(jié)果見表3。結(jié)果表明，結(jié)扎后對照組大鼠心電的QRS波均突然異常增高、加寬，心肌大范圍缺血，生化檢測表現(xiàn)為CK和LDH均異常增高。各給藥組均能減少因結(jié)扎冠狀動脈所致的心電和生化指標(biāo)的異常改變，減小心肌缺血范圍。各個配比的SAC注射液II給藥組，效果顯著(p＜0.01)，均優(yōu)于山楂葉提取物和鹽酸川芎嗪注射液單獨給藥的效果，提示山楂葉提取物與鹽酸川芎嗪合并用藥有協(xié)同增效作用。
表3 山楂葉提取物與鹽酸川芎嗪合并用藥對結(jié)扎大鼠冠狀動脈所致心肌缺血的影響(n＝10)
試驗例6 山楂葉提取物與磷酸川芎嗪合并用藥對大鼠實驗性高血脂癥的影響受試動物 雄性大鼠，70只，體重220～240g，隨機分為7組，每組70只。
供試品 SAC注射液I(1)5ml∶100mg(含山楂葉提取物50mg、磷酸川芎嗪50mg)，自制；SAC注射液I(4)5ml∶125mg(含山楂葉提取物100mg、磷酸川芎嗪25mg)，自制；SAC注射液I(5)5ml∶125mg(含山楂葉提取物75mg、磷酸川芎嗪50mg)，自制；山楂葉提取物含總黃酮83.04％、金絲桃苷0.53％，自制；磷酸川芎嗪注射液2ml∶50mg，河南天方藥業(yè)股份有限公司。
給藥劑量 30mg/kg試驗方法 大鼠，測藥前膽固醇及甘油三酯水平后，建高脂模型。除空白對照組給予普通飼料外，其余各組均給予高脂飼料(配方為普通飼料86.8％、膽固醇3％、豬油10％、丙硫氧嘧淀0.2％)，連續(xù)喂飼10天后，測血清膽固醇及甘油三酯水平，確定高脂模型建成。模型建成后繼續(xù)飼高脂飼料，其中三組分別灌胃給藥SAC注射液I、山楂葉提取物、磷酸川芎嗪注射液，每日灌胃給藥1次，連續(xù)給藥20天后，再取血測膽固醇及甘油三酯水平。
試驗結(jié)果及結(jié)論 試驗結(jié)果見表4和表5。結(jié)果表明，SAC注射液I、山楂葉提取物、磷酸川芎嗪注射液均可明顯降低飲食性高血脂大鼠的血清膽固醇和甘油三酯。各個配比的SAC注射液I組的降低幅度均大于山楂葉提取物組，大于鹽酸川芎嗪注射液組，說明SAC注射液I降血脂功能更好，提示山楂葉提取物與鹽酸川芎嗪合并用藥有協(xié)同增效作用。
表4 山楂葉提取物與磷酸川芎嗪合并用藥對飲食性高血脂大鼠血清膽固醇的影響(n＝10)
表5 山楂葉提取物與磷酸川芎嗪合并用藥對飲食性高血脂大鼠血清甘油三酯的影響(n＝10)
試驗例7 SAC注射液殊安全性試驗1、過敏性試驗受試藥物 SAC注射液I，5ml∶100mg(含山楂葉提取物50mg、磷酸川芎嗪50mg)，自制，使用時取300mg溶于250ml 0.9％氯化鈉注射液中，配成供試液。
陰性對照 氯化鈉注射液，山東華信制藥有限公司。
陽性對照藥 5％卵白蛋白生理鹽水溶液(自制)。
受試動物 豚鼠，18只，體重280～310g，雌雄兼用，隨機分為供試藥組、陰性對照和陽性對照三組，每大組6只。
給藥劑量 致敏劑量0.5ml/只；致敏次數(shù)隔日腹腔注射1次，連續(xù)3次；攻擊劑量1ml/只，靜脈注射。
試驗方法 按上述分組分別給豚鼠隔日腹腔注射上述藥液0.5ml，共注射三次。然后將每大組豚鼠再分成兩小組，每小組3只。第一小組豚鼠于第一次致敏后14天，第二小組于第一次致敏后21天進行抗原攻擊，每只豚鼠均靜脈注射上述藥液1ml。觀察并記錄攻擊后15min內(nèi)豚鼠的表現(xiàn)。
試驗結(jié)果及結(jié)論 供試藥組和陰性對照藥組豚鼠均未發(fā)現(xiàn)過敏反應(yīng)，而卵白蛋白組產(chǎn)生過敏反應(yīng)并死亡。表明，SAC注射液I無明顯致敏作用。
2、溶血性試驗受試藥物 SAC注射液I，5ml∶100mg(含山楂葉提取物50mg、磷酸川芎嗪50mg)，自制，使用時取300mg溶于250ml 0.9％氯化鈉注射液中，配成供試液。
受試動物 雄性家兔，1只，體重2.4kg。
試驗方法 制備2％紅細胞生理鹽水混懸液備用。取潔凈試管7支，編號并排列在試管架上，按下表順序操作，混勻后置37℃水浴中溫育，觀察記錄0.5、1、2、3、4h的結(jié)果。
