專利名稱：使用1，1，2-三苯基丁-1-烯衍生物治療阿爾茨海默病的制作方法
阿爾茨海默病(AD)是一種腦退化疾病，臨床特征表現(xiàn)為漸進性喪失記憶、識別力、理性、判斷力和情緒穩(wěn)定性、逐漸導致嚴重精神失常以致最后死亡。AD是老年人漸進性精神失常(癡呆)的一個常見原因，AD被認為是美國第四位的最常見導致死亡的醫(yī)學原因。在世界的各種人種和種族中均有AD病發(fā)生，并且成為現(xiàn)在和未來公眾健康問題。該病目前估計大約折磨單獨美國就約有2～3百萬人。目前，AD證明為不治之癥。
AD患者的大腦表現(xiàn)出神經(jīng)元退化和特征性的損傷，后者指各種淀粉樣變性的蝕斑、血管淀粉樣變性血管病以及神經(jīng)原纖維纏亂。大量的這類損傷，尤其是淀粉性變樣的蝕斑和神經(jīng)原纖維纏亂，一般在AD患者腦中的許多區(qū)域被發(fā)現(xiàn)，這些區(qū)域對記憶和識別功能很重要。在不患臨床AD的多數(shù)老年人腦中，發(fā)現(xiàn)了較少數(shù)目的更受限制解剖分布的這種損傷。淀粉樣變性蝕斑和血管淀粉樣變性血管病的特征也表現(xiàn)為個體腦中具有Trisomy(三體性)21(Down綜合癥)和具有Dutch型(HCHWA-D)的淀粉樣變性的遺傳性大腦出血。目前，對AD的確診需要在死于該病的病人腦組織中發(fā)現(xiàn)前述損傷，或者罕見地，在侵入性腦手術過程中取出的腦組織的小活體組織檢查樣品中發(fā)現(xiàn)。
許多證據(jù)表明，特定淀粉樣變性蛋白，即β-淀粉樣變性蛋白(βAP)，的漸進性大腦沉積，在AD的發(fā)病機理中具有種子的作用。參見Selkoe，(1991)，神經(jīng)元(Neuror)6487。最近，已經(jīng)表明βAP從培養(yǎng)物中生長的神經(jīng)元細胞中釋放出來，并且在正常人和AD患者的腦脊髓液中均存在。參見Seubert等人，(1992)自然(Nature)359325-327。
幾組(試驗)已證實蝕斑病理的一個可能相關因素是βAP對培養(yǎng)的神經(jīng)元的直接神經(jīng)毒性。最近已報道與TGF-β的共治療可以減少βAP的神經(jīng)毒性。(Chao等人，神經(jīng)科學學會摘要(Soc.Neurosci.Abs.)，191251(1993))。
最近，除了直接神經(jīng)毒性外，可能由βAP引起的AD腦中的炎癥反應，也對該病的病理有作用。NSAID吲哚美辛的限制性臨床試驗表明了可減緩阿爾茨海默癡呆癥的進程(Rogers等人，科學(Science)，2601719-1720(1993))。歐洲專利申請0659418 A1，公開了使用某些苯并噻吩抑制AD。
雖然對AD機理的研究有所進展，但仍需要開發(fā)治療該病的組合物和方法。治療方法應優(yōu)選基于可以增加腦中TGF-β表達的藥物，從而可以減輕與AD相關的β-淀粉樣變性肽介導的神經(jīng)毒性和炎癥反應。
本發(fā)明涉及抑制阿爾茨海默病的方法，包括給予待治的個體有效量的式I化合物或其藥物可接受的鹽
其中，R1和R2可以相同或不同，前提是當R1和R2相同時，每個均為甲基或乙基，和當R1和R2不同時，其中一個為甲基或乙基，另外一個為氫或芐基。優(yōu)選的式I化合物中R1和R2為甲基。優(yōu)選的鹽為檸檬酸鹽。
本發(fā)明涉及抑制阿爾茨海默病的方法，術語“抑制”定義為包含它的通?？山邮艿囊饬x，包括預防性治療一個病人以防止這些病癥的一種或多種的發(fā)生，持續(xù)地檢查該疾病的癥狀，和/或治療這些癥狀。因此，合適地講，本發(fā)明方法包括醫(yī)學治療和/或預防治療兩種。
