專利名稱：一種治療骨質(zhì)疏松癥的藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物組合物及其制備方法，特別是涉及一種治療骨質(zhì)疏松癥的藥物及其制備方法。
本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的淫羊藿∶牡蠣15-25∶1-1.5，優(yōu)選比例為淫羊藿∶牡蠣20∶1；取淫羊藿葉加水煎煮2-4次，每次1-2小時，每次加10-20倍量水，煎液合并，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.02-1.04(60℃)的清膏，加乙醇使含醇量為60-80％，靜置12-48小時，取上清液回收乙醇至無醇味，加水至藥液∶藥材為2∶1，加鹽酸至pH＝2-5，冷藏，放置24-72小時，濾過，沉淀干燥，備用；濾液用聚酰胺吸附法精制，聚酰胺柱吸附法條件徑高比為1∶2-5，藥液濃度按藥材∶藥液為1∶1-3，pH＝2-5，比上樣量為藥材∶聚酰胺2-5∶1，水洗3-6倍柱體積，60-80％乙醇洗脫，至洗脫液顏色加深，開始收集洗脫液，收集1-3倍柱體積，回收乙醇，濃縮、干燥；水洗5-10倍柱體積，洗除乙醇后，重復(fù)上樣；聚酰胺再生方法重復(fù)上樣2-5次后再生1次，用0.5-1％氫氧化鈉水溶液2-5倍柱體積洗除吸附雜質(zhì)后，用pH＝2-4鹽酸水溶液洗，至流出液pH＝2-4后重復(fù)上樣；聚酰胺可再生2次，共上樣9次；每公斤聚酰胺可精制淫羊藿15-30公斤；60-80％乙醇洗脫，洗脫液回收乙醇，濃縮至相對密度為60℃下1.20～1.25的稠膏，干燥；將兩部分干膏合并，粉碎，得淫羊藿提取物，備用；取牡蠣，粉碎，過60目篩，加入8-12倍量20-30％的醋酸，加熱水解3-6小時，濾過，濾液減壓濃縮至半固體，干燥，粉碎，得牡蠣水解物備用。將上述兩部分混合，得藥物組合物，可將藥物組合物直接或加入賦型劑制成臨床可接受的劑型，如片劑、膠囊、口服液體制劑、顆粒劑、泡騰劑、口含片等。
本發(fā)明藥物組合物也可以直接由含有超過50％淫羊藿總黃酮或含有超過15％的淫羊藿苷的淫羊藿有效部位提取物含有超過75％醋酸鈣的牡蠣有效部位水解物1-2∶1-3組成；淫羊藿總黃酮主要含有淫羊藿苷、淫羊藿定C、淫羊藿定B、箭藿苷B、寶藿苷I，寶藿苷II、大花淫羊藿苷C、大花淫羊藿苷F、淫羊藿次苷I等有效成分，其中含有超過15％的淫羊藿苷。優(yōu)選比例為1∶2。
本發(fā)明藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法為鑒別取上述藥物組合物0.2g，加硫酸和乙醇各1ml，加熱，即發(fā)生乙酸乙酯的香氣；取上述藥物組合物碎過80目篩，稱取0.05g，加乙醇10ml，超聲4-8分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1-2ml使溶解，作為供試品溶液；另取淫羊藿苷對照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以8-11∶0.8-1.2∶0.8-1.2∶0.8-1.2乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以8-12％硫酸乙醇液，于100-105℃加熱2-4分鐘；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的黃色斑點；含量測定淫羊藿苷照高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；26-30∶70-74乙腈-水為流動相；檢測波長為270nm；理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計算應(yīng)不低于1500；對照品溶液制備精密稱取淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成5μg/ml的對照品溶液，即得；供試品溶液制備取上述藥物組合物粉碎過80目篩，精密稱取0.1g，置100ml具塞錐形瓶中，精密加入40-60％乙醇45-55ml，密塞，稱定重量，超聲至溶解，再稱定重量，用40-60％乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液0.5ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得；本發(fā)明藥物組合物含淫羊藿以淫羊藿苷計，不得少于50mg/g；醋酸鈣取上述藥物組合物粉碎過80目篩，精密稱取0.5g置坩堝中，緩緩熾灼至完全炭化，放冷至室溫；再在500-700℃熾灼3h使完全灰化，放冷，殘渣加稀鹽酸4-8ml使溶解，置10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1ml稀釋液加水100ml，0.05％甲基紅指示劑1ml，滴加10％氫氧化鉀至溶液至淺黃色，再繼續(xù)多加10ml，加鈣黃綠素0.1g，用乙二胺四乙酸二鈉滴定液滴定，至溶液的黃綠色熒光消失，并呈橙色，即得；每1ml乙二胺四乙酸二鈉滴定液相當于15.8mg的醋酸鈣(Ca(Ac)2)；本發(fā)明藥物組合物含牡蠣以醋酸鈣計不得少于0.5g/g。
本發(fā)明藥物組合物(鑄骨膠囊)經(jīng)藥效學(xué)研究表明，本藥物組合物能抑制大鼠因雌激素水平降低而導(dǎo)致的骨吸收、骨形成異?？哼M；抑制灌胃維甲酸而導(dǎo)致的骨吸收亢進，促進骨形成；增加骨量；改善骨組織的顯微結(jié)構(gòu)；提高骨組織的生物力學(xué)強度；從而具有顯著的抗骨質(zhì)疏松作用。本藥物組合物還具有較強的鎮(zhèn)痛作用以及抗炎和免疫增強作用。
下列實驗例或?qū)嵤├糜谶M一步說明本發(fā)明。實驗例1、鑄骨膠囊對去勢大鼠骨質(zhì)疏松實驗?zāi)Ｐ偷挠绊懛纸M與給藥取雌性SD大鼠65只。隨機選取10只大鼠為假手術(shù)組(n＝10)。其余大鼠做卵巢切除術(shù)5天后，隨機分為骨質(zhì)疏松癥模型組(n＝11)、陽性對照藥骨疏康顆粒組(n＝11)、鑄骨膠囊大劑量組(n＝11)、鑄骨膠囊中劑量組(n＝11)、鑄骨膠囊小劑量組(n＝11)。假手術(shù)組、模型組大鼠每天給予濃度為1.33％的β-環(huán)糊精水溶液，陽性藥組大鼠每天給予骨疏康顆粒2.7g/kg(為成人臨床日用量的8倍)，鑄骨膠囊大、中、小劑量組大鼠每天分別給予鑄骨膠囊劑量分別為400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg(分別為成人臨床日用量的8、4、2倍)。連續(xù)灌胃給藥3個月。
