專利名稱：嘧啶衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的目標(biāo)化合物是有用的金屬蛋白酶，如鋅蛋白酶特別是鋅水解酶的抑制劑，這類化合物可有效地預(yù)防和治療一些與越來越多出現(xiàn)的血管收縮相關(guān)聯(lián)的疾病狀態(tài)。這種疾病的例子有高血壓、冠狀動(dòng)脈疾病、心臟功能不足、腎臟和心肌局部缺血、腎臟功能不足、透析、大腦局部缺血、心臟梗塞、偏頭痛、蛛網(wǎng)膜下腔出血、雷諾氏綜合癥和肺部高壓。此外這類化合物是用于抑制移植物排斥、器官保護(hù)和治療眼科疾病的有用的抑制細(xì)胞生長劑和大腦保護(hù)劑。
內(nèi)皮素是存在三種異構(gòu)體的肽，這三種異構(gòu)體是ET-1，ET-2和ET-3，它們各自被截然不同的基因編碼。它們最初是1988年由Yanagisawa在豬內(nèi)皮細(xì)胞的條件培養(yǎng)基中發(fā)現(xiàn)的(Yanagisawa M；Kurihara H；KimuraS；Tomobe Y；Kobayashi M；Mitsui Y；Yazaki Y；Goto K；MasakiT血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的一種新的強(qiáng)烈的血管收縮肽[參閱注解]，NARURE(1988年3月31日)，332(6163)卷，411～5頁)。這些活性的ET是帶有兩個(gè)分子內(nèi)二硫橋鍵的21個(gè)氨基酸的肽。它們是由203～212氨基酸的前原蛋白質(zhì)產(chǎn)生的，此前原蛋白質(zhì)被具有弗林蛋白酶特征的肽鏈內(nèi)切酶處理成生物惰性的大-內(nèi)皮素(大-ET)。這些大-ET在氨基酸21和22之間水解斷裂而被特殊地處理為成熟的各種ET，氨基酸21和22分別是色氨酸21-纈氨酸22(大-ET-1、大ET-2)和在大-ET-3為色氨酸21-異亮氨酸22。早在1988年就假定是一種特殊的金屬蛋白酶造成這種特殊的斷裂。在1994年從牛腎上腺純化并克隆了ECE-1(內(nèi)皮素轉(zhuǎn)變酶-1)(Xu D、Emoto N、Giaid A、Slaughter C、Kaw S、de Witt D、Yanagisawa M“ECE-1一種促進(jìn)大-內(nèi)皮素-1的蛋白水解活性的膜-結(jié)合金屬蛋白酶”，Cell(1994年)78期473～485頁)。
ECE-1是膜結(jié)合的II型鋅-肽鏈內(nèi)切酶，具有最佳中性pH值及鋅結(jié)合的不固定HExxHx(＞20)E。它屬于亞族M13，具有包括活性部位的大的681氨基酸胞外結(jié)構(gòu)域。M13族的其它成員有NEP24.11(中性肽鏈內(nèi)切酶)、PEX、一種磷酸鹽調(diào)節(jié)的中性肽鏈內(nèi)切酶、及凱爾血型蛋白，此蛋白最近被描述為大-ET3加工酶。人類血統(tǒng)的M13族成員的特征是高的分子量(＞80kDa)、保存許多二硫橋鍵和復(fù)雜的糖基化模式。最近解決了NEP的結(jié)構(gòu)。(Oefner等J.Mol.Biol.2000年，296卷，341-349頁)。ECE的催化區(qū)域結(jié)構(gòu)和有關(guān)人類M13蛋白酶明顯地比基體金屬蛋白酶(MMP)的成員大(＞650個(gè)氨基酸)。MMP族屬于metzincins，顯示典型的HExxHxxGxxH模式，與MMP族不同，M13族成員是包括HExxHx(＞20)E模式的gluzincins。這兩個(gè)族在催化區(qū)域結(jié)構(gòu)的大小、結(jié)構(gòu)和配體的鋅配位模式方面無疑是不同的。兩個(gè)族的活性部位顯示了明顯的差異，這種差異對(duì)抑制劑的類型和潛在的選擇性有明顯的影響。
本發(fā)明的一個(gè)方面涉及化學(xué)式(I)的化合物及其二聚體形式，和/或其藥用酯和/或藥用鹽 其中R1是氫、烷基羰基或芳基羰基；R2是烷基、鏈炔基、羥烷基、羧烷基、烷氧羰基、烷基羰基烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基烷基、烷基磺?；?、芳基、芳烷基、芳基烷氧基烷基、芳基(烷氧羰基)烷基、芳氨基羰基、二芳基烷基、芳基(羧烷基)氨基羰基、芳基羰基、芳基磺?；?