專利名稱：預(yù)防繼發(fā)性白內(nèi)障的方法和手段的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及眼科學(xué)領(lǐng)域，更具體說(shuō)涉及預(yù)防繼發(fā)性白內(nèi)障的手段和方法，繼發(fā)性白內(nèi)障是植入或不植入眼內(nèi)晶狀體的囊外白內(nèi)障摘除術(shù)后的一種長(zhǎng)期并發(fā)癥。
近幾年，大量眼內(nèi)晶狀體(IOL)模型獲得了發(fā)展和試驗(yàn)，并且移植技術(shù)有了提高，因此很好地建立了高成功率的眼內(nèi)晶體植入的囊外白內(nèi)障摘除術(shù)。然而視軸后囊的渾濁化仍是一種主要的長(zhǎng)期并發(fā)癥，據(jù)報(bào)道，該病手術(shù)后兩至五年后的發(fā)生率為約50％。這一病癥常稱為繼發(fā)性內(nèi)障或后白內(nèi)障。
對(duì)老年性患者，這種渾濁化的危險(xiǎn)性似乎不太明顯，但對(duì)青年是一個(gè)最主要的危險(xiǎn)因素。還注意到，即使外科醫(yī)生按常規(guī)采用特定移植技術(shù)和相同的IOL類型的手術(shù)，其結(jié)果可能與預(yù)料的相去甚遠(yuǎn)。在某些患者身上，獲得了未渾濁化的良好效果，而另一些在相同條件下手術(shù)的患者都有嚴(yán)重的渾濁化。因此，預(yù)防該渾濁化對(duì)改善白內(nèi)障術(shù)后的長(zhǎng)期效果具有十分重要的意義。
近幾年，試驗(yàn)了大量預(yù)防繼發(fā)性白內(nèi)障的技術(shù)，它們涉及IOL和外科技術(shù)。Hoffer描述的屏障嵴IOL就是這樣一個(gè)例子(US 4244060)。該設(shè)計(jì)的一個(gè)目的是建立-物理屏障，以便抑制殘留的晶狀體上皮細(xì)胞及其衍生物遷移入IOL后視覺(jué)區(qū)。
繼發(fā)性白內(nèi)障通過(guò)進(jìn)行濁化的后晶體囊切開(kāi)術(shù)來(lái)治療。今天，這種切開(kāi)術(shù)通常使用NdYay激光來(lái)進(jìn)行。一激光束射過(guò)瞳孔和IOL，并聚焦于后晶狀體囊。使用這種方法觀察到了幾種并發(fā)癥，據(jù)報(bào)道，這種手術(shù)方法增加了視網(wǎng)膜脫離和囊樣斑水腫的發(fā)生率。
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種預(yù)防與囊外白內(nèi)障切除及眼內(nèi)晶狀體植入有關(guān)混濁化的改進(jìn)方法，該方法是通過(guò)對(duì)后囊壁進(jìn)行化學(xué)改性來(lái)減少細(xì)胞的附著和增殖。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供此類改性的手段。
一般來(lái)講，為了給植入提供具有所需細(xì)胞作用特點(diǎn)的表面，表面改性的方法已運(yùn)用了較長(zhǎng)時(shí)間。在某些申請(qǐng)中，其目的在于完全地避免細(xì)胞附著，然而在另外的申請(qǐng)中則認(rèn)為良好的細(xì)胞附著和生長(zhǎng)對(duì)于獲得良好效果是重要的。由于這一原因，發(fā)展了親水性和疏水性表面，但也有為增加細(xì)胞附著而用正電荷和各種其它官能基團(tuán)對(duì)表面進(jìn)行化學(xué)改性的例子。制備各種插入導(dǎo)管時(shí)常用的各種肝素涂層就是具有獨(dú)特生物活性的親水性表面改性的實(shí)例。其它也能提供親水性表面的化合物的例子是聚乙二醇(PEG)、葡聚糖和磷脂酰膽堿。PEG覆蓋表面的蛋白/細(xì)胞排斥作用的獨(dú)特性質(zhì)可通過(guò)該表層在水相中廣泛的水合作用來(lái)解釋，該水合作用導(dǎo)致了游動(dòng)的PEG分子和該表面外的組份(例如蛋白和細(xì)胞)之間產(chǎn)生空間排斥力。用于特定方面的疏水性表面可通過(guò)使用一層如硅酮或四氟乙烯聚合物(Teflon)來(lái)獲得。