造模方法各組大鼠用10％水合氯醛350mg/kg腹腔注射麻醉，在脊柱兩側(cè)正對卵巢的部位切開1.5cm大小的切口，分離背部肌肉，暴露后腹膜，剪開腹膜后取出雙側(cè)卵巢。假手術(shù)組將卵巢取出后，不做任何處理放回腹腔，縫合創(chuàng)口，消毒；手術(shù)組將雙側(cè)卵巢結(jié)扎后切除，縫合創(chuàng)口，消毒。假手術(shù)組給正常飼料，其余五組給低鈣飼料，自由飲水。飼養(yǎng)3個月后處死。
觀察指標給藥結(jié)束，各組動物經(jīng)10％水合氯醛350mg/kg麻醉，取材。
(1)體重每周稱取一次體重。
(2)臟器指數(shù)大鼠處死后摘取其心、肺、肝、脾、腎、子宮；AND電子天平稱重。臟器指數(shù)計算公式如下 (3)血鈣、血磷和血堿性磷酸酶頸總動脈插管取血，4℃保存4小時，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，分離血清。血鈣測定采用OCPC法，血磷測定采用鉬酸法，血清堿性磷酸酶測定采用金氏法，均按試劑盒說明書程序操作，用MD-100自動生化儀測定。血清鈣、磷、堿性磷酸酶試劑盒均由北京中生生物工程高技術(shù)公司提供。
(4)尿羥脯氨酸(Hydroxyproline，HOP)、肌酐大鼠處死前一天入代謝籠，禁食，正常飲水，收集其24小時尿液(溫度24±2℃、相對濕度50％)。尿羥脯氨酸(Hydroxyproline，HOP)的測定采用改良氯胺-T氧化法測定[2]。羥脯氨酸標準品，由中國科學(xué)院上海生化所提供。肌酐測定采用苦味酸法，按試劑盒說明書程序操作，用MD-100自動生化分析儀測定。肌酐試劑盒由北京中生生物工程高技術(shù)公司提供。
(5)血清激素(雌二醇、降鈣素、骨鈣素)頸總動脈插管取血，4℃保存4小時，3000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，分離血清。雌二醇使用雌二醇放免試劑盒(天津德普生物技術(shù)和醫(yī)學(xué)產(chǎn)品有限公司提供)，測定按試劑盒說明書操作；降鈣素使用降鈣素放免藥盒(中國人民解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免研究所研制、提供)，測定按藥盒說明書操作；骨鈣素使用骨鈣素放免藥盒(中國人民解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免研究所研制、提供)，測定按藥盒說明書操作。
(6)骨密度大鼠處死后，剝?nèi)∑渥髠?cè)股骨，剔凈骨周圍肌肉及軟組織，用生理鹽水擦洗干凈，用生理鹽水紗布分別包裹，-40℃保存，備測骨密度和骨力學(xué)強度。NORLAND X2-36型雙能X射線骨密度儀，測股骨骨密度(BoneMineral Density，BMD，g/cm2)。將左側(cè)股骨仰置于有機玻璃板上進行掃描，步距0.5×0.5mm；掃描速度30mm/s；掃描寬度6.55cm。骨密度測定結(jié)束后，仍將股骨-40℃保存，送測骨力學(xué)強度。
(7)骨力學(xué)強度將股骨置于WD-1型電子萬能試驗機作三點彎曲力學(xué)試驗，跨距25mm，加載速度2mm/min，記錄載荷-變形曲線。從曲線上計算最大載荷、最大橈度、抗彎剛度、能量吸收。
(8)骨無機元素含量大鼠處死后，剝?nèi)∑溆覀?cè)股骨，剔凈骨周圍肌肉及軟組織，用生理鹽水擦洗干凈。樣品送至北京師范大學(xué)測試中心，用美國產(chǎn)Jarrell-Ash ICAP9000型電感耦合等離子光譜儀測定骨中鈣、磷、鎂、鋅、鋁等無機元素的含量。
(9)椎骨骨組織形態(tài)計量學(xué)大鼠處死前第14天，灌胃四環(huán)素(Tetracycline Amersham，購自華美生物工程公司)35～40mg/kg體重，連續(xù)兩天。相隔10天后，再以同樣方法連續(xù)灌胃兩天四環(huán)素。處死后，取第三、四腰椎，經(jīng)固定、脫水、包埋等處理后，用LEICA 2163型不脫鈣骨切片機，制備5μm的縱向不脫鈣骨切片，甲苯胺藍染色。用于熒光觀察的切片不作甲苯胺藍染色。用奧林巴斯BH-2顯微鏡，JVCPK-C1380圖像采集卡觀測，采用骨組織計量學(xué)分析軟件(中國人民解放軍總醫(yī)院骨科研究所研制)對觀測指標進行計量和分析。采用的各項參數(shù)為骨小梁表面百分比、骨形成表面百分比、骨吸收表面百分比、平均骨壁厚度及或礦化沉積率。
(10)股骨組織形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察剝?nèi)∽髠?cè)股骨，剔凈骨周圍肌肉及軟組織，用生理鹽水擦洗干凈；4℃用4％甲醛溶液固定24小時以上，用EDTA脫鈣液脫鈣到合適程度，取股骨上端髖關(guān)節(jié)頭最大面積上冠狀切面縱行剖開，常規(guī)石蠟包埋、切片、HE染色，Olympus顯微鏡觀察，顯微照相。
試驗結(jié)果試驗結(jié)果均以平均值±標準差(X±SD)表示，組間比較采用SAS統(tǒng)計軟件廣義線性模型進行協(xié)方差分析，以p＜0.05作為差異具有顯著性的標準。N為大鼠數(shù)目。實驗過程中，由于創(chuàng)口感染導(dǎo)致個別大鼠死亡。故試驗結(jié)果中大鼠的數(shù)目與試驗分組時有所不同。
1、體重變化表1 動物體重變化表給藥劑量 給藥前(N) 給藥14周后(N)組別(g/kg)(g(只)) (g(只))假手術(shù)組- 282.0±14.6(10) 366.0±29.5(10)***△△△模型組 - 286.4±16.6(11) 440.0±54.8(10)***○骨疏康顆粒組2.7 280.5±12.1(11) 394.4±55.4(9)***△鑄骨膠囊組 0.4 285.0±13.4(11) 387.5±19.1(8)***△鑄骨膠囊組 0.2 288.6±15.0(11) 411.9±50.4(8)***鑄骨膠囊組 0.1 286.8±18.1(11) 420.0±28.6(9)***注①給藥前各組間比較，p＞0.05。
②給藥后與給藥前相比，***p＜0.001。