、環(huán)烷基、環(huán)烷基羰基、環(huán)烷基烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環(huán)基烷基，或基團(tuán)YR2是雜環(huán)基；R3和R4獨(dú)立地選自氫、烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基烷基、烷硫基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、氨基甲?；?、羧基、羧烷基、氰基、氨基、單-及二烷基氨基、烷氧基、烷氧基烷基、烷氧羰基、烷氧羰基烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基、芳烷基、芳烷基(烷氧羰基)烷基、芳基羰基烷基、芳基鏈烯基、芳基(烷氧羰基)烷基、芳氨基、芳烷基氨基、芳氧基、鹵素、雜芳基、雜芳烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、三甲基硅烷基乙炔基或三氟甲基；R5是氫、烷基、芳基、芳烷氧羰基或烷基羰基；X1、X2、X3和X4是CH或N，附帶條件是X1、X2、X3和X4中只有最多兩個(gè)基團(tuán)是N；Y是-O-或-NR5-。
術(shù)語“烷基”，可為單獨(dú)或結(jié)合形式的，表示含有最多7個(gè)、優(yōu)選最多4個(gè)碳原子的直-鏈或支-鏈烷基，如甲基、乙基、正丙基、2-甲基丙基(異-丁基)、1-甲基乙基(異-丙基)、正-丁基、和1，1-二甲基乙基(叔-丁基)。
術(shù)語“羧基”是指基團(tuán)-C(O)OH。
術(shù)語“氨基甲酰基”是指基團(tuán)-C(O)NH2。
術(shù)語“羰基”是指基團(tuán)-C(O)-。
術(shù)語“鹵素”是指氟、溴、氯和碘基團(tuán)。
術(shù)語“磺?；笔侵富鶊F(tuán)-S(O2)-。
術(shù)語“鏈烯基”是指定義如烷基的碳?xì)滏満兄辽僖粋€(gè)烯屬雙鍵的基團(tuán)(包括例如乙烯基、烯丙基和丁烯基)。
術(shù)語“鏈炔基”是指定義如烷基的碳?xì)滏満兄辽僖粋€(gè)烯屬三鍵的基團(tuán)(包括例如丙炔基、丁炔(1)-基等。
術(shù)語“烷氧基”，可為單獨(dú)或結(jié)合形式的，表示一種烷基醚基，其中術(shù)語“烷基”具有上述給出的含義，如甲氧基、乙氧基、正-丙氧基、異丙氧基、正-丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基等。
術(shù)語“烷氧羰基”是指化學(xué)式為-C(O)RC的一種基團(tuán)，其中RC是上文定義的烷氧基。
術(shù)語“羥基”指基團(tuán)-OH，術(shù)語“氰基”是指基團(tuán)-CN。
術(shù)語“羥烷基”表示上文定義的烷基被羥基取代的基團(tuán)。
術(shù)語“硫代烷基”和“氰基烷基”是指上文定義的烷基分別被一個(gè)-SH基團(tuán)或一個(gè)-CN基團(tuán)取代的基團(tuán)。
“羧烷基”表示上文定義的低級(jí)烷基被HOOC-基團(tuán)取代的基團(tuán)。
術(shù)語“烷基羰基”，可為單獨(dú)或結(jié)合形式的，表示由鏈烷羧酸衍生的?；赐榛?C(O)-，如乙酰基、丙?；?、丁?；?、戊?；?、4-甲基戊?；?。
術(shù)語“環(huán)烷基”表示有3～8個(gè)、優(yōu)選3～6個(gè)碳原子的飽和的環(huán)狀烴基，即環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基等。
術(shù)語“氨基”指基團(tuán)-NH2。
術(shù)語R2的“芳基”，可為單獨(dú)或結(jié)合形式的，指芳香族碳環(huán)基團(tuán)，即芳香族或部分芳香族的6元或10元環(huán)，如苯基、萘基或四氫萘基，優(yōu)選苯基或萘基，及最優(yōu)選苯基。此芳基部分可任選被一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，這些取代基團(tuán)可獨(dú)立地選自鹵素且優(yōu)選氟、烷氧羰基如甲基羰基、羧基、氰基、烷基、烷氧基、苯基、苯氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、1，3-間二氧雜環(huán)戊烯基或1，4-間二氧雜環(huán)戊烯基，更優(yōu)選氟、烷氧羰基、烷基、三氟甲基和三氟甲氧基，及最優(yōu)選氟。最優(yōu)選的芳香族基團(tuán)是2，5-二氟芐基和2，4，5-三氟芐基。