就我們所知，只有少數(shù)出版物涉及到活組織的表面改性。這樣的一個(gè)例子(Pathak C.P.，Sawhney A.S.，Dunn R.C.和HubbelJ.A.Fouth World Biomaterial Congress Berlin 1992Transactions and final Programe P.231)是用生物可降解的水凝膠(聚乙二醇乙交酯基二丙烯酸酯)改性大鼠盲腸和兔子宮角質(zhì)。據(jù)報(bào)道，這些組織的表面生物學(xué)上是不附著的，并形成了可生物相容的物理屏障，從而防止了附著。
依據(jù)本發(fā)明的眼晶狀體囊的改性，其特征在于，通過(guò)該囊的化學(xué)改性，產(chǎn)生穩(wěn)定的覆蓋，該覆蓋例如可共價(jià)地與組織中的化學(xué)基團(tuán)結(jié)合，或與晶狀體囊組織形成一互相滲透的網(wǎng)。聚合物也可是具有附著特性的特定結(jié)構(gòu)，如由海洋蛤貝(Mytilus Eulis)分泌的富含2，3-二羥基苯基丙氨酸的多酚蛋白(Waite J.H.，Chem，Tech.Nov.1987 P.692-697)以及含RGD肽序列的聚合物(Piersbacher，M.D.和Ruoslahti，E.，Nature 1984，309，30-33)均對(duì)組織具有親和性。
依據(jù)本發(fā)明所建立的穩(wěn)定的或永久的薄層是水不溶性的，并且明顯地不同于例如當(dāng)將透明質(zhì)酸注入與眼內(nèi)晶狀體植入相關(guān)的囊內(nèi)時(shí)形成的暫時(shí)的層。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，聚合物如聚乙二醇(PEG)、多糖類、聚乙烯聚丙二醇(聚羥體，即Pluronic和Synperonic)和聚乙烯醇或其衍生物進(jìn)一步被衍生為含有可用于大單體移植、交聯(lián)或聚合到組織上的官能團(tuán)或活性基團(tuán)。
用于這方面的衍生物包括那些與眼囊組織中蛋白的羧酸基、羥基、氨基或硫羥基反應(yīng)的衍生物。可以提及的這類衍生物的例子有醛、酸酐、活性酯如(烷基-氧-甲?；?羧酸酯、硝基苯基碳酸酯、琥珀酰亞氨基羧酸酯、琥珀酰亞氨基碳酸酯、對(duì)硝基苯基羧酸酯、氧羰基咪唑、三氟乙酸酯；烷基和芳基磺酸酯，例如甲苯磺酸酯、甲磺酸酯、三氟乙基磺酸酯；用亞硝酸鹽處理形成相應(yīng)羧甲基疊氮化物的羧甲基酰肼；硫醇、過(guò)氧化物、異氰酸鹽或酯、5-苯基異噁唑鎓-3′磺酸酯衍生物；鹵化物為氯化物、溴化物和碘化物；氯化氰尿酸衍生物以及芳基疊氮化物，在UV照射下，它們與晶狀體囊形成共價(jià)連結(jié)。
本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選方面，該衍生的聚合物是PEG。
多糖及其衍生物的例子是粘多糖為透明質(zhì)酸、肝素、硫酸軟骨素、硫酸皮膚素、葡聚糖、淀粉和淀粉衍生物如羧甲基淀粉；纖維素和纖維素衍生物如羧甲基纖維素和羥丙甲基纖維素。
單體或大分子物質(zhì)首先被允許擴(kuò)散進(jìn)入組織中，然后聚合，形成了互相滲透網(wǎng)。使用含有可聚合基團(tuán)或衍生為含有這類基團(tuán)的單體或大分子體可獲得該滲透網(wǎng)。適用于基團(tuán)聚合的化合物和取代基的例子是丙烯酰胺和酯、肉桂酸衍生物、乙烯基酯和苯乙烯衍生物。
大分子體主要成份的例子是PEG和聚乙二醇聚丙二醇共聚物(聚羥體為Pluronic和Synperonic)。
基團(tuán)聚合可使用引發(fā)劑例如過(guò)氧化物或偶氮化合物為過(guò)氧化苯甲酰、偶氮異丁腈和過(guò)硫酸銨溫?zé)嵬瓿苫蛲ㄟ^(guò)照射完成。