③給藥后與模型組相比，△△△p＜0.001，△p＜0.05；與大劑量組相比，○p＜0.05。
上表表明各組大鼠給藥前體重?zé)o顯著性差異，組間有可比性。大鼠切除卵巢后，由于雌激素水平迅速下降，造成皮下脂肪的迅速堆積，因此，體重迅速增長。給予鑄骨膠囊大劑量后，大鼠體重迅速增長的趨勢得到控制，表明鑄骨膠囊在一定程度上可抑制大鼠去卵巢后皮下脂肪的堆積。
2、各組大鼠臟器指數(shù)的比較表2各組大鼠臟器指數(shù)(g/100g)劑組別N 心肺肝 脾 腎子宮量假手術(shù)組 - 100.25±0.040.30±0.032.28±0.47 0.14±0.02 0.45±0.070.069±0.013***△△△模型組- 100.24±0.030.29±0.042.11±0.26 0.14±0.03 0.44±0.050.018±0.005△○○○骨疏康顆粒組 2.7 9 0.24±0.030.27±0.042.11±0.36 0.15±0.04 0.44±0.030.022±0.004○○○鑄骨膠囊組0.4 8 0.25±0.050.28±0.062.16±0.36 0.15±0.02 0.46±0.060.025±0.008*○○○鑄骨膠囊組0.2 8 0.23±0.040.28±0.052.23±0.44 0.14±0.03 0.43±0.050.021±0.006○○○鑄骨膠囊組0.1 9 0.24±0.030.30±0.042.14±0.33 0.16±0.03 0.47±0.050.019±0.005○○○
注①與模型組相比，***p＜0.001；*p＜0.05。
②與大劑量組相比，△△△p＜0.001；△p＜0.05。
③與空白組相比○○○p＜0.001。
去除卵巢可導(dǎo)致大鼠子宮萎縮，子宮指數(shù)明顯降低。與模型組比較鑄骨膠囊各給藥組能夠不同程度改善去卵巢大鼠的子宮指數(shù)；大劑量組有顯著性差異。
3、血清鈣、磷、堿性磷酸酶和尿脯氨酸/肌酐表3 藥物對模型大鼠血清鈣、磷、堿性磷酸酶和尿脯氨酸/肌酐的影響劑量 N CaP ALP組別 HOP/Cr(g/kg) (只) (mmol/L) (mmol/L) (U/L)假手術(shù)組 - 10 2.70±0.351.38±0.1949.0±5.6***0.92±0.11***模型組- 10 2.53±0.351.40±0.1668.7±5.8△△△2.34±0.30△△△骨疏康顆粒組 2.79 2.70±0.331.44±0.1857.9±6.0***1.27±0.12***△△鑄骨膠囊組0.48 2.74±0.261.40±0.1953.3±6.8***1.00±0.13***鑄骨膠囊組0.28 2.54±0.251.40±0.1360.6±7.6**△1.78±0.25***△△△鑄骨膠囊組0.19 2.64±0.261.43±0.1866.8±4.8△△△1.94±0.20***△△△注①與模型組相比，***p＜0.001；**p＜0.01。
②與大劑量組相比，△△△p＜0.001；△△p＜0.01；△p＜0.05。
模型組大鼠的血清堿性磷酸酶活性(ALP)與尿羥脯氨酸/肌酐(HOP/Cr)均比空白組升高，有顯著性差異。表明去勢引起骨形成與骨吸收作用同時增強，但骨吸收相對大于骨形成，骨量不能維持平衡而導(dǎo)致大鼠骨質(zhì)疏松。
鑄骨膠囊大、中劑量組及骨疏康能使堿性磷酸酶活性比模型組降低；鑄骨膠囊大、中、小劑量組及骨疏康均能使尿羥脯氨酸/肌酐比模型組降低；均有顯著性差異。鑄骨膠囊大劑量組的作用比其他治療組強，有顯著性差異。
提示鑄骨膠囊可改善去勢骨質(zhì)疏松模型大鼠的堿性堿性磷酸酶與尿羥脯氨酸/肌酐的異常增長。
4、血清激素表4 藥物對大鼠激素水平的影響劑量 N 雌二醇降鈣素骨鈣素組別(g/kg) (只) (ng/L)(ng/L)(μg/L)假手術(shù)組 - 1014.11±1.46***△△238.4±19.3***△△△1.45±0.17***△△△模型組- 107.01±0.99△△△156.8±22.7△△0.82±0.09△△△骨疏康顆粒組 2.79 11.52±1.65***184.2±18.2**△1.05±0.13***△△鑄骨膠囊組0.48 12.42±1.23***205.5±21.6***1.23±0.10***鑄骨膠囊組0.28 8.40±0.87*△△△173.4±16.9△△0.89±0.11△△△鑄骨膠囊組0.19 7.73±1.01△△△167.8±18.4△△△0.84±0.05△△△注①與模型組相比，***p＜0.001；**p＜0.01；*p＜0.05。
②與大劑量組相比，△△△p＜0.001；△△p＜0.01；△p＜0.05。
模型組大鼠的上述三項血清激素水平比空白組降低，有顯著性差異。
鑄骨膠囊大、中劑量組及骨疏康組能使血清雌二醇含量比模型組升高；鑄骨膠囊大劑量組及骨疏康組能使血清降鈣素、骨鈣素含量比模型組升高；均有顯著性差異。鑄骨膠囊大劑量組對雌二醇的治療作用好于其中、小劑量組，鑄骨膠囊大劑量組對血清降鈣素、骨鈣素的改善作用好于其它治療組。此結(jié)果提示鑄骨膠囊與骨疏康均能提高骨質(zhì)疏松模型大鼠的血清激素水平。
5、股骨骨密度表5 藥物對大鼠股骨骨密度的影響組別劑量(g/kg) N(只) 骨密度(g/cm2)假手術(shù)組-10 0.1597±0.0033***△模型組 -10 0.1443±0.0068△△骨疏康顆粒組2.7 9 0.1525±0.0052**鑄骨膠囊組 0.4 8 0.1536±0.0065**鑄骨膠囊組 0.2 8 0.1 494±0.0056鑄骨膠囊組 0.1 9 0.1480±0.0064△注①與模型組相比，***p＜0.001；**p＜0.01。
②與大劑量組相比，△△p＜0.01；△p＜0.05。
大鼠去勢可引起骨密度明顯降低，形成骨質(zhì)疏松，表明模型成功。
經(jīng)鑄骨膠囊大劑量和骨疏康治療后，均比模型組大鼠的骨密度顯著升高。
此結(jié)果提示鑄骨膠囊與骨疏康均能增加去勢骨質(zhì)疏松模型大鼠的骨密度。