術(shù)語R3和R4的“芳基”，可為單獨(dú)或結(jié)合形式的，指芳香族碳環(huán)基團(tuán)，即芳香族或部分芳香族的6元或10元環(huán)，如苯基、萘基或四氫萘基，優(yōu)選苯基或萘基，及最優(yōu)選苯基。此芳基部分可任選被一個(gè)或多個(gè)基團(tuán)取代，這些取代基團(tuán)可獨(dú)立地選自鹵素、烷氧羰基如甲基羰基、羧基、氰基、烷基、烷氧基、苯基、苯氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、1，3-間二氧雜環(huán)戊烯基或1，4-間二氧雜環(huán)戊烯基、環(huán)己基、羥基、烷基酰氨基如乙酰氨基、硝基、烷基磺酰基如甲磺?；?，更優(yōu)選氟、氯、溴、烷氧基、羧基、1，4-間二氧雜環(huán)戊烯基、烷氧羰基。對(duì)于R2和R4最優(yōu)選的芳香族基團(tuán)是苯基和苯氧基。
術(shù)語R5的“芳基”指任選由烷基、烷氧基或鹵素取代的苯基。
術(shù)語“芳氧基”指上文定義的芳基通過氧連接到母體結(jié)構(gòu)上，即芳基-O-。
術(shù)語R2的“雜芳基”，可為單獨(dú)或結(jié)合形式的，是指一種芳香族單-或二環(huán)基團(tuán)，它具有5～10個(gè)、優(yōu)選5～6個(gè)環(huán)原子并含有一個(gè)到三個(gè)雜原子、優(yōu)選含有一個(gè)雜原子，雜原子如獨(dú)立地選自氮、氧或硫。此雜芳基的實(shí)例是噻吩基、異噁唑基、噻唑基、吡啶基、吡咯基、咪唑基、四唑基，優(yōu)選吡啶基、異噁唑基和噻唑基。任選地，雜芳基基團(tuán)可獨(dú)立地被苯基、烷基、烷基羰基、烷氧羰基、羥基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、羧基、烷氧羰基烷基、優(yōu)選烷基單-、二-或三-取代。
術(shù)語R3和R4的“雜芳基”，可為單獨(dú)或結(jié)合形式的，是指一種芳香族單-或二環(huán)基團(tuán)，它具有5～10個(gè)、優(yōu)選5～6個(gè)環(huán)原子，并含有一個(gè)到三個(gè)雜原子、優(yōu)選含有一個(gè)雜原子，雜原子如獨(dú)立地選自氮、氧或硫。此雜芳基的實(shí)例是吡啶基、噻吩基、異噁唑基、異喹啉基、喹啉基、和1H-苯并[d][1，3]噁嗪-2，4-二酮及吲哚基、嘧啶、噠嗪和吡嗪，優(yōu)選吡啶基和噻吩基。任選地，這些雜芳基基團(tuán)可獨(dú)立地被烷基、烷基羰基、烷氧羰基、羥基、氨基、烷氨基、二烷基氨基、羧基、烷氧羰基烷基，優(yōu)選烷基單-、二-或三-取代。
術(shù)語“雜環(huán)基”，可為單獨(dú)或結(jié)合形式的，指一種非-芳香族單-或二環(huán)基團(tuán)，它具有5～10個(gè)、優(yōu)選5～6個(gè)環(huán)原子并含有一個(gè)到三個(gè)雜原子、優(yōu)選具有一個(gè)雜原子，雜原子如獨(dú)立地選自氮、氧或硫。此雜環(huán)的環(huán)可任選地被一種基團(tuán)取代，這種基團(tuán)獨(dú)立地選自鹵素、烷基、烷氧基、氧基羧基、烷氧羰基等；和/或此雜環(huán)在二級(jí)氮原子(即-NH-)上由烷基、芳基烷氧羰基、烷基羰基取代；或在三級(jí)氮原子(即＝N-)上被氧化。此雜環(huán)基團(tuán)的實(shí)例是嗎啉基、吡咯烷基、哌啶基等。
術(shù)語“二聚體形式”表示一種化合物，其中兩個(gè)同樣化學(xué)式I的化合物的兩個(gè)R1基團(tuán)被普通單鍵替代；或其中R1是谷胱甘肽-S-或半胱氨酸-S-或酯，和/或它們的烷基羰基或芳基羰基衍生物，如乙?；腚装彼?S-或苯甲酰半胱氨酸-S-，優(yōu)選谷胱甘肽-S-、半胱氨酸-S-、乙?；腚装彼?S-或苯甲酰半胱氨酸-S-。
術(shù)語“藥用鹽”是指保留游離堿或游離酸的生物有效性和性質(zhì)的那些鹽，這些游離堿或游離酸不是生物或其他方面不合需要的。這些鹽由無機(jī)酸和有機(jī)酸形成，無機(jī)酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等；有機(jī)酸如乙酸、丙酸、羥基乙酸、丙酮酸、草酸、馬來酸、丙二酸、琥珀酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、對(duì)甲苯磺酸、水楊酸、N-乙?；腚装彼岬取４送膺@些鹽可通過在游離酸中加入無機(jī)堿或有機(jī)堿來制備。無機(jī)堿衍生的鹽包括，但不限于，鈉、鉀、鋰、銨、鈣、鎂鹽等。有機(jī)堿衍生的鹽包括，但不限于，伯、仲、和叔胺、取代胺包括自然存在的取代胺、環(huán)狀胺和堿性離子交換樹脂的鹽，如異丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、賴氨酸、精氨酸、N-乙基哌啶、哌啶、聚乙烯亞胺樹脂等的鹽。