試驗結(jié)果及結(jié)論 供試品0.1～0.5ml各管在0.5、1、2、3、4h均未出現(xiàn)溶血和紅細胞凝集現(xiàn)象。表明，SAC注射液I無明顯溶血性。
3、血管刺激性試驗受試藥物 SAC注射液I，5ml∶100mg(含山楂葉提取物50mg、磷酸川芎嗪50mg)，自制，使用時取300mg溶于250ml 0.9％氯化鈉注射液中，配成供試液。
對照藥 氯化鈉注射液，山東華信制藥有限公司。
受試動物 家兔，體重2.1～2.3kg，雌雄兼用。
給藥劑量 家兔靜滴給藥劑量為20ml/kg。
試驗方法 取健康家兔6只，隨機分為供試藥組和0.9％氯化鈉注射液對照組，每組3只，劑量均為20ml/kg。給藥前將兔置固定箱中，于耳緣靜脈按上述分組分別滴注供試藥和0.9％氯化鈉注射液，滴速為1ml/min(20滴/min)，觀察給藥后24h注射局部有無充血、水腫、出血、壞死。連續(xù)給藥3天，于末次給藥后24h在遠離注射部位1cm的向心端取兔耳用10％福爾馬林固定，做病理學(xué)檢查。
試驗結(jié)果及結(jié)論 肉眼觀察及病理檢查表明，給藥組與對照組無明顯差別，用藥部位的血管及周圍組織均未見充血、水腫、出血、壞死，病理檢查無異常。表明，SAC注射液I靜脈靜滴對血管無刺激性。
試驗例8 SAC注射液II穩(wěn)定性試驗供試品 SAC注射液II(自制，5ml∶90mg，含山楂葉提取物50mg，鹽酸川芎嗪40mg)考察項目性狀、pH值、澄明度、有關(guān)物質(zhì)、標(biāo)示含量；并在加速試驗6個月和長期試驗期末增加無菌和熱原檢查。
1、影響因素試驗強光照射試驗 取供試品，置照度為4500Lx的光照箱內(nèi)放置10天。
高溫試驗 取供試品，分別置于40℃、60℃條件下放置10天。
低溫試驗 取供試品，在4℃冰箱中放置10天。
上述試驗，分別于第5、10天取樣測定。比較性狀后測試各項指標(biāo)，并將結(jié)果與0天比較。
結(jié)果 光照4500Lx、高溫60℃條件下放置10天，除有關(guān)物質(zhì)略有升高，標(biāo)示含量略有下降外，其它各項指標(biāo)均無明顯變化。高溫40℃、低溫4℃條件下放置10天，各項指標(biāo)無明顯變化。
2、加速試驗方法 置溫度40℃±2℃、相對濕度75％±5％的條件下放置6個月。在試驗期間分別于第1個月、2個月、3個月、6個月末取樣，比較外觀后，測試各項指標(biāo)，將結(jié)果與0個月比較；并在6個月末增加無菌和熱原檢查。
結(jié)果 溫度40℃±2℃、相對濕度75％±5％的條件下放置6個月，除有關(guān)物質(zhì)略有增加外，標(biāo)示含量略有下降外，其它各項指標(biāo)均無明顯變化，加速試驗6個月末，熱原、無菌檢查均符合規(guī)定。
3、長期試驗方法 置溫度25℃±2℃、相對濕度60％±10％的條件下放置18個月。分別于第3個月、6個月、9個月、12個月、18個月，比較外觀后，測試各項指標(biāo)，將結(jié)果與0個月比較；并在18個月末增加無菌和熱原檢查。
結(jié)果 溫度25℃±2℃、相對濕度60％±10％的條件下放置18個月，各項指標(biāo)均無明顯變化，長期試驗18個月末，熱原、無菌檢查均符合規(guī)定。
結(jié)論 由上述考察結(jié)果得出結(jié)論，各項試驗中，SAC注射液II均比較穩(wěn)定。
綜上所述，本發(fā)明提供的山楂葉提取物與磷酸川芎嗪或鹽酸川芎嗪組合物具有協(xié)同增效作用，明顯優(yōu)于山楂葉提取物、磷酸川芎嗪或鹽酸川芎嗪單獨給藥的藥效，優(yōu)選重量配比范圍為1∶0.08～1∶8，最佳重量配比范圍為1∶0.4～1∶1.2。對SAC注射液I(自制，5ml∶100mg，含山楂葉提取物50mg，磷酸川芎嗪50mg)進行的特殊安全性試驗結(jié)果表明，本發(fā)明提供的山楂葉提取物與磷酸川芎嗪組合物制成的注射劑無明顯的致敏性、或溶血性、或血管刺激性。對SAC注射液II(自制，5ml∶140mg，含山楂葉提取物100mg，鹽酸川芎嗪40mg)進行的穩(wěn)定性試驗結(jié)果表明，本發(fā)明提供的山楂葉提取物與鹽酸川芎嗪組合物制成的注射劑的各項指標(biāo)均比較穩(wěn)定，可以用于放大生產(chǎn)。
具體實施方式