6、股骨無機元素表6 藥物對大鼠股骨無機元素含量的影響劑量N Ca P Zn Mg組別(g/kg) (只)(mg/g) (mg/g) (μg/g) (mg/g)假手術(shù)組 - 10 198.2±7.9***64.1±2.3214.7±5.1***△△3.47±0.27***模型組- 10 178.7±7.9△△△62.0±3.6 191.2±4.3△△△2.32±0.32△△△骨疏康顆粒組 2.7 9 189.0±4.7**△63.9±4.2 201.6±12.1**3.04±0.15***△鑄骨膠囊組0.4 8 195.8±3.4***63.9±1.4 204.5±6.9***3.40±0.28***鑄骨膠囊組0.2 8 187.8±6.8**△64.3±3.0 199.7±10.0*2.99±0.32***△△鑄骨膠囊組0.1 9 184.5±7.8△△63.6±2.7 195.7±7.3△2.81±0.33***△△△注①與模型組相比，***p＜0.001；**p＜0.01；*p＜0.05。
②與大劑量組相比，△△△p＜0.001；△△p＜0.01；△p＜0.05。
去卵巢所致的骨質(zhì)疏松大鼠，骨組織中鈣、鎂、鋅的含量均顯著降低。
鑄骨膠囊大、中劑量組及骨疏康組能明顯提高骨鈣、鋅的含量；鑄骨膠囊大、中、小劑量組及骨疏康組能明顯提高骨鎂的含量；均有顯著性差異。鑄骨膠囊大劑量組提高骨鈣、骨鎂的作用明顯優(yōu)于其它治療組。
提示鑄骨膠囊具有能抑制骨吸收，減少骨丟失；能促進機體對鈣的吸收和利用；并提供鎂、鋅等多種無機元素，以有利于鈣磷代謝及骨礦的沉積等作用。
7、股骨生物力學(xué)表7 藥物對大鼠股骨生物力學(xué)強度的影響劑量N 最大載荷 最大橈度 抗彎剛度 能量吸收組別(g/kg) (只)(N) (mm) (N/mm)(N·mm)假手術(shù)組- 10 118.1±9.9***0.84±0.08***180.3±23.8***43.5±5.6***模型組 - 10 91.3±8.0△△0.63±0.04△△△146.1±12.5△△△25.5±3.1△△△骨疏康顆粒組2.7 9 101.2±8.5*△0.73±0.07**△163.2±17.2*35.3±3.9***△△鑄骨膠囊組 0.4 8 110.6±10.3***0.81±0.06***175.9±22.0***41.5±5.3***鑄骨膠囊組 0.2 8 99.0±7.4△0.71±0.09*△△160.0±12.7 32.2±3.8**△△△鑄骨膠囊組 0.1 9 96.9±8.7△△0.69±0.08△△151.5±14.4△△27.6±3.0△△△鑄骨膠囊組0.48 110.6±10.3***0.81±0.06***175.9±22.0***41.5±5.3***鑄骨膠囊組0.28 99.0±7.4△0.71±0.09*△△160.0±12.7 32.2±3.8**△△△鑄骨膠囊組0.19 96.9±8.7△△0.69±0.08△△151.5±14.4△△27.6±3.0△△△注①與模型組相比，***p＜0.001；**p＜0.01；*p＜0.05。
②與大劑量組相比，△△△p＜0.001；△△p＜0.01；△p＜0.05。
模型組大鼠的上述各項指標均顯著低于空白對照組，較小的外力和能量即可使骨折發(fā)生，表明去卵巢使大鼠骨質(zhì)疏松，骨組織結(jié)構(gòu)改變，彈性下降，骨折危險性增加。
鑄骨膠囊大劑量組及骨疏康能提高最大載荷、抗彎剛度；鑄骨膠囊大、中劑量組及骨疏康組能提高最大橈度、能量吸收；均有顯著性差異。而鑄骨膠囊大劑量組在提高最大載荷、最大橈度、能量吸收方面顯著優(yōu)于其它治療組。
表明鑄骨膠囊能明顯改善骨質(zhì)疏松大鼠骨組織的力學(xué)性能，降低骨折危險性。這與鑄骨膠囊能升高骨密度，增加骨礦鹽含量，增加骨量有關(guān)。
8、骨組織形態(tài)計量學(xué)表8 藥物對大鼠骨組織形態(tài)計量學(xué)參數(shù)的影響劑 骨小梁表面 骨吸收表面 骨形成表面 平均骨壁礦化沉積率組別N量 百分比(％) 百分比(％) 百分比(％) 厚度(μm) (μm/d)55.7±2.7***4.55±0.67***0.44±0.03***假手術(shù)組 - 610.7±1.1***4.03±0.58***△△△△△△△35.3±4.5 11.81±1.71 21.1±2.92.82±0.34 0.24±0.02模型組 - 6△△△△△△△△△△△△△△△骨疏康顆粒 42.8±5.7**8.62±0.91***16.3±1.9***3.35±0.36*0.31±0.03***2.76組△△△△△△△△鑄骨膠囊組 0.4648.8±4.5***6.64±0.84***12.2±1.6***3.85±0.28***0.37±0.03***41.0±3.5*8.91±1.27***16.8±2.2**3.27±0.40 0.28±0.03**鑄骨膠囊組 0.26△△△△△△△△△△△37.4±3.9 10.59±1.19 20.2±2.3 3.10±0.30 0.25±0.03鑄骨膠囊組 0.16△△△△△△△△△△△△△△注①與模型組相比，***p＜0.001；**p＜0.01；*p＜0.05。
②與大劑量組相比，△△△p＜0.001；△△p＜0.01；△p＜0.05。
實驗結(jié)果顯示，大鼠去勢后，骨小梁及其形態(tài)發(fā)生明顯改變，骨小梁表面百分比、平均骨壁厚度和礦化沉積率均顯著低于空白對照組，骨形成表面百分比、骨吸收表面百分比明顯增加，骨小梁數(shù)目減少，變細，稀疏，骨小梁間隙增大，表明大鼠去勢后，骨形成與骨吸收均亢進，但骨吸收相對大于骨形成，導(dǎo)致骨量丟失而致骨質(zhì)疏松。
鑄骨膠囊大、中劑量組及骨疏康組能使骨小梁表面百分比、礦化沉積率比模型組提高，顯著降低骨形成表面百分比、骨吸收表面百分比；鑄骨膠囊大劑量組及骨疏康組能使平均骨壁厚度增加；均有顯著性差異。鑄骨膠囊大劑量組在上述五個指標方面均優(yōu)于其它劑量組。
表明鑄骨膠囊能明顯促進骨質(zhì)疏松大鼠類骨質(zhì)的形成和礦化，并抑制骨吸收、骨形成的異常增長，能在一定程度上改善骨的顯微結(jié)構(gòu)，從而既增加了骨量，又改善了骨結(jié)構(gòu)，因此使骨的力學(xué)性能大大提高。實驗例2鑄骨膠囊對去勢大鼠股骨組織形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響脫鈣骨切片HE染色后，顯微鏡下觀察可見，鑄骨膠囊治療組比模型組骨小梁增粗，斷裂點減少，骨小梁條數(shù)增多，排列較整齊；膠原纖維排列整齊，連續(xù)性較好。實驗例3鑄骨膠囊對維甲酸大鼠骨質(zhì)疏松實驗?zāi)Ｐ偷挠绊懛纸M及給藥取大鼠60只。按體重隨機分為6組。空白對照組(n＝10)，骨質(zhì)疏松癥模型組(n＝10)，陽性對照藥骨疏康顆粒組(n＝10)，鑄骨膠囊大劑量組(n＝10)，鑄骨膠囊中劑量組(n＝10)，鑄骨膠囊小劑量組(n＝10)?？瞻捉M、模型組大鼠每天給予濃度為1.33％的β-環(huán)糊精水溶液，陽性藥組大鼠每天給予骨疏康顆粒2.7g/kg(為成人臨床日用量的8倍)，鑄骨膠囊大、中、小劑量組大鼠每天分別給予鑄骨膠囊劑量分別為400mg/kg、200mg/kg、100mg/kg(分別為成人臨床日用量的8、4、2倍)。連續(xù)灌胃給藥4周(即停用維甲酸后繼續(xù)使用兩周)。