“藥用酯”表示通式(I)的化合物可在官能團(tuán)處衍生，所提供的衍生物能夠在體內(nèi)轉(zhuǎn)化回到母體化合物。這種化合物的實(shí)例包括生理上可接受的及代謝中易變的酯類衍生物，如甲氧基甲基酯，甲硫基甲基酯和新戊酰氧基甲基酯。此外，與代謝中易變的酯類似，能夠在體內(nèi)產(chǎn)生通式(I)母體化合物的任何生理上可接受的通式(I)化合物的等價(jià)物都包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
化學(xué)式(I)的化合物可用于抑制哺乳動(dòng)物的金屬蛋白酶活性，特別是鋅水解酶的活性。更明確地，化學(xué)式(I)的化合物是有用的治療和預(yù)防一些失調(diào)的藥物，這些失調(diào)與內(nèi)皮素-轉(zhuǎn)變酶(ECE)活性引起的疾病相關(guān)聯(lián)。對(duì)這種酶的抑制將有用于治療心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動(dòng)脈硬化癥、伯格氏病、高安氏動(dòng)脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調(diào)、內(nèi)毒素休克和敗血病，及用于創(chuàng)傷治療及控制月經(jīng)、青光眼。此外該化合物是有用的抑制細(xì)胞生長劑和大腦保護(hù)劑，用于抑制移植物排斥、器官保護(hù)及治療眼科疾病。
更詳細(xì)地，本發(fā)明涉及下列化學(xué)式(I)的化合物，及其二聚體形式，和/或它們的藥用酯和/或藥用鹽，優(yōu)選它們的藥用酯和/或藥用鹽，及最優(yōu)選它們的藥用鹽 其中
R1是氫、烷基羰基或芳基羰基；R2是烷基、鏈炔基、羥烷基、羧烷基、烷氧羰基、烷基羰基烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基烷基、烷基磺?；⒎蓟?、芳烷基、芳基烷氧基烷基、芳基(烷氧羰基)烷基、芳基氨基羰基、二芳基烷基、芳基(羧烷基)氨基羰基、芳基羰基、芳基磺?；?、環(huán)烷基、環(huán)烷基羰基、環(huán)烷基烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環(huán)基烷基或基團(tuán)YR2是雜環(huán)基；R3和R4獨(dú)立地選自氫、烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基烷基、烷硫基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、氨基甲?；Ⅳ然?、羧烷基、氰基、氨基、單-和二烷基氨基、烷氧基、烷氧基烷基、烷氧羰基、烷氧羰基烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基、芳烷基、芳烷基(烷氧羰基)烷基、芳基羰基烷基、芳基鏈烯基、芳基(烷氧羰基)烷基、芳基氨基、芳基烷基氨基、芳氧基、鹵素、雜芳基、雜芳基烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、三甲基硅烷基乙炔基或三氟甲基；R5是氫、烷基、芳基、芳基烷氧羰基或烷基羰基；X1、X2、X3和X4是CH或N，附帶條件是X1、X2、X3和X4中只有最多兩個(gè)基團(tuán)是N；Y是-O-或-NR5-。
本發(fā)明尤其是指通式(II)的化合物 其中R1，R2，R3，R4，X1，X2，X3，X4和Y與權(quán)利要求1中的定義相同。
在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，R1選自氫或烷基羰基，更優(yōu)選氫或乙?；?，及最優(yōu)選地R1是氫。