本發(fā)明這一方法的實施包括給予待治的個體有效量的式I化合物或其藥物可接受的鹽
其中，R1和R2可以相同或不同，前提是當R1和R2相同時，每個均為甲基或乙基，和當R1和R2不同時，其中一個為甲基或乙基，另一個為氫或芐基。
式I化合物為本領域已知的，通過美國專利5,047,431記載的方法基本上可以制備，該文獻在此引入作為參考。
一個優(yōu)選的式I化合物為其中R1和R2均為甲基。這個優(yōu)選化合物已知為屈洛昔芬，(E)-1-[4′-(2-二甲氨基乙氧基)苯基]-1-(3-羥基苯基)-2-苯基丁-1-烯，它先前記載為一個抗雌激素劑，并且對治療激素依賴性哺乳動物的腫瘤有用(美國專利5,047,431)，也對由于雌激素或類似物缺乏引起的骨病的減輕有用(美國專利5,254,594)。另外，與其它抗雌激素化合物例如它莫西芬相比，屈洛西芬已知為具有較小的子宮促進作用。
雖然式I化合物的自由堿形式可以用于本發(fā)明方法中，但是優(yōu)選制備和使用一種藥物可接受鹽的形式。因此，本發(fā)明方法使用的化合物形成藥物可接受的酸和堿的加成鹽，酸為各種無機酸，優(yōu)選有機酸，并且包括藥物化學中常用的生理可接受鹽。這些鹽也是本發(fā)明的一部分。用于形成此鹽的典型的無機酸包括鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硝酸、硫酸、磷酸、過磷酸等。也可使用由有機酸衍生的化合物，例如，脂肪族一元或二元羧酸、苯基取代的鏈烷酸、羥基鏈烷酸和羥基鏈烷二元酸、芳香酸、脂族和芳族的磺酸。因此這些藥物可接受鹽包括乙酸鹽、苯乙酸鹽、三氟乙酸鹽、丙烯酸鹽、抗壞血酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、鄰-乙酰氧基苯甲酸鹽、萘-2-苯甲酸鹽、溴化物、異丁酸鹽、苯基丁酸鹽、β-羥丁酸鹽、丁炔-1，4-二酸鹽、己炔-1，4-二酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、氯化物、肉桂酸鹽、檸檬酸鹽、甲酸鹽、富馬酸鹽、乙醇酸鹽、庚酸鹽、馬尿酸鹽、乳酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、羥基馬來酸鹽、丙二酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、煙酸鹽、異煙酸鹽、硝酸鹽、草酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、對苯二甲酸鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、丙炔酸鹽、丙酸鹽、苯基丙酸鹽、水楊酸鹽、癸二酸鹽、丁二酸鹽、辛二酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、焦硫酸鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磺酸鹽、苯磺酸鹽、對-溴苯磺酸鹽、氯苯磺酸鹽、乙磺酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、甲磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、對-甲苯磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、酒石酸鹽等等。優(yōu)選的鹽為檸檬酸鹽。
藥物可接受的酸加成鹽一般是通過式I化合物與等摩爾或過量的酸反應制備的。反應物通常在互溶劑例如乙醚或苯中結合。在一小時至10天內(nèi)該鹽一般從溶液中沉淀出來，并可以過濾分離或用常規(guī)方法除去溶劑。