造模方法以1％羧甲基纖維素鈉為溶媒，將維甲酸配制成0.7％的混懸液，4℃避光保存，備用。除空白組以外的其它6組大鼠均用0.7％維甲酸混懸液每天給予70mg/kg灌胃，連續(xù)2周后停用。
觀察指標
(3)尿羥脯氨酸(Hydroxyproline，HOP)、肌酐的測定測定方法同實驗一。
(4)骨密度測定測定方法同實驗一。
(5)骨力學(xué)強度測定測定方法同實驗一。
(6)骨無機元素含量測定方法同實驗一。
(7)椎骨組織形態(tài)計量學(xué)測定按實驗一方法制備5μm的橫向不脫鈣骨切片，觀察、測定。
(8)股骨組織形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察方法同實驗一。
試驗結(jié)果試驗結(jié)果均以平均值±標準差(X±SD)表示，組間比較采用SAS統(tǒng)計軟件廣義線性模型進行協(xié)方差分析，以p＜0.05作為差異具有顯著性的標準。
N為大鼠數(shù)目。實驗過程中，由于維甲酸的毒性導(dǎo)致個別大鼠死亡。故試驗結(jié)果中大鼠的數(shù)目與試驗分組時有所不同。
9、體重變化表9 動物體重變化表給藥劑量 給藥前 給藥4周后組別(g/kg)(g(只)) (g(只))空白組 - 200.1±12.2(10) 281.8±17.9(10)***△△△模型組 - 198.6±10.2(10) 204.0±33.1(8)○○○骨疏康顆粒組2.7 201.2±12.3(10) 284.8±13.2(9)***△△△鑄骨膠囊組 0.4 201.6±13.2(10) 290.1±20.8(8)***△△△鑄骨膠囊0.2 203.6±9.6(10) 290.1±9.9(9)***△△△鑄骨膠囊組 0.1 200.8±11.7(10) 286.6±17.1(9)***△△△注①給藥前各組間比較，p＞0.05。
②給藥后與給藥前相比，***p＜0.001。
③給藥后與模型組相比，△△△p＜0.001；與大劑量組相比，○○○p＜0.001。
上表表明各組給藥前體重?zé)o顯著性差異，各組有可比性。維甲酸的毒性可引起大鼠體重增長減緩甚至負增長。而鑄骨膠囊及骨疏康均可抑制維甲酸的毒性，從而使之得到改善。
10、血清鈣、磷、堿性磷酸酶和尿脯氨酸/肌酐表10 藥物對模型大鼠血清鈣、磷、堿性磷酸酶和尿脯氨酸/肌酐的影響劑量 N Ca P ALP組別HOP/Cr(g/kg) (只) (mmol/L) (mmol/L) (U/L)空白組-10 12.8±1.67.41±0.78140.8±17.3***0.86±0.08***△△模型組-8 11.8±1.38.16±1.14107.3±8.7△△△2.40±0.31△△△骨疏康顆粒組 2.7 9 12.0±1.68.14±0.98131.1±15.0***1.31±0.18***△鑄骨膠囊組0.4 8 11.8±1.78.17±1.18138.6±15.8***1.11±0.10***鑄骨膠囊組0.2 9 11.9±1.07.48±1.00121.3±10.9*△1.35±0.15***△△鑄骨膠囊組0.1 9 11.8±0.97.22±0.93108.4±8.9△△△1.70±0.17***△△△注①與模型組相比，***p＜0.001；*p＜0.05。
②與大劑量組相比，△△△p＜0.001；△△p＜0.01；△p＜0.05。
試驗表明大鼠灌胃維甲酸后，與空白組相比，可導(dǎo)致血清堿性磷酸酶降低，尿羥脯氨酸與肌酐的比值升高，進而導(dǎo)致骨形成降低，骨吸收亢進。
鑄骨膠囊大、中劑量組及骨疏康能使堿性磷酸酶活性比模型組升高；鑄骨膠囊大、中、小劑量組及骨疏康均能使尿羥脯氨酸/肌酐比模型組降低；均有顯著性差異。鑄骨膠囊大劑量組的作用明顯好于其他治療組。
表明鑄骨膠囊能夠改善維甲酸導(dǎo)致的血清堿性磷酸酶和尿羥脯氨酸/肌酐的異常變化。
11、股骨骨密度表11 藥物對模型大鼠股骨骨密度的影響組別劑量(g/kg)N(只) BMD(g/cm2)空白組 - 10 0.1611±0.0074***△模型組 - 8 0.1442±0.0060△△骨疏康顆粒組2.7 9 0.1521±0.0050*鑄骨膠囊組 0.4 8 0.1545±0.0090**鑄骨膠囊組 0.2 9 0.1496±0.0058鑄骨膠囊組 0.1 9 0.1456±0.0063△△
注①與模型組相比，***p＜0.001；**p＜0.01；*p＜0.05。
②與大劑量組相比，△△△p＜0.001；△△p＜0.01；△p＜0.05。
維甲酸骨質(zhì)疏松大鼠模型組，與正常組相比骨密度顯著降低。表明灌胃維甲酸會導(dǎo)致骨質(zhì)破壞。
鑄骨膠囊大劑量組、骨疏康組可使骨密度比模型組顯著升高，有顯著性差異。
表明鑄骨膠囊能對抗灌胃維甲酸導(dǎo)致的大鼠股骨骨密度降低。
12、股骨無機元素表12 藥物對大鼠股骨無機元素含量的影響劑量N Ca P Zn Mg組別(g/kg) (只) (mg/g) (mg/g)(μg/g)(mg/g)空白組 - 10 198.4±5.4***115.6±7.1237.9±15.1***3.99±0.16***模型組 - 8 176.2±4.3△△△115.2±3.8216.1±3.1△△△3.72±0.12△△△骨疏康顆粒組2.7 9 188.6±5.9***△115.5±4.2245.7±11.8***3.85±0.12*△鑄骨膠囊組 0.4 8 195.1±6.0***116.7±3.7239.4±9.8***3.97±0.12***鑄骨膠囊組 0.2 9 188.4±3.3***△△115.4±2.8235.1±13.8**3.82±0.08△鑄骨膠囊組 0.1 9 182.2±5.2*△△△114.7±3.2234.3±10.5**3.77±0.10△△△注①與模型組相比，***p＜0.001；**p＜0.01；*p＜0.05。
②與大劑量組相比，△△△p＜0.001；△△p＜0.01；△p＜0.05。
維甲酸所致的骨質(zhì)疏松大鼠，骨組織中部分無機元素的含量也會顯著降低。