以下通過實施例形式的具體實施方式
，對本發(fā)明的上述內(nèi)容作進一步的詳細說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。以下實施例中各劑型制備工藝中的輔料可以用藥學(xué)上可接受的輔料替換，或者減少、增加。以下實施例中，川芎嗪其藥學(xué)上可接受的鹽用磷酸川芎嗪或鹽酸川芎嗪。
實施例1 山楂葉提取物(注射用)的制備取山楂葉1000g，加70％乙醇回流提取三次，每次1小時，每次加乙醇8000ml，合并提取液，濾過，濾液減壓回收乙醇至相對密度約1.04～1.06(60℃)的濃縮液，加等量水稀釋后，用1/2倍量的石油醚(60～90℃)振搖提取，棄去石油醚液，分出水層，用醋酸乙酯振搖提取，提取液減壓回收醋酸乙酯并濃縮至干。加入適量水使溶解，加于已處理好的聚酰胺柱(粒度30～60目，用95％乙醇濕法裝柱，先用3倍柱體積的95％乙醇洗脫，后用3倍柱體積的水洗脫至無醇味，備用)上，先用2倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液，然后用3倍柱體積的80％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇并濃縮至相對密度約1.04～1.06(60℃)的濃縮液，噴霧干燥，得山楂葉提取物(供注射用)。
分別制取三批，得率以及總黃酮和金絲桃苷含量測定結(jié)果見下表。
實施例2 SAC注射液的制備工藝1、處方處方1山楂葉提取物50g磷酸/鹽酸川芎嗪 50g/40g注射用水加至5000ml共制備 1000支處方2山楂葉提取物50g磷酸/鹽酸川芎嗪 25g/20g注射用水加至5000ml共制備 1000支處方3山楂葉提取物50g磷酸/鹽酸川芎嗪 75g/60g注射用水加至5000ml共制備 1000支處方4山楂葉提取物100g磷酸/鹽酸川芎嗪 25g/20g注射用水加至5000ml共制備 1000支處方5山楂葉提取物75g磷酸/鹽酸川芎嗪 50g/40g注射用水加至5000ml共制備 1000支2、具體步驟(1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗；(2)將處方量的山楂葉提取物和磷酸/鹽酸川芎嗪加入配液量40％的注射用水加熱溶解完全；(3)補加注射用水至全量；(4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘；(5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭，測定并調(diào)節(jié)溶液的PH值；(6)經(jīng)0.45μm的微孔濾膜精濾；(7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗；(8)將溶液熔封于玻璃安瓿中；(9)100℃流通蒸汽滅菌30分鐘；(10)趁熱將樣品放入0.01％的亞甲藍溶液中檢漏；(11)燈檢；成品全檢，包裝入庫。
實施例3 注射用SAC的制備工藝1、處方處方1山楂葉提取物50g磷酸/鹽酸川芎嗪 50g/40g甘露醇 300g無菌注射用水加至2500ml共制備 1000支處方2山楂葉提取物25g磷酸/鹽酸川芎嗪 75g/60g甘露醇 400g無菌注射用水加至4000ml共制備 1000支處方3山楂葉提取物75g磷酸/鹽酸川芎嗪 25g/20g甘露醇 400g無菌注射用水加至5000ml共制備 1000支處方4山楂葉提取物50g磷酸/鹽酸川芎嗪 25g/20g甘露醇 400g無菌注射用水加至5000ml共制備 1000支2、具體步驟(1)首先將配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，膠塞等進行無菌處理；(2)按照處方量稱取原輔料；(3)將處方量的山楂葉提取物和磷酸/鹽酸川芎嗪加入配液量40％的注射用水加熱溶解完全；再加入甘露醇加熱攪拌溶解完全，補加無菌注射用水至全量；(4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘；(5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的PH值；(6)經(jīng)0.22μm的微孔濾膜精濾；(7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗；(8)分裝于抗生素玻璃瓶中，半壓塞；將樣品放入凍干機中冷凍干燥；-45℃預(yù)凍5小時，低溫真空干燥-45℃～0℃20小時，然后升溫至25℃真空干燥3小時；(9)凍干結(jié)束，壓塞，軋蓋；(10)成品全檢，包裝入庫。