為提高體溫(約37℃)下過(guò)氧化物體系的引發(fā)率，優(yōu)選加入一種促進(jìn)劑。這類促進(jìn)劑的例子有金屬如Co、Fe、Mn、V、Cu等，和叔胺如N，N，N′，N′-四甲基乙二胺(TEMED)。過(guò)氧化物和促進(jìn)劑形成氧化還原引發(fā)體系，該體系產(chǎn)生所用單體或大單體的聚合和/或交聚必需的基團(tuán)。目前使用過(guò)氧化氫和過(guò)硫酸銨分別與TEMED和Fe來(lái)制備該優(yōu)選的體系。
另一起動(dòng)雙鍵官能化的大單體反應(yīng)的方式是通過(guò)照射引發(fā)反應(yīng)。在該方法中，大單體接受激發(fā)能，該能量足以在大單體或光引發(fā)劑上直接產(chǎn)生基團(tuán)并開(kāi)始該反應(yīng)。然后該活性基團(tuán)可用作為植入囊組織的植入位點(diǎn)或作為雙鍵的起始增長(zhǎng)(聚合)點(diǎn)，結(jié)果形成互相滲透網(wǎng)。
還有另一種覆蓋聚合物的方式，在某種程度上獲得共價(jià)取代，然后形成與晶狀體囊組織互相滲透的網(wǎng)，它是應(yīng)用以下實(shí)施例9中描述的縮聚作用，其中使PEG?；扰c聚氧丙烯胺相互反應(yīng)。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中，將聚乙烯醇鈦復(fù)合物覆蓋在晶狀體囊組織上，結(jié)果大大減少了晶狀體表皮細(xì)胞的生長(zhǎng)。
為獲得水不溶性薄層，可以幾種方式(例如根據(jù)兩種相反電荷的聚電解質(zhì)間的電荷作用)自然地生成復(fù)合物。
從幾個(gè)技術(shù)領(lǐng)域均已知可將不同的分子結(jié)合到一表面上，用于該一類領(lǐng)域的層析技術(shù)表明獲得所需覆蓋具有許多方法，這只要從本說(shuō)明書(shū)了解了其一般的概念就可明白。
在這方面，可提到的一個(gè)具體實(shí)例是US 4810784(Larm)中公開(kāi)的肝素的亞硝酸激活，用控制方法將肝素結(jié)合到富含氨基的底物上。
我們還發(fā)現(xiàn)，在晶狀體囊組織的改性中，除應(yīng)用上述類型的化合物外，也可以應(yīng)用低分子量化合物。應(yīng)用溴乙酸處理晶狀體囊引入羧基，從而在生理pH下產(chǎn)生一種負(fù)性電荷表面。這樣一種形成帶電荷表面的低分子量替代層也在用于這方面的術(shù)語(yǔ)“覆蓋”的范圍之內(nèi)。
為產(chǎn)生覆蓋，可在單體、大分子體、聚合物中用試劑處理該晶狀體囊，或者將任何其它反應(yīng)所需的組份溶于生物可接受的溶劑如二甲基亞砜中并置于組織上，之后引發(fā)該反應(yīng)，形成所需薄層。然后用生理可接受的水溶液清洗該組織，除去任何殘留的和未反應(yīng)的組份，所述生理可接受的水溶液優(yōu)選含有眼科學(xué)中常用的透明質(zhì)酸。如果用生物可接受溶劑的溶液，水不溶性聚合物也可能會(huì)覆蓋在晶狀體囊組織上。當(dāng)加入水時(shí)，該聚合物沉積在該組織上。
本發(fā)明還涉及適于眼科使用的組合物，在該組合物的載體中含有有效量的一種或多種定義的物質(zhì)。
在另一方面本發(fā)明提供了一種劑量?jī)x器，該儀器由用于眼內(nèi)注射的注射器構(gòu)成，該注射器含有眼科適用的組合物，在該組合物的載體中含有生理可接受的有效量的以上定義的防止細(xì)胞附著和細(xì)胞生長(zhǎng)的物質(zhì)。
現(xiàn)在通過(guò)一系列實(shí)施例來(lái)說(shuō)明本發(fā)明，由于明顯的原因，這些實(shí)施例的大多數(shù)是在體外試驗(yàn)體系中進(jìn)行的。相應(yīng)于體內(nèi)情形設(shè)計(jì)該體系，這樣可在改性的模型底物上評(píng)價(jià)晶狀體表皮細(xì)胞附著和形態(tài)學(xué)發(fā)展。一系列的試驗(yàn)是用兔白內(nèi)障模型進(jìn)行的。
在體外模型中使用覆蓋培養(yǎng)皿的后晶狀體囊底物或囊外基質(zhì)(ECM)(Biological Industries Kibbutz Beth Haemek Israel)。