鑄骨膠囊大、中、小劑量組及骨疏康組能明顯提高骨鈣、鋅的含量；鑄骨膠囊大劑量組及骨疏康組能明顯提高骨鎂的含量；均有顯著性差異。鑄骨膠囊大劑量組提高骨鈣、骨鎂的作用明顯優(yōu)于骨疏康及其中、小劑量。
表明鑄骨膠囊對灌胃維甲酸導(dǎo)致的大鼠骨組織無機元素丟失，有明顯的改善。
13、股骨生物力學(xué)表13 藥物對大鼠股骨生物力學(xué)強度的影響劑量 N 最大載荷 最大橈度 抗彎剛度 能量吸收組別(g/kg) (只) (N)(mm) (N/mm) (N·mm)空白組-10 95.4±11.0***1.01±0.11***176.8±16.0***25.2±2.2***模型組-8 74.1±8.3△△△0.74±0.10△△△150.7±13.5△△13.9±1.5△△△骨疏康顆粒組 2.7 9 84.6±9.5*△0.87±0.10**△166.6±15.3*21.7±2.6***△鑄骨膠囊組0.4 8 93.7±7.9***0.98±0.09***175.1±14.6**24.1±1.9***鑄骨膠囊組0.2 9 83.4±3.8*△0.79±0.08△△△162.4±15.720.1±2.1***△△△鑄骨膠囊組0.1 9 80.9±10.0△△0.76±0.08△△△153.8±13.8△△16.9±2.2**△△△注①與模型組相比，***p＜0.001；**p＜0.01；*p＜0.05。
②與大劑量組相比，△△△p＜0.001；△△p＜0.01；△p＜0.05。
結(jié)果表明維甲酸可導(dǎo)致大鼠股骨生物力學(xué)指標顯著降低，增加骨折的危險性。
鑄骨膠囊大、中劑量組及骨疏康能提高最大載荷；鑄骨膠囊大劑量組及骨疏康組能提高最大橈度、抗彎剛度，鑄骨膠囊大、中、小劑量組及骨疏康能提高能量吸收；均有顯著性差異。而鑄骨膠囊大劑量組在提高最大載荷、最大橈度、能量吸收方面顯著優(yōu)于其它治療組。
表明鑄骨膠囊能明顯改善維甲酸骨質(zhì)疏松大鼠骨組織的力學(xué)性能，降低骨折的危險性。
14、骨組織計量學(xué)表14 藥物對大鼠骨組織形態(tài)計量學(xué)參數(shù)的影響劑骨小梁面積 骨吸收面積 骨形成面積平均骨壁 礦化率組別 N量百分比(％) 百分比(％) 百分比(％)厚度(μm) (μ m/d)42.5±4.2***19.48±1.37***0.37±0.05***空白組 - 10 4.79±0.55***4.69±0.65***△△△△△△29.2±3.3 18.54±2.50 5.05±0.70 2.96±0.39 0.16±0.02模型組 - 8△△△△△△△△△△△△△△△骨疏康顆 33.2±2.3*8.54±0.85***13.48±1.42***3.96±0.21***0.26±0.03***2.7 9粒組△△△△△△△△鑄骨膠囊0.4 8 38.2±3.8***5.69±0.70***16.04±2.02***4.55±0.52***0.30±0.04***組鑄骨膠囊 32.5±2.7 10.30±1.23***11.44±1.54***3.60±0.48*0.25±0.03***0.2 9組△△△△△△△△△△△△鑄骨膠囊 30.3±1.9 16.28±2.16*9.46±1.33***3.07±0.35 0.18±0.020.1 9組△△△△△△△△△△△△△△△
注①與模型組相比，***p＜0.001；**p＜0.01；*p＜0.05。
②與大劑量組相比，△△△p＜0.001；△△p＜0.01；△p＜0.05。
大鼠灌胃維甲酸后，會導(dǎo)致骨形成減少，骨吸收亢進，破壞骨小梁。
與模型組相比，鑄骨膠囊大劑量組及骨疏康組能增加骨小梁面積百分比；鑄骨膠囊大、中、小劑量組及骨疏康組均能增加骨形成面積百分比，降低骨吸收面積百分比。鑄骨膠囊大、中劑量組及骨疏康組能增加骨壁厚度、礦化沉積率。鑄骨膠囊大劑量組各項指標均優(yōu)于其它治療組。
表明鑄骨膠囊能對抗維甲酸導(dǎo)致的骨形成減少，吸收亢進，修復(fù)骨小梁。
15、骨組織形態(tài)結(jié)構(gòu)鑄骨膠囊治療組比模型組骨小梁增粗，斷裂點減少，骨小梁條數(shù)增多，排列較整齊；膠原纖維排列整齊，連續(xù)性較好。(參見附錄VII～VIII頁彩圖)實驗例3鑄骨膠囊鎮(zhèn)痛作用的實驗研究(扭體法)分組及給藥將動物隨機分為空白對照組；陽性藥組(元胡止疼片，劑量0.75g/kg，為成人臨床日用量的10倍)；鑄骨膠囊大劑量(500mg/kg)、中劑量(250mg/kg)、小劑量(125mg/kg)3個劑量組，分別相當于臨床人日用量的10、5、2.5倍；每組14只，雌雄各半。
小鼠灌胃藥物，對照組給予同等容量β-環(huán)糊精水溶液(濃度0.83％)，1日1次，連續(xù)7日。第7日給藥后1小時腹腔注射0.6％醋酸，0.2ml/只。記錄每只小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)的潛伏期，以及0～10分、10～20分、20～30分內(nèi)的扭體次數(shù)。
試驗結(jié)果試驗結(jié)果均以平均值±標準差(X±SD)表示。N為動物數(shù)。組間比較采用SAS統(tǒng)計軟件廣義線性模型進行協(xié)方差分析，以p＜0.05作為差異具有顯著性的標準。(結(jié)果見表15)
表15 鑄骨膠囊對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響劑量 體重潛伏期 扭體次數(shù)(次)組別 Ng/kg (g) (分) 0～10分10～20分 20～30分對照組- 1422.7±2.01 8.66±5.90 5.78±6.53 11.0±8.32 10.57±10.54元胡止疼片組 0.75 1423.23±2.19 19.19±8.83**0.36±0.89**2.86±4.10**3.86±4.64*鑄骨膠囊組0.51422.44±2.02 18.29±10.18**0.71±1.53*2.86±4.79**2.21±2.54**鑄骨膠囊組0.25 1423.43±1.91 18.18±10.19**1.86±3.48 4.71±9.25 6.43±12.50鑄骨膠囊組0.125 1423.17±1.57 12.17±7.24 2.93±5.09 9.07±9.42 8.0±7.14注與模型組比較**p＜0.01；*p＜0.05。
