專利名稱：一種養(yǎng)血清腦顆粒的氣相色譜指紋圖譜檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種養(yǎng)血清腦顆粒的檢測方法。
背景技術(shù)：
養(yǎng)血清腦顆粒是由當(dāng)歸、川芎、白芍、鉤藤、雞血藤、熟地黃、決明子、夏枯草、細(xì)辛、 延胡索和珍珠母11味中藥，采用現(xiàn)代化制劑工藝技術(shù)精制而成，具有養(yǎng)血平肝、活血通絡(luò)的作用，用于血虛肝亢所致的頭痛、眩暈眼花、心煩易怒、失眠多夢等癥，是受國家重點保護(hù)的中藥品種。養(yǎng)血清腦顆粒的配方及制備方法都是現(xiàn)有技術(shù)，被列入國家質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)該標(biāo)準(zhǔn)，養(yǎng)血清腦顆粒是先由11味藥材按照不同的工藝與配比制成3種提取物混合浸膏，再由 3種浸膏按照比例配制而成，具體見國家標(biāo)準(zhǔn)。作為多維組分復(fù)雜樣品的整體性評價中藥質(zhì)量的有效控制手段，中藥指紋圖譜是目前能夠為國內(nèi)外廣泛接受的全面評價中藥質(zhì)量模式的一種方法。美國FDA在植物藥制品指導(dǎo)原則中允許申報者提供產(chǎn)品的色譜指紋圖譜資料，德國藥用植物學(xué)會、英國草藥典、 印度草藥典以及加拿大藥用及芳香植物學(xué)會也都把指紋圖譜作為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的內(nèi)容之一。國內(nèi)學(xué)者謝培山也認(rèn)為，中藥質(zhì)量需綜合評價，指紋圖譜分析是對中藥及制劑進(jìn)行綜合宏觀分析的可行手段之一。但有關(guān)于養(yǎng)血清腦顆粒指紋圖譜方面的研究在國內(nèi)外尚未見報道。為了更好地控制其質(zhì)量，保證臨床用藥的安全性和有效性，本發(fā)明對養(yǎng)血清腦顆粒的揮發(fā)性成分進(jìn)行氣相色譜(GC)分析，找到一種檢測養(yǎng)血清腦顆粒中揮發(fā)性成分的方法，并通過質(zhì)譜分析鑒定出共有峰的化學(xué)成分，為其有關(guān)含量的測定提供了新的模式。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種獲得養(yǎng)血清腦顆粒指紋圖譜的方法，通過建立標(biāo)準(zhǔn)養(yǎng)血清腦顆粒指紋圖譜，對養(yǎng)血清腦顆粒進(jìn)行鑒別。本發(fā)明提供一種獲得養(yǎng)血清腦顆粒指紋圖譜的方法，經(jīng)過以下步驟(1)養(yǎng)血清腦顆粒供試溶液的制備取養(yǎng)血清腦顆粒，用水蒸氣蒸餾法提取，用乙酸乙酯溶解揮發(fā)油成分；(2)將步驟(1)得到的揮發(fā)油注入氣相色譜儀進(jìn)行測定，得到其色譜圖。對于養(yǎng)血清腦顆粒供試溶液的制備，本發(fā)明進(jìn)行了選擇和優(yōu)選，比較了超聲提取法、水蒸氣蒸餾法兩種提取方法和乙醚提取液、乙酸乙酯提取液兩種提取溶劑及提取時間對養(yǎng)血清腦顆粒揮發(fā)性成分提取的影響。其中，超聲提取法獲得的色譜峰面積小、個數(shù)少， 溶劑消耗量大，環(huán)境污染嚴(yán)重。其中，水蒸氣蒸餾法獲得的供試液為淡黃色澄明液體，提取的成分較多，且提取出的組分不污染色譜柱。兩種提取溶劑提取出的組分基本無差別，考慮到乙醚的揮發(fā)性較乙酸乙酯強(qiáng)，在提取以及提取物的保存過程中不如乙酸乙酯穩(wěn)定，所以本實驗采用了乙酸乙酯作為提取溶劑；養(yǎng)血清腦顆粒水蒸氣蒸餾提取4、7、10、1 的結(jié)果表明7h即能提取完全。