按下列方式培養(yǎng)所用的晶狀體表皮細(xì)胞從新鮮的摘出眼球的新西蘭白兔眼中取去晶狀體，將前囊分離并切割成碎塊。在Dulbeccos改良的伊格爾Medium中培養(yǎng)該粘著LEC的囊碎片，所述培養(yǎng)基補(bǔ)有10％胎牛血清、20％ Hams′F-12，1％非必需氨基酸、1％L-谷氨酰胺和1％抗生素抗真菌溶液(均來(lái)源于Gibco)。融合后，該細(xì)胞用0.05％胰蛋白和0.02％EDTA處理10分鐘并被分成1∶3。于37℃和5％CO2下培養(yǎng)該細(xì)胞。
應(yīng)用新鮮的牛尸眼按下述方法制備晶狀體囊用剪刀將眼球進(jìn)行等份分割，取出玻璃體。用一棉花簽去除殘留在晶狀體囊后部的玻璃體。用剪刀將該晶狀體囊剪成前一部份和后一部分。將后部分移到一玻璃平板上，內(nèi)表面向上，然后使其干燥，并最后用一硅酮橡膠環(huán)(RTV Silicone GEC)固定在玻璃平板上，這樣也形成了一個(gè)用液體處理該囊表面的凹下部分。
在各種處理方法前后，要用生理鹽水徹底漂洗晶狀體囊。將該囊存放在生理鹽水中直至它們用于細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)。
用于試驗(yàn)的表面細(xì)胞培養(yǎng)按下述方法規(guī)格化在第4代將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到用于附著實(shí)驗(yàn)的晶狀體囊和培養(yǎng)皿上。每囊使用10,000～20,000個(gè)細(xì)胞，每個(gè)培養(yǎng)皿約50,000個(gè)細(xì)胞。如以上所述，培養(yǎng)該樣品48小時(shí)。除去培養(yǎng)基，該細(xì)胞以1％戊二醛固定，用PBS漂洗并用邁爾蘇術(shù)精染色15分鐘。該樣品用自來(lái)水洗滌并用光學(xué)顯微鏡來(lái)評(píng)價(jià)該細(xì)胞的附著和形態(tài)學(xué)。
經(jīng)培養(yǎng)后，未改性的囊和培養(yǎng)皿表面則完全被晶狀體表皮細(xì)胞覆蓋。這些細(xì)胞的形態(tài)或是典型的表皮多邊形，或是較不規(guī)則的扁平形和更散蔓的細(xì)胞。表明該細(xì)胞有成活力，并具有增殖能力。
下面給出的全部實(shí)施例中，所述的改性方法使附著在改性底物表面的晶狀體細(xì)胞明顯減少。該細(xì)胞的形態(tài)學(xué)研究表明，這些細(xì)胞是圓形的，不能擴(kuò)散，結(jié)果是不能完全附著。培養(yǎng)48小時(shí)后，結(jié)果表明該細(xì)胞沒(méi)有增殖能力。應(yīng)說(shuō)明的是體內(nèi)應(yīng)用上述方法可能需特殊的施用方法。實(shí)施例1應(yīng)用(異丁基-氧-甲?；?PEG琥珀酸酯使晶狀體囊改性按Abuchonski等所述(Cancer Biochem Biophys 7(1984)176)方法，通過(guò)在吡啶中與琥珀酸酐反應(yīng)將單甲氧基PEG 3000(MeOPEG3000-Hoechst)轉(zhuǎn)化為其琥珀酸酯。
5g MeOPEG3000琥珀酸酯溶于40ml二氯甲烷中。加入490μl三乙胺和481μl氯甲酸異丁酯。該溶液攪拌30分鐘后，于30℃蒸發(fā)溶劑。該殘余物用50ml石油醚洗滌，共五次。
該物質(zhì)用于處理晶狀體囊和涂有ECM的培養(yǎng)皿。175mg該物質(zhì)迅速用1ml 0.25M硼酸緩沖液(pH8或9.5)潤(rùn)濕。在該物質(zhì)溶解前，將它施于該晶狀體囊和所述培養(yǎng)皿上。其表面各處理5分鐘。用電子能譜法(ESCA)確證PEG取代作用。實(shí)施例2應(yīng)用PEG的5-苯基異噁唑鎓-3′磺酸酯衍生物使晶狀體囊改性將3g甲氧基PEG3000琥珀酸酯溶于25ml干燥的乙腈中。在冰浴中冷卻該溶液。加入139μl三乙胺，其后再加入0.253mg N-乙基-5-苯基異噁唑鎓-3′-磺酸酯。當(dāng)該溶液達(dá)室溫時(shí)攪拌2小時(shí)。蒸除溶劑，所得物用石油醚洗滌兩次。