在上述化合物中，R2優(yōu)選烷基、鏈炔基、羥烷基、羧烷基、烷氧羰基、烷基羰基烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基烷基、烷基磺?；?、芳基、芳烷基、芳基烷氧基烷基、芳基(烷氧羰基)烷基、芳基氨基甲酰基、二芳基烷基、芳基(羧烷基)氨基羰基、芳基羰基、芳基磺酰基、環(huán)烷基、環(huán)烷基羰基、環(huán)烷基烷基、雜芳基、雜芳基烷基或雜環(huán)基烷基，更優(yōu)選R2是芳基、芳烷基、芳基烷氧基烷基、芳基氨基羰基、芳基羰基、芳基磺?；?、環(huán)烷基、環(huán)烷基羰基、環(huán)烷基烷基或雜芳基烷基，還要更優(yōu)選R2是芳基、芳烷基、芳基氨基甲?；?、芳基羰基、芳基磺酰基或雜芳基烷基，及最優(yōu)選R2是芳烷基。在一個(gè)本發(fā)明特別優(yōu)選的實(shí)施方案中R2是任選被2～3個(gè)鹵素原子、優(yōu)選被氟原子取代的苯基烷基。
在上述定義的化合物中，優(yōu)選R3和R4獨(dú)立地選自氫、烷基、烷硫基、鏈烯基、烷氧基、烷氧羰基、氨基、芳基、芳烷基、芳基鏈烯基、芳烷基氨基、芳氧基、單-和二烷基氨基、氨基甲?；?、羧基、氰基、鹵素、雜芳基、雜芳基烷基、三甲基硅烷基乙炔基和三氟甲基，更優(yōu)選R3和R4獨(dú)立地選自氫、烷基、烷氧基、烷氧羰基、鏈烯基、噻吩基、氨基、單-和二烷基氨基、羧基、氰基、鹵素、三甲基硅烷基乙炔基、苯基烷基氨基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、苯基和苯氧基，其中芳基和雜芳基基團(tuán)可任選被烷基、烷氧基、羧基或鹵素取代。在本發(fā)明最優(yōu)選的實(shí)施方案中，R3是氫、烷基、烷氧基、烷氧羰基、 鏈烯基、噻吩基、氨基、單-和二烷基氨基、羧基、氰基、鹵素、三甲基硅烷基乙炔基、苯基烷基氨基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、苯基和苯氧基，其中芳基和雜芳基基團(tuán)可任選被烷基、烷氧基、羧基或鹵素取代，及R4是氫。
在本發(fā)明進(jìn)一步的優(yōu)選實(shí)施方案中，Y是-NR5-，R5是氫或烷基，及更優(yōu)選氫。
在本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中Y是-O-。
本發(fā)明還涉及上述定義的化合物中X1是N及X2、X3和X4是CH，或其中X2是N及X1、X3和X4是CH，或其中X3是N及X1、X2和X4是CH，或其中X1、X2、X3和X4是CH的化合物。
在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明包括的化合物定義如上，其中R1是氫或烷基羰基；R2是被2～3個(gè)鹵素取代的苯基烷基；R3選自氫、烷基、烷氧基、烷氧羰基、鏈烯基、噻吩基、氨基、單-和二烷基氨基、羧基、氰基、鹵素、三甲基硅烷基乙炔基、苯基烷基氨基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、苯基或苯氧基，及其中芳基和雜芳基基團(tuán)可任選被烷基、烷氧基、羧基或鹵素取代；R4是氫；X1、X2、X3和X4是CH或N，附帶條件是X1、X2、X3和X4中只有最多兩個(gè)基團(tuán)是N；及Y是-NH-或-O-。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案的上述定義的化合物中，R1是氫或乙?；?，及R2是二氟代芐基或三氟代芐基。
在實(shí)施例中舉例說明了本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案中的化合物。本發(fā)明包括的化合物尤其選自a)(3R，5S)-1-嘧啶-2-基-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇的三氟-乙酸鹽(1∶1)；b)(3R，5S)-1-(4，6-二甲氧基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；c)(3R，5S)-1-(4-氨基-5-氟代-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；d)2-[(2S，4R)-4-巰基-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-1-基]-煙腈；e)(3R，5S)-1-(6-苯基-噠嗪-3-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；f)2-[(2S，4R)-4-巰基-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-1-基]-煙酸；g)2-[(2S，4R)-4-巰基-