試驗結(jié)果顯示，鑄骨膠囊大劑量組、中劑量組及陽性藥組均可不同程度地抑制腹腔注射醋酸引起的小鼠扭體反應(yīng)。表現(xiàn)為鑄骨膠囊大、中劑量組及陽性藥組能延長扭體反應(yīng)潛伏期，鑄骨膠囊大劑量組及骨疏康能夠減少單位時間內(nèi)動物扭體次數(shù)；均有顯著性差異。提示鑄骨膠囊與元胡止疼片均有明顯鎮(zhèn)痛作用。實驗例4鑄骨膠囊抗炎癥實驗研究分組與給藥實驗用大鼠50只，隨機分為對照組(灌胃等體積1.33％的β-環(huán)糊精水溶液)、地塞米松治療組(灌胃地塞米松0.1mg/kg，相當于人日用量的8倍)、鑄骨膠囊大、中、小劑量組(分別灌胃鑄骨膠囊400mg/kg、200mg/kg和100mg/kg，分別相當于臨床人日用量的8、4、2倍)，每組10只。連續(xù)給藥3天，末次給藥30分鐘后造模。
造模方法末次給藥后30分鐘，先測定其左后足跖容積并記錄。隨后分別在各組大鼠左后足跖皮下注射1％角叉菜膠混懸液0.1ml/只。隨后每隔1小時測一次左后足跖容積并記錄，連續(xù)測量6次。記錄結(jié)果，并按下式計算腫脹率和抑制率。
試驗結(jié)果表明鑄骨膠囊大、中劑量組能顯著抑制大鼠注射角叉菜膠所致的足跖腫脹，大劑量組在造模1小時～4小時、中劑量在造模1小時～3小時與對照組比較有顯著性差異(p＜0.05，p＜0.01)。鑄骨膠囊小劑量組也有一定的抑制趨勢。實驗例5鑄骨膠囊對小鼠免疫功能影響的實驗研究1、鑄骨膠囊對小鼠脾臟淋巴細胞增殖影響60只Balb/C小鼠隨機分為5組，分別為正常對照組；多抗甲素組，劑量為0.03mg/kg；鑄骨膠囊組，劑量分別為500mg/kg(相當于人日用量10倍)、250mg/kg(相當于人日用量5倍)、125mg/kg(相當于人日用量2.5倍)。每日給藥一次，連續(xù)10天，正常對照組給予相同體積0.83％的β-環(huán)糊精水溶液。
結(jié)果表明鑄骨膠囊大、中、小劑量均能顯著增強正常小鼠脾T、B淋巴細胞的增殖，與對照組比較(p＜0.05，p＜0.01)。陽性對照藥多抗甲素組能顯著增強正常小鼠脾T、B淋巴細胞的增殖(p＜0.01)。
2、鑄骨膠囊對小鼠血清凝集素的影響分組與給藥同1。
結(jié)果表明鑄骨膠囊大、中劑量均能顯著提高正常小鼠血清中凝集素的含量，與對照組比較(p＜0.05，p＜0.01)。小劑量也有一定的增強效果。鑄骨膠囊三個劑量組有較好的量效關(guān)系。
3、鑄骨膠囊對小鼠遲發(fā)性超敏反應(yīng)的影響分組與給藥72只Balb/c小鼠隨機分為正常對照組(灌胃給等體積0.83％的β-環(huán)糊精水溶液)；DTH模型組(灌胃給等體積0.83％的β-環(huán)糊精水溶液)；多抗甲素組(灌胃給0.03mg/kg)；鑄骨膠囊組，灌胃給藥，劑量分別為125mg/kg、250mg/kg、500mg/kg(分別相當于臨床人日用量的2.5、5、10倍)，連續(xù)給藥8天。
結(jié)果表明DTH對照組小鼠右耳較正常對照組顯著增厚，表明DTH模型制備成功。鑄骨膠囊大、中、小劑量組均能顯著增強二硝基氟苯所致小鼠遲發(fā)超敏反應(yīng)，與DTH對照組比較p＜0.01。且有較好的量效關(guān)系。
下列實施例均能實現(xiàn)上述實驗例的效果。實施例1取淫羊藿葉4000g加水煎煮三次，每次1小時，第一次加20倍量水，第二、三次各加16倍量水，煎液合并，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.04(60℃)的清膏，加乙醇使含醇量為70％，靜置24小時，取上清液回收乙醇至無醇味，加水至藥液∶藥材為2∶1，加鹽酸至pH＝3，冷藏，放置72小時，濾過，沉淀干燥，備用；濾液用聚酰胺吸附法精制，聚酰胺柱吸附法條件徑高比為1∶3，藥液濃度按藥材∶藥液為1∶2，pH＝3，比上樣量按藥材∶聚酰胺為2.5∶1，水洗4倍柱體積，70％乙醇洗脫，至洗脫液顏色加深，開始收集洗脫液，收集1倍柱體積，回收乙醇，濃縮、干燥；水洗7倍柱體積，洗除乙醇后，重復(fù)上樣；聚酰胺再生方法重復(fù)上樣3次后再生1次，用0.5％氫氧化鈉水溶液3倍柱體積洗除吸附雜質(zhì)后，用pH＝3鹽酸水溶液洗，至流出液pH＝3后重復(fù)上樣；聚酰胺可再生2次，共上樣9次；每公斤聚酰胺可精制淫羊藿22.5公斤；70％乙醇洗脫，洗脫液回收乙醇，濃縮至相對密度為1.20～1.25(60℃)的稠膏，干燥。將兩部分干膏合并，粉碎，得淫羊藿提取物，備用。取牡蠣220g，粉碎，過60目篩，加入8倍量30％的醋酸，加熱水解4小時，濾過，濾液減壓濃縮至半固體，干燥，粉碎，得牡蠣水解物，備用。將上述兩部分混合，制粒，裝入膠囊，制成1000粒，即得。
權(quán)利要求
1.一種治療骨質(zhì)疏松癥的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由如下原料藥制成的淫羊藿∶牡蠣15～25∶1～1.5。
2.如權(quán)利要求1所述的治療骨質(zhì)疏松癥的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由如下原料藥制成的淫羊藿∶牡蠣為20∶1。
3.一種治療骨質(zhì)疏松癥的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由如下原料藥制成的淫羊藿有效部位的提取物牡蠣有效部位的水解物為1～2∶1～3。
4.如權(quán)利要求3所述的治療骨質(zhì)疏松癥的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物是由如下原料藥制成的含有超過50％淫羊藿總黃酮或含有超過15％的淫羊藿苷的淫羊藿有效部位的提取物含有超過75％醋酸鈣的牡蠣有效部位的水解物為1∶2。
5.如權(quán)利要求1、2、3或4所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物可直接或加入賦型劑制成臨床可接受的劑型。
6.如權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于該藥物組合物的劑型為片劑、膠囊、口服液體制劑、顆粒劑、泡騰劑、口含片。