將250mg該衍生物迅速溶于0.25M硼酸緩沖液(pH9.5)。并將該溶液立即施于-晶狀體囊上5分鐘。再重復(fù)一次該涂覆過(guò)程。實(shí)施例3應(yīng)用PEG疊氮基衍生物使晶狀體囊改性將300mg PEG1000(Fluka)溶于甲苯、再蒸除溶劑。再重復(fù)一次該過(guò)程。將該物質(zhì)溶于5ml 60％氫氧化鉀溶液。將80mg 4-疊氮基-1-氟-2-硝基苯(Aldrich)溶于10ml甲苯并與PEG溶液混合。于暗處快速攪拌該兩相體系3天。甲苯相的薄層層析表明有二和單取代的PEG-疊氮基衍生物的混合物。甲苯相與水一起振搖。單疊氮基取代的衍生物被分配到水相中，而二疊氮基衍生物仍留在甲苯相中。將兩相溶液蒸發(fā)至干。
將40mg干燥的單疊氮基取代物溶于0.5ml水中。將該溶液施于晶狀體囊上，該囊UV照射10分鐘。
也應(yīng)用蒸發(fā)甲苯相得到的二疊氮基衍生物。在超聲浴中，將20mg該物質(zhì)于水中乳化。將該乳液施于晶狀體囊上，該囊用UV光照射(UV燈為Philips TL K 40W/09N，90mW/cm2)15分鐘。實(shí)施例4應(yīng)用聚乙烯醇(PVA)的疊氮基衍生物使晶狀體囊改性加熱下，將300mg PVA(100％水解的Mw 14,000 EGA，Sweden)溶于5ml水中。加入1g氫氧化鉀。使該溶液冷至室溫。將75mg 4-疊氮基-1-氟-2-硝基苯溶于10ml甲苯中并與PVA溶液混合。在黑暗處，將該二相體系劇烈攪拌過(guò)夜。
將25ml水加到形成的乳液中，并離心該混合物。將水相分離并用乙酸中和，用蒸餾水透析，得到最終體積數(shù)為35ml。
將該透析過(guò)的PVA溶液施于晶狀體囊上5分鐘。去除該溶液并使該囊進(jìn)行UV照射(如實(shí)施例4)10分鐘。實(shí)施例5應(yīng)用環(huán)氧活性葡聚糖使晶狀體囊改性將2g葡聚糖Mw 20,000(Dextran T20，Pharmacia FineChemicals)溶于20ml 0.5％NaOH溶液。將2g 1，4-丁二醇二環(huán)氧甘油醚加到該溶液中，將該溶液攪拌半個(gè)小時(shí)并透析過(guò)夜。在乙醇中沉淀該產(chǎn)物并干燥。
將100mg如此得到的環(huán)氧活性葡聚糖溶于1ml硼酸緩沖液(pH9.5)。將該溶液施于晶狀體囊上半小時(shí)。實(shí)施例6應(yīng)用聚丙烯腈使晶狀體囊改性將25mg聚丙烯腈Mw 150,000(Polysciences)溶于1ml二甲基亞砜(DMSO)中。將該溶液施于晶狀體囊上5分鐘。然后將該囊主要用DMSO洗滌，隨后用鹽水洗滌。實(shí)施例7a，b和c應(yīng)用PEG-丙酸酯使晶狀體囊改性a)將0.3g PEG-二丙烯酸酯400(Polysciences)和5mg N，N，N′，N′-四甲基乙二胺(TEMED)溶于1ml鹽水中。為除去氧，使氮?dú)馀萃ㄟ^(guò)該溶液4分鐘。然后將該溶液施于晶狀體囊上5分鐘，之后除去該溶液并換成過(guò)硫酸銨溶液10.5％的0.9％鹽水溶液)5分鐘。再用該過(guò)硫酸鹽溶液重復(fù)處理一次。
b)將0.4g PEG-二丙烯酸酯400和10mg FeSO4溶于1ml鹽水中。通入氮?dú)?分鐘以除去氧。然后將該溶液施于晶狀體囊上5分鐘，之后除去該溶液并以過(guò)氧化氫溶液(2％的0.9％鹽水溶液)替代施用5分鐘。
c)將0.3g PEG-二丙烯酸酯400和5mg引發(fā)劑Quantacure BTC(Ward Blenkinsop)溶于1ml鹽水溶液。該溶液施于晶狀體囊上5分鐘，之后除去該溶液并使該囊接受2分鐘UV照射(如實(shí)施例3)。實(shí)施例8應(yīng)用丙烯酸化的poloxamer使晶狀體囊改性如實(shí)施例3所述，用甲苯處理25g poloxamer(氧化丙烯-乙烯共聚物-Synperonic F127 Mw 12,000 ICI)。將該物質(zhì)溶于175ml二氯甲烷中。該溶液用冰浴冷卻并加入6.67ml吡啶和7.23ml丙烯酰氯。攪拌該溶液并使之達(dá)室溫過(guò)夜。加入200ml二氯甲烷并過(guò)濾該溶液。該濾液以2,500ml二乙醚沉淀。將該沉淀物溶于水并進(jìn)行透析過(guò)夜。該透析溶液冷凍干燥。