與其母體化合物相比，式I化合物的藥物可接受鹽一般有較好的溶解性能，因此易于制成液體或乳液形式的制劑。
一旦制備完成，式I化合物的游離堿或鹽形式即可采取此處所述方法給藥于待冶個體。以下的非限制性試驗實施例說明本發(fā)明的方法。
在本發(fā)明方法中，式I化合物連續(xù)給藥或一天給藥1至4次。
此處的術語“有效量”指可以抑制此處病理癥狀表現(xiàn)的本發(fā)明方法的化合物量。根據(jù)本發(fā)明，化合物的給藥具體劑量應根據(jù)特定的病例情況加以確定，例如，給藥化合物、給藥方式、病人狀態(tài)及待治病理癥狀的嚴重程度。通常的日劑量包含無毒的劑量水平，為本發(fā)明一種化合物約0.25mg～約100mg/天。優(yōu)選的日劑量為約10mg～約40mg/天。
本發(fā)明化合物可經(jīng)由各種途徑給藥，包括口服、直腸、透皮、皮下、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)和鼻腔內(nèi)。這些化合物優(yōu)選在給藥前形成制劑，如何選擇由臨床醫(yī)師決定。通常，式I化合物或其藥物可接受鹽與一種藥物可接受的載體、稀釋劑或賦形劑結合以形成藥物制劑。
這樣的制劑中總的活性成份占制劑總量的0.1％至99.9％?！八幬锟山邮堋敝篙d體、稀釋劑、賦形劑、和/或鹽必須與制劑的其它成份配伍，并對病人無害。
采用本領域的公知技術方法和公知的易獲得的成分，可以制備含式I化合物的藥物制劑。例如，式I化合物可以與一般賦形劑、稀釋劑或載體一起配制并制成片劑、膠囊劑、懸浮劑、粉劑等等。適于此制劑的載體、賦形劑和稀釋劑的例子包括下述填充劑和增容劑，例如淀粉、蔗糖、甘露醇和硅酸衍生物粘合劑(如羧甲基纖維素和其它的纖維素衍生物)、藻酸鹽、凝膠和聚乙烯吡咯烷酮；潤濕劑例如甘油；分解劑例如碳酸鈣和碳酸氫鈉，延遲溶解劑如石蠟；吸收促進劑如季銨化合物；表面活性劑如鯨蠟醇和甘油單硬脂酸酯、吸收載體例如高嶺土和皂土；潤滑劑例如滑石粉、硬脂酸鈣和鎂，以及固體聚乙二醇。
該化合物可以為方便口服做成酏劑或溶液制劑，或制成適于非腸道給藥的溶液劑，例如用于肌肉內(nèi)、皮下或靜脈內(nèi)給藥。
另外，該化合物很適于制成緩釋制劑等。這種制劑如此組成使之可以只釋放活性成分或優(yōu)選可能在一段延續(xù)時間內(nèi)在某一特定生理部位釋放。覆蓋物、包容物和保護基質(zhì)可由例如聚合物或蠟制得。
式I化合物一般以方便制劑給藥。以下的制劑實施例只用于說明而非意在限制本發(fā)明的范圍。
在下述制劑中，“活性成份”指式I的一種化合物或其鹽。
制劑1明膠膠囊硬明膠膠囊制備如下成份 量(mg/膠囊)活性成份0.25-100淀粉，NF(國家藥品集)0-650淀粉可流動粉0-50硅氧烷流體，350厘沲 0-15使用這些成份制備的一種片劑制劑如下制劑2片劑成份 量(mg/片)活性成份0.25-100纖維素，微晶200-650二氧化硅，泡沫化10-650硬脂酸 5-15將這些組分混合并壓成片劑。
另外，每片含0.25-100mg活性成份的片劑制備如下制劑3片劑成份 量(mg/片劑)活性成份0.25-100淀粉45纖維素，微晶35聚乙烯吡咯烷酮 4(10％水溶液)羧甲基纖維素鈉 4.5硬脂酸鎂0.5滑石粉 1活性成份、淀粉和纖維素濾過編號45目美國篩(No.45 mesh U.S.sieve)并徹底混合。聚乙烯吡咯烷酮與所得粉末混合，然后濾過編號14目美國篩。如此所得的顆粒在50-60℃干燥并濾過編號18目美國篩。羧甲基纖維素鈉、硬脂酸鎂和滑石粉濾過編號60目美國篩，然后加入顆粒中，混合后在壓片機上壓制成片劑。