因此，根據(jù)本發(fā)明的方法，其中步驟(1)養(yǎng)血清腦顆粒供試溶液的制備優(yōu)選包括如下步驟取養(yǎng)血清腦顆粒12g于250mL圓底燒瓶中，加超純水IOOmL ；自揮發(fā)油測定器上端加乙酸乙酯2mL，保持微沸7h，取乙酸乙酯層至5mL容量瓶中，密封放至室溫并用乙酸乙酯定容至刻度作為養(yǎng)血清腦顆粒成品供試溶液。特別優(yōu)選，養(yǎng)血清腦顆粒供試溶液的制備方法如下取養(yǎng)血清腦顆粒12g于250mL圓底燒瓶中，加超純水100mL。參照《中華人民共和國藥典》2005年版一部附錄》)揮發(fā)油測定法，自揮發(fā)油測定器上端加乙酸乙酯2mL，保持微沸幾，取乙酸乙酯層至5mL容量瓶中，密封放至室溫并用乙酸乙酯定容至刻度作為養(yǎng)血清腦顆粒成品供試溶液。本發(fā)明也對色譜條件的選擇，分別選用了 5種不同的彈性石英毛細(xì)管柱對養(yǎng)血清腦顆粒的揮發(fā)性成分進(jìn)行了分析和比對(I)DB-I (30mX0. 25mm, 0. 25 μ m) ； (2) DB-5MS (30mX 0. 25mm, 0. 25 μ m) ； (3) DB-5MS (30mX 0. 25mm, 1 μ m) ； (4) DB-1701 (30mX 0. 25mm, 0. 25 μ m) ； (5) DB-INNOffAX (30mX 0. 25mm, 0. 25 μ m)。結(jié)果表明( 和C3)獲得的色譜峰數(shù)目最多，分離度最好，分析時間適中，但二者比較之后發(fā)現(xiàn)( 得到的色譜峰存在嚴(yán)重的前延問題，在調(diào)節(jié)了進(jìn)樣量、分流比和程序升溫等因素后仍不能解決，而C3)得到的色譜圖則不存在該問題，因此推斷此條件下前延峰是由色譜柱液膜厚度偏薄造成。因此，根據(jù)本發(fā)明的方法，其中步驟(2)采用的色譜柱是DB-5MS彈性石英毛細(xì)管柱 30mX0. 25mm，1 μ m。根據(jù)本發(fā)明的方法，其中步驟O)中的色譜條件優(yōu)選為色譜柱DB-5MS彈性石英毛細(xì)管柱30mX0. 25謹(jǐn)，1 μ m ；柱溫初始溫度150°C，以 IO0C /min升至210°C保持5min，3°C /min升至240°C保持IOmin ；載氣為高純氮氣，流量 lmL/min ；燃燒氣高純氫氣，流量::35mL/min ；助燃?xì)饪諝?，流?:350mL/min ；氫火焰離子化檢測器溫度250°C ；進(jìn)樣口溫度250°C，分流比50 1，進(jìn)樣量lyL。本發(fā)明的檢測方法，其色譜條件經(jīng)過以下方法學(xué)驗證，證明效果優(yōu)良。色譜時間取養(yǎng)血清腦顆粒供試溶液在本發(fā)明色譜條件下進(jìn)行分析并延長分析時間至60min，結(jié)果表明3Imin 60min沒有色譜峰出現(xiàn)，提示3Imin內(nèi)所有成分出峰完全。精密度試驗取同一供試液，按本發(fā)明色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，以8號色譜峰為參照峰，測定主要共有峰的相對保留時間和相對峰面積，結(jié)果相對保留時間RSD值均小于 0.3%,相對峰面積RSD值均小于2. 4%，表明儀器精密度良好。穩(wěn)定性考察取同一供試液，分別在0,2,4,8,12，24h進(jìn)樣(4°C密封保存)，以8 號色譜峰為參照峰，其共有峰的相對保留時間RSD值均小于0. 5%，相對峰面積RSD值均小于2. 9%，表明Mh內(nèi)樣品穩(wěn)定。重復(fù)性考察取同一批樣品5份，制備供試液進(jìn)樣檢測，以8號色譜峰為參照峰，其共有峰的相對保留時間RSD值均小于0. 9%，相對峰面積RSD值均小于4. 8%，表明樣品重復(fù)性良好。按本發(fā)明色譜條件測定，記錄31min的色譜圖。將10個不同批號制劑(Sl-SlO) 的測定結(jié)果導(dǎo)入國家藥典委員會公布的《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)A版》進(jìn)行處理，結(jié)果見