實施例4 SAC氯化鈉注射液的制備工藝1、處方處方1山楂葉提取物75g磷酸/鹽酸川芎嗪 75g/60g氯化鈉 900g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方2山楂葉提取物50g磷酸/鹽酸川芎嗪 75g/60g氯化鈉 900g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方3山楂葉提取物100g磷酸/鹽酸川芎嗪 50g/40g氯化鈉 900g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方4山楂葉提取物50g磷酸/鹽酸川芎嗪 100g/80g氯化鈉 900g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶2、具體步驟(1)前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗；(2)將處方量的山楂葉提取物和磷酸/鹽酸川芎嗪加入配液量40％的注射用水加熱溶解完全；將氯化鈉用配液量40％的注射用水溶解完全；(3)合并兩溶液，補加注射用水至全量；(4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘；(5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的PH值；(6)經(jīng)0.45μm的微孔濾膜精濾；(7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗；(8)灌裝于100ml的輸液瓶中；(9)115℃熱壓滅菌30分鐘；(10)燈檢；成品全檢，包裝入庫。
實施例5 SAC葡萄糖注射液的制備工藝1、處方處方1山楂葉提取物100g磷酸/鹽酸川芎嗪 100g/80g葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方2山楂葉提取物75g磷酸/鹽酸川芎嗪 100g/80g葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方3山楂葉提取物100g磷酸/鹽酸川芎嗪 75g/60g葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方4山楂葉提取物125g磷酸/鹽酸川芎嗪 75g/60g葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶2、具體步驟(1)提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗；(2)將處方量的山楂葉提取物和磷酸/鹽酸川芎嗪加入配液量40％的注射用水加熱溶解完全；將葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全；(3)合并兩溶液，補加注射用水至全量；
(4)加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘；(5)經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的PH值；(6)經(jīng)0.45μm的微孔濾膜精濾；(7)檢查溶液的澄明度，半成品化驗；(8)灌裝于100ml的輸液瓶中；(9)115℃熱壓滅菌30分鐘；(10)燈檢；成品全檢，包裝入庫。