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-1-基]-6-甲基-嘧啶-4-羧酸甲酯；h)2-[(2S，4R)-4-巰基-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-1-基]-4-三氟甲基-嘧啶-5-羧酸甲酯；i)(3R，5S)-1-吡嗪-2-基-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；與三氟乙酸的化合物；j)2-[(2S，4R)-4-巰基-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-1-基]-煙酰胺；k)(3R，5S)-5-(2，5-二氟-4-甲氧基-芐氧基甲基)-1-(2-甲氧基-嘧啶-4-基)-吡咯烷-3-硫醇；l)(3R，5S)-1-(2-氯代-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；與三氟乙酸的化合物；m)(3R，5S)-1-(5-乙基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇的三氟乙酸鹽(1∶1)；n)(3R，5S)-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇的三氟乙酸鹽(1∶1)；o)(3R，5S)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-1-(4-三氟甲基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-3-硫醇的三氟乙酸鹽(1∶1)；p)(3R，5S)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-1-(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-吡咯烷-3-硫醇的三氟乙酸鹽(1∶1)；q)(3R，5S)-1-吡啶-2-基-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇的三氟乙酸鹽(1∶1)；r)(2S，4R)-2-[4-巰基-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-1-基]-6-甲基-嘧啶-4-羧酸；s)(3R，5S)-1-(2-甲氧基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；t)(3R，5S)-1-(2-苯基氨基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇的三氟乙酸鹽(1∶1)；u)(3R，5S)-1-(2-芐基氨基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；三氟乙酸鹽(1∶1)；v)(3R，5S)-1-(2-甲氨基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；三氟乙酸鹽(1∶1)；w)(3R，5S)-1-(2-丁氨基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；三氟乙酸鹽(1∶1)；x)-(3R，5S)-1-(2-甲硫烷基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；y)(3R，5S)-1-(2-苯氧基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；z)(3R，5S)-1-(5-苯基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；aa)(3R，5S)-1-(5-吡啶-2-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；及其與三氟-乙酸的化合物；bb)(3R，5S)-1-(5-吡啶-4-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；cc)(3R，5S)-1-(5-噻吩-3-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；dd)(3R，5S)-1-[5-(4-甲氧基-苯基)-嘧啶-2-基]-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