圖1 (10批養(yǎng)血清腦顆粒樣品圖譜及對照指紋圖譜)。其中，特征指紋峰相對保留時間及相對峰面積考察比較10批供試液色譜圖給出的相關(guān)參數(shù)，發(fā)現(xiàn)有10個峰是各批樣品所共有的，按出峰時間依次標(biāo)定為1 10號峰，且每批非共有峰面積都小于總峰面積的6%。其中單峰面積與總峰面積的比值大于20%的共有峰有8號峰；大于或等于10%的共有峰有6號峰；大于或等于5%有3號峰；其它7個峰面積均小于5%。在所有共有峰中以8號的色譜峰積分百分比最大且最穩(wěn)定，因此以8號峰為參照峰并標(biāo)號為S，計算其余各共有峰相對保留時間及相對峰面積值。10批供試溶液檢測結(jié)果見表1和表2。表1、10批養(yǎng)血清腦顆粒特征指紋峰相對保留時間
權(quán)利要求
1.一種獲得養(yǎng)血清腦顆粒指紋圖譜的方法，經(jīng)過以下步驟(1)養(yǎng)血清腦顆粒供試溶液的制備取養(yǎng)血清腦顆粒，用水蒸氣蒸餾法提取，用乙酸乙酯溶解揮發(fā)油成分；(2)將步驟(1)得到的揮發(fā)油注入氣相色譜儀進(jìn)行測定，得到其色譜圖。
2.如權(quán)利要求1的方法，其中步驟(1)養(yǎng)血清腦顆粒供試溶液的制備包括如下步驟取養(yǎng)血清腦顆粒12g于250mL圓底燒瓶中，加超純水IOOmL ；自揮發(fā)油測定器上端加乙酸乙酯2mL，保持微沸7h，取乙酸乙酯層至5mL容量瓶中，密封放至室溫并用乙酸乙酯定容至刻度作為養(yǎng)血清腦顆粒成品供試溶液。
3.如權(quán)利要求2的方法，其中步驟( 采用的色譜柱是DB-5MS彈性石英毛細(xì)管柱 30mX0. 25mm, 1 μ m。
4.如權(quán)利要求3的方法，其中步驟O)中的色譜條件為色譜柱DB-5MS彈性石英毛細(xì)管柱30m X 0. 25_，1 μ m ；柱溫初始溫度150°C，以 IO0C /min升至210°C保持5min，3°C /min升至240°C保持IOmin ；載氣為高純氮氣，流量 lmL/min ；燃燒氣高純氫氣，流量::35mL/min ；助燃?xì)饪諝?，流?:350mL/min ；氫火焰離子化檢測器溫度250°C;進(jìn)樣口溫度250°C，分流比50 1，進(jìn)樣量lyL。
5.一種養(yǎng)血清腦顆粒的檢測方法，包括以下步驟(A)取合格的養(yǎng)血清腦顆粒產(chǎn)品，按照權(quán)利要求1-4的任一方法建立養(yǎng)血清腦顆粒標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；(B)取待檢養(yǎng)血清腦顆粒，按照權(quán)利要求1的方法得到指紋圖譜；(C)將步驟(B)得到的指紋圖譜和步驟(A)得到的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行比對，符合即為合格產(chǎn)品，不符合即為不合格產(chǎn)品。
全文摘要
本發(fā)明提供一種獲得養(yǎng)血清腦顆粒指紋圖譜的方法，經(jīng)過以下步驟(1)養(yǎng)血清腦顆粒供試溶液的制備取養(yǎng)血清腦顆粒，用水蒸氣蒸餾法提取，用乙酸乙酯溶解揮發(fā)油成分；(2)將步驟(1)得到的揮發(fā)油注入氣相色譜儀進(jìn)行測定，得到其色譜圖。本發(fā)明根據(jù)的養(yǎng)血清腦顆粒自身特點，采用氣相色譜法測定養(yǎng)血清腦顆粒的指紋圖譜，找到了優(yōu)化的色譜條件，使測定結(jié)果精密，重復(fù)性好，穩(wěn)定性良好。
文檔編號A61K9/16GK102441058SQ20101050612
公開日2012年5月9日 申請日期2010年10月14日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月14日
發(fā)明者佟玲, 倪倩, 李文博, 高鈞 申請人:天津天士力制藥股份有限公司