將125mg該干燥物溶于1ml 0.9％鹽水。加入6.4μl TEMED并將該溶液用氮?dú)饷摎?。將該溶液施于晶狀體囊上5分鐘，之后除去該溶液并以過(guò)硫化銨(0.5％的0.9％鹽水溶液)替換施用5分鐘。用該過(guò)硫酸鹽溶液再重復(fù)處理一次。實(shí)施例9應(yīng)用PEG二酰氯和聚氧丙烯胺的縮聚物使晶狀體囊改性如實(shí)施例3，用甲苯處理10g PEG 600-二酸(Fluka)。該物質(zhì)溶于75ml二氯甲烷中。該溶液在氮?dú)庀吕渲?℃。將5ml亞硫酰氯加到該溶液中并攪拌過(guò)夜。蒸發(fā)溶劑，加入50ml甲苯，然后再次蒸發(fā)溶劑。
將2g聚氧丙烯三胺(Jeffamine T-403，Texaco)溶于20ml水。用鹽酸調(diào)該溶液的pH至9.5以下。將該溶液施于晶狀體囊上5分鐘，之后除去溶液。將0.2g PEG酰氯迅速溶于2ml水并立即施于預(yù)先處理過(guò)的晶狀體囊上并保持1分鐘。實(shí)施例10應(yīng)用PVA鈦復(fù)合物使晶狀體囊改性加熱下，將500mg PVA(見(jiàn)實(shí)施例4)溶于10ml 0.9％鹽水中。該溶液冷至室溫并施于晶狀體囊上15分鐘。然后用鹽水洗滌該囊。
將300mg TYZORRTE(異丙氧基(三乙醇氨基(triethanolaminato)-異丙醇鈦，來(lái)源于du Pont)溶于2ml水中。用該溶液處理預(yù)先處理過(guò)的晶狀體囊1分鐘。實(shí)施例11應(yīng)用聚乙二醇二琥珀酰亞氨基丙酸酯使晶狀體囊改性的體外評(píng)價(jià)將150mg PEG 3400二琥珀酰亞氨基丙酸酯(CSPA2-PEG3400，Shearwater Polymers，Huntsville，Alabama)快速溶于1ml等等滲Srensen磷酸緩沖液(pH8.0)(Srensen(1909)，Biochem.Zeits.，21，131)中。相似地制備一種以基于PEG 400為基準(zhǔn)的類似產(chǎn)物。制備好后，將溶液分別立即施于晶狀體囊上，該囊進(jìn)行如下處理。
用白化兔(New Zealand White)作為繼發(fā)性白內(nèi)障模型(見(jiàn)Lundgren等(Lundgren B，Jonsson E & Rolfsen W(1992)Secondary Cataract.An in vivo model on Secondary cataractsin rabbits.Acta Ophthalmal Suppl 20525～28)進(jìn)行體內(nèi)試驗(yàn)。已知兔在IOL植入術(shù)后快速形成繼發(fā)性白內(nèi)障，考慮到其用于治療的可能體系，在早期就引起人們很大興趣，縱然應(yīng)指出的是人類中的情形可能會(huì)有所不同。
這些動(dòng)物依次按標(biāo)準(zhǔn)條件存養(yǎng)，任意給予食餌和飲用自來(lái)水。
共使用12只兔，8周后分析其中的6只，共余的6只在更晚些的時(shí)候進(jìn)行分析。
用鹽酸氯胺酮(KetalarParke-Davis，UK)和氯化zylazine(RompunBayer AG，Germany)麻醉動(dòng)物，用量分別為35和5mg/Kg體重i.m。通過(guò)在每只眼中重復(fù)滴注鹽酸環(huán)戊醇胺酯1％(AlconFort Worth，Texas，USA)和苯福林10％(Sterling-Winthrop，NewYork，USA)，每5分鐘間隔2～3次。將局部用的丁卡因(Smith &Nephew，UK)用于局麻。用Superblade(Kabi Pharmacia，UppsalaSweden)作一2～3mm角膜切口，注射Healon(Kabi Pharmacia)后，進(jìn)行循環(huán)囊破裂(Capsulorhexis)。使用BSS(Alcon FortWorth，Texas，USA)以Phaco乳化摘除晶狀體。