實施例6 SAC片的制備工藝1、處方處方1山楂葉提取物50g磷酸/鹽酸川芎嗪 50g/40g淀粉120.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂2.0g羧甲淀粉鈉 4.0g共制備 1000片處方2山楂葉提取物25g磷酸/鹽酸川芎嗪 125g/100g淀粉120.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂2.0g羧甲淀粉鈉 4.0g共制備 1000片2、具體步驟(1)將山楂葉提取物和磷酸/鹽酸川芎嗪粉碎過100目篩備用；(2)按照處方量稱取原輔料；(3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用；(4)將山楂葉提取物、磷酸/鹽酸川芎嗪、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材；(5)過20目篩制顆粒；(6)顆粒在60℃的條件下烘干；(7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂和羧甲淀粉鈉，過18目篩整粒，混合均勻；(8)取樣，半成品化驗；(9)按照化驗確定的片重壓片；(10)成品全檢，包裝入庫。
實施例7 SAC膠囊的制備工藝1、處方處方1山楂葉提取物75g磷酸/鹽酸川芎嗪 125g/100g淀粉60.0g微晶纖維素 20.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂1.0g共制備 1000粒處方2山楂葉提取物50g磷酸/鹽酸川芎嗪 125g/100g淀粉120.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂2.0g共制備 1000粒2、具體步驟(1)將山楂葉提取物和磷酸/鹽酸川芎嗪粉碎過100目篩備用；(2)按照處方量稱取原輔料；(3)將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用；(4)將山楂葉提取物、磷酸/鹽酸川芎嗪、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材；
(5)過20目篩制顆粒；(6)顆粒在60℃的條件下烘干；(7)干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂，過18目篩整粒，混合均勻；(8)取樣，半成品化驗；(9)按照化驗確定的裝量裝入膠囊；(10)成品全檢，包裝入庫。
實施例8 SAC軟膠囊的制備工藝1、處方處方1山楂葉提取物50g磷酸/鹽酸川芎嗪 50g/40g大豆油 400g大豆磷脂20g蜂蠟12g共制備 1000粒處方2山楂葉提取物25g磷酸/鹽酸川芎嗪 100g/80g大豆油 400g大豆磷脂20g蜂蠟12g共制備 1000粒2、具體步驟(1)處方量的大豆油和大豆磷脂、蜂蠟加熱熔融，混勻，放冷；(2)加入山楂葉提取物和磷酸/鹽酸川芎嗪，混勻，過膠體磨；(3)取樣，半成品化驗；(4)壓制成軟膠囊；(5)成品全檢，包裝入庫。
實施例9 SAC滴丸的制備工藝1、處方
處方1山楂葉提取物50g磷酸/鹽酸川芎嗪 50g/40g聚乙二醇6000600g共制備 1000丸處方2山楂葉提取物125g磷酸/鹽酸川芎嗪 25g/20g聚乙二醇6000600g共制備 1000丸2、具體步驟(1)聚乙二醇6000在水浴中加熱熔融；(2)聚乙二醇6000全部熔融后加入山楂葉提取物和磷酸/鹽酸川芎嗪，攪拌溶解；(3)過60目篩過濾；(4)保持60℃滴入冷至10℃以下的液體石蠟中制成丸；(5)成品全檢，包裝入庫。
實施例10 SAC口服液制備工藝1、處方處方1山楂葉提取物125g磷酸/鹽酸川芎嗪 125g/100g苯甲酸鈉15g甜菊甙 10g水 加至10000ml共制備 1000支處方2山楂葉提取物125g磷酸/鹽酸川芎嗪 100g/80g苯甲酸鈉15g甜菊甙 10g水 加至10000ml共制備 1000支處方3山楂葉提取物100g磷酸/鹽酸川芎嗪 120g/100g苯甲酸鈉15g甜菊甙 10g水 加至10000ml共制備 1000支2、具體步驟(1)聚山梨酯80配制成20％的水溶液，將山楂葉提取物和磷酸/鹽酸川芎嗪加入加熱攪拌溶解完全；(2)將苯甲酸鈉和甜菊甙用配液量20％的水溶解完全；(3)合并上述兩個溶液，補加水至全量；(4)過0.8μm的微孔濾膜過濾；(5)半成品化驗；(6)灌裝；(7)成品全檢，包裝入庫。