；ee)(2S，4R)-4-{2-[4-巰基-2-(2，4，5-三氟代-芐氧基甲基)-吡咯烷-1-基]-嘧啶-5-基}-苯甲酸；ff)(3R，5S)-1-(5-烯丙基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；gg)(3R，5S)-1-(5-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；及hh)(3R，5S)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-1-(5-三甲基硅烷基乙炔基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-3-硫醇。
這些化合物在放射免疫測定(對(duì)ECE-抑制的E，參閱下文)中顯示IC50值為大約0.5nM～100nM。
尤其優(yōu)選的化學(xué)式(I)定義的化合物選自a)(3R，5S)-1-嘧啶-2-基-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇的三氟乙酸鹽(1∶1)；b)(3R，5S)-1-(6-苯基-噠嗪-3-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；c)(3R，5S)-1-吡嗪-2-基-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；及其與三氟乙酸的化合物；d)(3R，5S)-1-(5-乙基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇的三氟乙酸鹽(1∶1)；e)(3R，5S)-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇的三氟乙酸鹽(1∶1)；
f)(3R，5S)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-1-(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-吡咯烷-3-硫醇的三氟乙酸鹽(1∶1)；g)(3R，5S)-1-(5-苯基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟代-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；h)(3R，5S)-硫代乙酸S-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-基]酯；i)(3R，5S)-1-(5-吡啶-2-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；及其與三氟乙酸的化合物；j)(3R，5S)-1-(5-吡啶-4-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；k)1-(5-噻吩-3-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；l)1-(5-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；m)(2S，4R)-5-[(2，5-二氟-芐氨基)-甲基]-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-3-硫醇；及n)(3R，5S)-硫代乙酸S-[5-[(2，5-二氟代-芐基氨基)-甲基]-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-3-基]酯。
本發(fā)明還涉及藥物組合物，這些組合物含有上文定義的化合物和藥用賦形劑。
本發(fā)明一個(gè)更進(jìn)一步的實(shí)施方案涉及上文定義的化合物作為藥劑制造中活性成分的用途，該藥劑包含上文定義的化合物，用于預(yù)防和治療內(nèi)皮素-轉(zhuǎn)化酶(ECE)的活性引起的疾病，尤其是心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動(dòng)脈硬化癥、伯格氏病、高安氏動(dòng)脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調(diào)、內(nèi)毒素休克和敗血病，及用于創(chuàng)傷治療和控制月經(jīng)、青光眼、移植物排斥、與抑制細(xì)胞生長關(guān)聯(lián)的疾病、眼科以及大腦保護(hù)性適應(yīng)癥和器官保護(hù)。