該前室以Healon填充。將75mg聚乙二醇二琥珀酰氨基丙酸酯快速溶于0.5ml無(wú)菌等滲Srensen緩沖液(pH8.0)(如上)。將約200μl的該溶液注射到Healon下的囊中。膜和該溶液在囊袋中保持5分鐘。然后用Phaco尖端抽吸出PEG溶液。如上述制備一種新鮮的PEG琥珀酰亞胺溶液并再次充填該囊。5分鐘后，抽吸出PEG溶液，該囊用Healon充滿并植入眼內(nèi)晶狀體(Model 720A，Kabi Pharmacia AB)。以灌流法除去Healon并用9-0尼龍X-縫線縫合該角膜切口。
在對(duì)照組，用于對(duì)照的眼內(nèi)植入晶狀體，但該囊未用PEG琥珀酰亞胺溶液處理。
手術(shù)后，在結(jié)膜下注射5mg慶大霉素(Schering Corp.N.J.，USA)和1mg倍他米松磷酸酯鈉(Schering Corp.N.J.，USA)。手術(shù)后，用Isopto-Maxidex 1 mg/ml(Alcon Fort Worth，Texas，USA)，每天3次和托品酰胺(Alcon)每天2次處理動(dòng)物，共7天。手術(shù)后，全部眼保持閉合(Clam)，看不到處理的和對(duì)照的眼之間的差別。
8周后用安死術(shù)處死這些動(dòng)物并摘下眼球。將每個(gè)摘下的眼球于中線前的冠處切開(kāi)。按Ludgren等的方法(Lundgren B，Jonsson E& Rolfsen W(1992)Secondary Cataract.Anin vivo model onsecondary cataracts in rabbits，Acta Ophthalmal Suppl 20525～28)小心地取出繼發(fā)性白內(nèi)障并稱其最精密的mg數(shù)。
結(jié)果PEG- 樣品重量(g)動(dòng)物編號(hào)琥珀酰亞胺 對(duì)照眼 PEG-琥珀酰亞胺Mw 處理眼1 3400 0.08730.07802 3400 0.12910.08343 3400 0.16180.09644 400 0.20200.04615 400 0.08360.14596 400 0.09960.0575直至現(xiàn)在，在以這種體內(nèi)模型試驗(yàn)評(píng)價(jià)的大多數(shù)動(dòng)物中，與用預(yù)防細(xì)胞粘連和其后生長(zhǎng)的物質(zhì)處理的眼相比，對(duì)照眼的繼發(fā)性白內(nèi)障的發(fā)展是較高的，這表明了本發(fā)明概念的潛在重要性。
權(quán)利要求
1.一種植入或不植入后室眼內(nèi)晶狀體的囊外白內(nèi)障摘除方法，其特征在于晶狀體囊的后表面，至少在所述囊的視覺(jué)區(qū)是經(jīng)化學(xué)改性的，以防止細(xì)胞附著和生長(zhǎng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中防止細(xì)胞附著的化合物的穩(wěn)定層覆蓋在該晶狀體囊的后表面。
3.權(quán)利要求2的方法，其中覆蓋是共價(jià)結(jié)合于囊組織的。
4.權(quán)利要求2的方法，其中覆蓋與囊組織形成-互相滲透的網(wǎng)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4的任一項(xiàng)的方法，其中覆蓋是選自聚乙二醇、多糖、聚乙烯聚丙二醇和聚乙烯醇及它們的衍生物的一種聚合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的方法，其中聚合物是聚乙二醇或其衍生物。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6任一項(xiàng)的方法，其中所述聚合物是一種可聚合的衍生物或者包含有能與組織表面的官能基團(tuán)反應(yīng)的活性基團(tuán)，例如羧基、羥基、氨基和硫羥基，從而形成該覆蓋。