7.如權(quán)利要求1或2所述的治療骨質(zhì)疏松癥的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為取淫羊藿葉加水煎煮2～4次，每次1～2小時，每次加10～20倍量水，煎液合并，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.02～1.04(60℃)的清膏，加乙醇使含醇量達60～80％，靜置12～48小時，取上清液回收乙醇至無醇味，加水至藥液∶藥材為2∶1，加鹽酸至pH＝2～5，冷藏，放置24～72小時，濾過，沉淀干燥，備用；濾液用聚酰胺吸附法精制，聚酰胺柱吸附法條件徑高比為1∶2～5，藥液濃度按藥材∶藥液為1∶1～3，pH＝2～5，比上樣量為藥材∶聚酰胺2～5∶1，水洗3～6倍柱體積，60～80％乙醇洗脫，至洗脫液顏色加深，開始收集洗脫液，收集1～3倍柱體積，回收乙醇，濃縮、干燥；水洗5～10倍柱體積，洗除乙醇后，重復(fù)上樣；聚酰胺再生方法重復(fù)上樣2～5次后再生1次，用0.5～1％氫氧化鈉水溶液2～5倍柱體積洗除吸附雜質(zhì)后，用pH＝2～4鹽酸水溶液洗，至流出液pH＝2～4后重復(fù)上樣；聚酰胺可再生2次，共上樣9次；每公斤聚酰胺可精制淫羊藿15～30公斤；60～80％乙醇洗脫，洗脫液回收乙醇，濃縮至相對密度為60℃下1.20～1.25的稠膏，干燥；將兩部分干膏合并，粉碎，得淫羊藿提取物，備用；取牡蠣，粉碎，過60目篩，加入8～12倍量20～30％的醋酸，加熱水解3～6小時，濾過，濾液減壓濃縮至半固體，干燥，粉碎，得牡蠣水解物備用；將上述兩部分混合，得藥物組合物，可將藥物組合物直接或加入賦型劑制成臨床可接受的劑型。
8.如權(quán)利要求7所述的治療骨質(zhì)疏松癥的藥物組合物的制備方法，其特征在于該方法為取淫羊藿葉加水煎煮三次，每次1小時，第一次加20倍量水，第二、三次各加16倍量水，煎液合并，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.04(60℃)的清膏，加乙醇使含醇量達70％，靜置24小時，取上清液回收乙醇至無醇味，加水至藥液∶藥材為2∶1，加鹽酸至pH＝3，冷藏，放置72小時，濾過，沉淀干燥，備用；濾液用聚酰胺吸附法精制，聚酰胺柱吸附法條件徑高比為1∶3，藥液濃度按藥材∶藥液為1∶2，pH＝3，比上樣量按藥材∶聚酰胺為2.5∶1，水洗4倍柱體積，70％乙醇洗脫，至洗脫液顏色加深，開始收集洗脫液，收集1倍柱體積，回收乙醇，濃縮、干燥；水洗7倍柱體積，洗除乙醇后，重復(fù)上樣；聚酰胺再生方法重復(fù)上樣3次后再生1次，用0.5％氫氧化鈉水溶液3倍柱體積洗除吸附雜質(zhì)后，用pH＝3鹽酸水溶液洗，至流出液pH＝3后重復(fù)上樣；聚酰胺可再生2次，共上樣9次；每公斤聚酰胺可精制淫羊藿22.5公斤；70％乙醇洗脫，洗脫液回收乙醇，濃縮至60℃下相對密度為1.20～1.25的稠膏，干燥；將兩部分干膏合并，粉碎，得淫羊藿提取物，備用；取牡蠣，粉碎，過60目篩，加入8倍量30％的醋酸，加熱水解4小時，濾過，濾液減壓濃縮至半固體，干燥，粉碎，得牡蠣水解物，備用；將上述兩部分混合，制粒，裝入膠囊。
9.如權(quán)利要求1、2、3或4所述的藥物組合物的質(zhì)量控制方法，其特征在于該方法為鑒別取上述藥物組合物0.2g，加硫酸和乙醇各1ml，加熱，即發(fā)生乙酸乙酯的香氣；取上述藥物組合物粉碎過80目篩，稱取0.05g，加乙醇10ml，超聲4～8分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇1～2ml使溶解，作為供試品溶液；另取淫羊藿苷對照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法，吸取上述兩種溶液各10μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G薄層板上，以8～11∶0.8～1.2∶0.8～1.2∶0.8～1.2乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以8～12％硫酸乙醇液，于100～105℃加熱2～4分鐘；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的黃色斑點；含量測定∶淫羊藿苷 照高效液相色譜法測定；色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；26～30∶70～74乙腈-水為流動相；檢測波長為270nm；理論板數(shù)按淫羊藿苷峰計算應(yīng)不低于1500；對照品溶液制備精密稱取淫羊藿苷對照品適量，加甲醇制成5μg/ml的對照品溶液，即得；供試品溶液制備取上述藥物組合物粉碎過80目篩，精密稱取0.1g，置100ml具塞錐形瓶中，精密加入40～60％乙醇45～55ml，密塞，稱定重量，超聲至溶解，再稱定重量，用40～60％乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液0.5ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得；本發(fā)明藥物組合物含淫羊藿以淫羊藿苷計，不得少于50mg/g；醋酸鈣取上述藥物組合物粉碎過80目篩，精密稱取0.5g置坩堝中，緩緩熾灼至完全炭化，放冷至室溫；再在500～700℃熾灼3h使完全灰化，放冷，殘渣加稀鹽酸4～8ml使溶解，置10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1ml稀釋液加水100ml，0.05％甲基紅指示劑1ml，滴加10％氫氧化鉀至溶液至淺黃色，再繼續(xù)多加10ml，加鈣黃綠素0.1g，用乙二胺四乙酸二鈉滴定液滴定，至溶液的黃綠色熒光消失，并呈橙色，即得；每1ml乙二胺四乙酸二鈉滴定液相當于15.8mg的醋酸鈣(Ca(Ac)2)；本發(fā)明藥物組合物含牡蠣以醋酸鈣計不得少于0.5g/g。
10.如權(quán)利要求1、2、3或4所述的藥物組合物在制備治療骨質(zhì)疏松的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種治療骨質(zhì)疏松癥的藥物組合物及其制備方法，該藥物組合物是由淫羊藿、牡蠣或它們的提取物制成的。本發(fā)明制備方法為取淫羊藿葉水煮醇沉，濾液用聚酰胺吸附法精制，得淫羊藿提取物；取牡蠣酸水解得牡蠣水解物；將上述兩部分混合，得藥物組合物。本發(fā)明藥物組合物治療骨質(zhì)疏松癥有確切的療效。
文檔編號A61P19/00GK1416873SQ0214947
公開日2003年5月14日 申請日期2002年11月21日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月21日
發(fā)明者高學(xué)敏, 王洪飛, 張建軍, 胡素敏 申請人:煙臺榮昌制藥有限公司