每5毫升藥劑含0.25-100mg活性成份的單位懸浮劑如下制備制劑4懸浮劑成份 量(mg/5ml)活性成份 0.25-100mg羧甲基纖維素鈉 50mg糖漿 1.25mg苯甲酸溶液 0.10ml調(diào)味劑 足量著色劑 足量純化水至5ml藥劑濾過編號45目美國篩，并與羧甲基纖維素鈉和糖漿混合形成滑性糊狀物。在攪拌下加入用水稀釋的苯甲酸、調(diào)味劑和著色劑。然后加入足量的水至所需體積。制備含有下述成份的氣溶膠制劑5氣溶膠成份量(％重量)活性成份 0.25乙醇 25.75推進劑22(氯代二氟甲烷) 70活性成份與乙醇混合，將混合物加入一部分推進劑22中，冷卻至30℃，并移至一個填充裝置。然后將所需量加入一個不銹鋼容器并用剩余推進劑稀釋。然后將閥部件裝入容器。
栓劑制備如下制劑6栓劑成份 量(mg/栓)活性成份 250飽和脂肪酸甘油酯 2000活性成份濾過編號60目美國篩，并懸浮于預先使用最低的必須熱熔化的飽和脂肪酸甘油酯中。然后將混合物傾入一個通常為2克容量的栓模中并進行冷卻。
靜脈內(nèi)用的制劑制備如下制劑7靜脈內(nèi)溶液成份 量活性成份 20mg等滲鹽水 1,000ml上述組分的溶液以大約一分鐘一毫升速率靜脈內(nèi)注入病人體內(nèi)。
可以給藥式I化合物以預防性和/或治療性處理阿爾茲海默病。在治療性應用中，將化合物給予已患病的宿主中。
在預防性應用中，化合物給予易于患阿爾茲海默病的、但不一定已患病的宿主中?？梢杂苫驋呙韬团R床分析來確認該宿主，如醫(yī)學文獻中所述，參見如Goate，自然(Nature)，349704-706(1991)。無論預防性或治療性原因，接收本發(fā)明化合物的優(yōu)選組為閉經(jīng)后婦女。(參見如，Paganini-Hill，神經(jīng)科學協(xié)會摘要(Soc.Neurosci.Abs.，19，1046))。
根據(jù)本發(fā)明的式I化合物的給藥具體劑量應根據(jù)待治病理癥狀的嚴重程度、給藥方式以及其他的由主治醫(yī)師決定的因素。通常，可接受的和有效的日劑量為約0.1mg～100mg/天，優(yōu)選的日劑量約10mg～40mg/天。這些劑量以每天一至三次給予待治個體，或根據(jù)需要更頻繁些，給藥時間足以抑制阿爾茲海默病或其癥狀的影響。
經(jīng)常地，將藥物組合物直接或間接引入大腦是理想的或必要的。直接的技術一般涉及藥物輸送導管放置在宿主的室系統(tǒng)以便越過血腦屏障。間接技術一般是優(yōu)選的，它包括將親水性藥物轉化為脂溶性藥物形成藥物制劑以提供藥物的潛化作用。潛化作用一般通過阻斷藥物上的羥基和氨基基團使藥物更加脂溶化和易于穿越血腦屏障而實現(xiàn)。另外，通過動脈內(nèi)注入可以暫時打開血腦屏障的高滲溶液可以改善親水性藥物的輸送。
通常優(yōu)選將式I化合物以酸加成鹽的形式給藥，這是具有堿性基團的藥物給藥的慣例。
檢測EP 0659418 A1記載了對治療AD有效的化合物的檢測。
支鏈淀粉可購于Bachem Inc.(Torrance，加利福尼亞州)，半島實驗室公司(Peninsula Laboratories，Inc.(Belmont，加利福尼亞州))和西格瑪化學品公司(Sigma Chemicals(St.Louis，密蘇里州))。淀粉樣蛋白-β(1-40)和反β-淀粉樣肽(40-1)可購于Bachem.Inc.。β2-微球蛋白可購于SigmaChemicals(St.Louis，密蘇里州)。
肽貯存液(1mM)在無熱源無菌的水中新鮮制備并在要求的培養(yǎng)基中稀釋至指示濃度。用肽或賦形劑處理鼠海馬培養(yǎng)物(體外10-14天)四天。鼠皮質(zhì)培養(yǎng)物的存活用相對比顯微技術觀察判斷并以測量釋放到培養(yǎng)基的乳酸脫氫酶(LDH)來定量。