8.權(quán)利要求7的方法，其中活性基團(tuán)系選自醛、酸酐、活性酯、磺酸酯、疊氮化物、硫醇、環(huán)氧化物、異氰酸酯、鹵化物、丙烯基和乙烯基。
9.權(quán)利要求5的化合物，其中所述聚合物系選自(異丁基-氧-甲酰基)聚乙二醇、聚乙二醇的5-苯基異噁唑鎓-3′-磺酸酯衍生物、聚乙二醇的疊氮衍生物、聚乙二醇二琥珀酰亞氨基丙酸酯、聚乙二醇二丙烯酸酯、聚乙二醇二酰氯和聚氧丙烯胺的縮聚物、聚乙烯醇的疊氮衍生物、聚乙烯醇鈦復(fù)合物、環(huán)氧活性葡聚糖、氧化丙烯和氧化乙烯的丙烯酸共聚物。
10.權(quán)利要求4的方法，其中所述的網(wǎng)是通過(guò)使一種單體或大分子物質(zhì)擴(kuò)散到囊組織中，然后在原來(lái)位置上與上述底物聚合。
11.應(yīng)用一種有效量的化學(xué)物質(zhì)制備囊外白內(nèi)障摘除術(shù)后防止細(xì)胞附著和生長(zhǎng)的覆蓋在晶狀體囊后表面的藥物。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的用途，其中所述物質(zhì)系選自聚乙二醇、多糖、聚乙烯聚丙二醇和聚乙烯醇或它們的衍生物。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的用途，其中所述物質(zhì)是一種可聚合的單體或一種衍生物，它包括醛、酸酐、活性酯、磺酸酯、疊氮化物、硫醇、環(huán)氧化物、異氰酸酯、鹵化物、丙烯基團(tuán)或乙烯基團(tuán)。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的用途，其中所述物質(zhì)是聚乙二醇或其衍生物。
15.適于眼內(nèi)使用的用于覆蓋晶狀體囊后表面的組合物，它含有有效量的生理可接受的防止細(xì)胞附著和生長(zhǎng)的物質(zhì)和載體。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的組合物，其中所述物質(zhì)系選自聚乙二醇、多糖、聚乙烯聚丙二醇、聚乙烯醇和它們的衍生物或可聚合的單體。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的組合物，其中所述物質(zhì)包括醛、酸酐、活性酯、磺酸酯、疊氮化物、硫醇、環(huán)氧化物、異氰酸酯、鹵化物、丙烯基團(tuán)和乙烯基團(tuán)。
18.用于覆蓋晶狀體囊后表面的劑量?jī)x器，它由一眼內(nèi)注射用注射器構(gòu)成，該注射器含有一眼科適用的組合物，該組合物含有有效量生理可接受的防止細(xì)胞附著和生長(zhǎng)的物質(zhì)和載體。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的劑量?jī)x器，其中防止細(xì)胞附著和生長(zhǎng)的物質(zhì)系選自聚乙二醇、多糖、聚乙烯聚丙二醇、聚乙烯醇和它們的衍生物或可聚合的單體。
20.根據(jù)權(quán)利要求18或19的劑量?jī)x器，其中防止細(xì)胞附著和生長(zhǎng)的物質(zhì)包括醛、酸酐、活性酯、磺酸酯、疊氮化物、硫醇、環(huán)氧化物、異氰酸酯、鹵化物、丙烯基團(tuán)和乙烯基團(tuán)。
全文摘要
一種植入或不植入后室眼內(nèi)晶狀體的囊外白內(nèi)障摘除方法，在于晶狀體囊的后表面，至少在所述囊的視覺(jué)區(qū)是經(jīng)化學(xué)改性以防止細(xì)胞的附著和生長(zhǎng)的手段。
文檔編號(hào)A61F9/007GK1101780SQ94190030
公開(kāi)日1995年4月19日 申請(qǐng)日期1994年1月24日 優(yōu)先權(quán)日1993年1月26日
發(fā)明者B·林德奎斯特, P·曼森, T·馬爾森 申請(qǐng)人:法馬西亞制藥公司