實施例11 SAC顆粒的制備工藝1、處方處方1山楂葉提取物50g磷酸/鹽酸川芎嗪 50g/40g糖粉1800.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包處方2山楂葉提取物125g磷酸/鹽酸川芎嗪 50g/40g糖粉1800.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包2、具體步驟(1)將蔗糖粉碎過100篩備用；將山楂葉提取物和磷酸/鹽酸川芎嗪粉碎過100目篩備用；
(2)按照處方量稱取原輔料；(3)將山楂葉提取物、磷酸/鹽酸川芎嗪與糖粉以等量遞加的方法混合均勻，加入2％HPMC50％乙醇溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材；(4)過20目篩制顆粒；(5)顆粒在60℃的條件下烘干；(6)干顆粒過18目篩整粒；(7)取樣，半成品化驗顆粒中主藥的含量，確定裝量；(8)包裝；成品全檢，包裝入庫。
權(quán)利要求
1.一種新的藥物組合物，其特征在于它包括山楂葉提取物、川芎嗪或其藥學(xué)上可接受的鹽。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于所述的山楂葉提取物與川芎嗪或其藥學(xué)上可接受的鹽的重量配比為1∶0.1～10。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于所述的山楂葉提取物與川芎嗪或其藥學(xué)上可接受的鹽的重量配比為1∶0.2～5。
4.如權(quán)利要求1～3所述的任一藥物組合物，其特征在于該組合物可用于制備治療心腦血管疾病的藥物。
5.如權(quán)利要求1～3所述的任一藥物組合物，其特征在于該組合物可制成任一種臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型。
6.如權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于該組合物可制成任注射劑、片劑、膠囊劑、軟膠囊劑、滴丸。
7.如權(quán)利要求1～3所述的任一藥物組合物，其特征在于所述的山楂葉提取物含總黃酮不得少于80.0％，含金絲桃苷不得少于0.40％。
8.如權(quán)利要求1～3所述的任一藥物組合物，其特征在于所述的川芎嗪藥學(xué)上可接受的鹽為磷酸鹽、鹽酸鹽、乳酸鹽、硫酸鹽、甲磺酸鹽、苯甲酸鹽、門冬氨酸鹽、酒石酸鹽。
9.如權(quán)利要求8所述的任一藥物組合物，其特征在于所述的川芎嗪藥學(xué)上可接受的鹽為磷酸鹽、鹽酸鹽。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種新的藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用，包括山楂葉提取物與川芎嗪或其藥學(xué)上可接受的鹽，其重量配比范圍為1∶0.1～10。其中川芎嗪藥學(xué)上可接受的鹽優(yōu)選為磷酸鹽和鹽酸鹽；以山楂葉提取物和磷酸川芎嗪或鹽酸川芎嗪直接投料，制備工藝簡便，可制成各種臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型，優(yōu)選為注射劑、片、膠囊、軟膠囊、滴丸、口服液、顆粒。本發(fā)明還提供了一種制備供注射用的山楂葉提取物的優(yōu)選工藝。山楂葉提取物與川芎嗪或其藥學(xué)上可接受的鹽協(xié)同作用，藥效增強，療效確切，不良反應(yīng)減少，主要用于制備抗心腦血管疾病的藥物。
文檔編號A61K31/4965GK1919266SQ200510044418
公開日2007年2月28日 申請日期2005年8月23日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月23日
發(fā)明者蔡軍 申請人:海南四環(huán)醫(yī)藥有限公司