檢測1采用標準細胞培養(yǎng)技術體外培養(yǎng)原發(fā)鼠海馬神經(jīng)元。淀粉樣蛋白-β(Aβ)肽以25μm的正常毒性濃度加入培養(yǎng)的細胞中。處理4天后，存活性由測量釋放至培養(yǎng)基中的LDH來評價。用96孔板在標準340nm動力學的LDH檢測(Sigma目錄號#228-20)于20μl體積的條件確定的DMEM可分量中測量LDH。分析在37℃于PC-驅動EL 340微盤生物動力學(Microplate Biokinetics)盤讀數(shù)儀(Bio-Tek儀器)上進行，數(shù)據(jù)分析用DeltaSoft II軟件(3.30B版本，BioMetallics，Inc.)。每一檢測均進行含標準和升高的血清LDH水平(如，Sigma酶對照組2N和2E)的質(zhì)量對照標準。結果以LDH/升為單位表示，其中1個單位定義為在檢測條件下，每分鐘催化生成1微摩爾的輔酶I所需酶的量。對保護研究，在用Aβ處理之前和/或同時，式I的一種化合物加入到培養(yǎng)物中。
式I化合物的活性可用相對于對照組的釋放入培養(yǎng)基(神經(jīng)毒性指示劑)的LDH的減少來說明。
檢測2對5～15只鼠進行15分鐘的四條血管閉合以致全身性缺血。閉合后15分鐘點的之前、同時和/或幾小時之后給予實驗動物和對照動物本發(fā)明的化合物。局部缺血性損害3天后處死動物，并以標準組織學方法觀察評估海馬和紋狀體的神經(jīng)元損傷。
式I化合物的活性以神經(jīng)元損傷的減少來說明。
檢測3選擇5～15名婦女進行臨床研究。婦女均為閉經(jīng)后，即在研究開始前，已停止月經(jīng)6～12個月，她們診斷患有早期AD，并預料在研究期間AD癥狀將惡化，但其它方面健康狀態(tài)良好。研究有安慰劑對照組，即婦女分為兩組，一個組接受本發(fā)明的化合物，另一組接受安慰劑。對病人的與AD相關的記憶力、識別力、推斷力及其它癥狀進行基準點標記。實驗組的婦女每天口服10～100mg的活性物質(zhì)。她們持續(xù)治療6～36個月。對兩組的作基準點標記的癥狀均作準確記錄，并在研究結束時將這些結果進行比較。研究開始前，結果不但在每組的成員間比較，并且每個病人的結果也與每個病人報告的癥狀相比較。被測藥物的活性由與AD相關的典型識別力衰退和/或行為失常的減弱來說明。
以上檢測的至少一項的活性可以證明式I化合物的實用性。
權利要求
1.一種抑制阿爾茨海默病的方法，包括給予待治的哺乳動物有效量的式I化合物或其藥物可接受鹽，
其中，R1和R2可以相同或不同，前提是當R1和R2相同時，每個均為甲基或乙基，和當R1和R2不同時，其中一個為甲基或乙基，另外一個為氫或芐基。
2.權利要求1的方法，其中式I化合物為其中R1和R2為甲基的化合物或其藥物可接受的鹽。
3.權利要求2的方法，其中所述的鹽為檸檬酸鹽。
4.式I化合物或其藥物可接受鹽在制備抑制阿爾茨海默病的藥物中的應用，
其中，R1和R2可以相同或不同，前提是當R1和R2相同時，每個均為甲基或乙基，和當R1和R2不同時，其中一個為甲基或乙基，另外一個為氫或芐基。
5.權利要求4的應用，其中式I化合物為其中R1和R2為甲基的化合物或其藥物可接受的鹽。
6.權利要求5的應用，其中所述的鹽為檸檬酸鹽。
全文摘要
本發(fā)明提供一種新的抑制阿爾茨海默病的方法，包括給予待治的哺乳動物有效量的式I化合物或其藥物可接受的鹽，其中，R
文檔編號A61P25/28GK1165650SQ97103410
公開日1997年11月26日 申請日期1997年2月28日 優(yōu)先權日1996年2月28日
發(fā)明者戴維·B·麥克萊恩, 戴維·D·湯普森 申請人:美國輝瑞有限公司