本發(fā)明進(jìn)一步涉及上述化合物治療或預(yù)防一些疾病的用途，這些疾病與心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動(dòng)脈硬化癥、伯格氏病、高安氏動(dòng)脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調(diào)、內(nèi)毒素休克和敗血病有關(guān)，及用于創(chuàng)傷治療和控制月經(jīng)、青光眼、移植物排斥、與抑制細(xì)胞生長關(guān)聯(lián)的疾病、眼科以及大腦保護(hù)性適應(yīng)癥和器官保護(hù)。
此外本發(fā)明包括的上述化合物可用作治療的活性物質(zhì)，特別在與鋅水解酶活性有關(guān)的疾病的范圍，這些疾病如心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動(dòng)脈硬化癥、伯格氏病、高安氏動(dòng)脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調(diào)、內(nèi)毒素休克和敗血病，以及用于創(chuàng)傷治療和控制月經(jīng)、青光眼、移植物排斥、與抑制細(xì)胞生長關(guān)聯(lián)的疾病、眼科以及大腦保護(hù)性適應(yīng)癥和器官保護(hù)。
本發(fā)明還包括一種方法，用于治療和/或預(yù)防處理心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動(dòng)脈硬化癥、伯格氏病、高安氏動(dòng)脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調(diào)、內(nèi)毒素休克和敗血病，及用于創(chuàng)傷治療和控制月經(jīng)、青光眼、移植物排斥、抑制細(xì)胞生長關(guān)聯(lián)的疾病、眼科以及大腦保護(hù)性適應(yīng)癥和器官保護(hù)，此方法包括將上文定義的化合物引入到人類或動(dòng)物肌體中。
本發(fā)明還涉及上文定義的化合物用于抑制鋅水解酶活性的用途。
本發(fā)明還涉及無論何時(shí)通過下述方法制造的上述化合物。
化學(xué)式(I)化合物可通過本領(lǐng)域已知的方法或下述的方法來制備。除非另外指明，下述取代基R1、R2、R3、R4、R5、X1、X2、X3、X4和Y的定義同上。
上文定義的化合物的制備方法可包括化學(xué)式III的化合物的反應(yīng)
其中A是HS-保護(hù)基團(tuán)及P是NH-保護(hù)基團(tuán)并將在下文部分中敘述。
a)與R2-鹵化物反應(yīng)以引入-OR2基團(tuán)，接著脫去P-保護(hù)基并引入雜芳族化合物；或b)首先脫去化學(xué)式(III)的P-保護(hù)基，引入上文定義的雜芳族化合物，接著進(jìn)行-OH/-NH2置換及還原胺化以引入R2；可任選地接著將上述R1、R2、R3、R4基團(tuán)轉(zhuǎn)化為不同的基團(tuán)和/或脫保護(hù)基和/或釋放出硫醇。
制備化學(xué)式(I)的化合物可遵循流程1的反應(yīng)路線起始原料是可利用的商品或通過本領(lǐng)域已知的方法由羥基脯氨酸合成，該方法在例如M.Bodanszky和A.Bodanszky的“The Practice of Peptide Synthesis”中有述，該書1984年在柏林由Springer Verlag出版。
合成從通過制備相應(yīng)的甲磺酸鹽(如在室溫～80℃用MeSO3H/Ph3P/DIAD在甲苯中反應(yīng))、通過氯化物(如在3℃到室溫用Ph3P/CCl4在CH2Cl2中反應(yīng))或通過溴化物(如在4℃～室溫用LiBr/DEAD/Ph3P在THF中反應(yīng))引起構(gòu)型反轉(zhuǎn)開始的。為了保持構(gòu)型，此相應(yīng)的反應(yīng)可在0℃～室溫用MeSO2Cl/吡啶/DMAP來完成。
流程1的步驟b表示通過如與三苯基甲硫醇或4-甲氧基芐硫醇的反應(yīng)(用K-Ot.-Bu在DMF中反應(yīng)，對(duì)于Cl0℃；對(duì)于Br0℃～室溫；對(duì)于Mes室溫～100℃)，引入帶保護(hù)的含硫部分。
流程1的步驟c的反應(yīng)通過方法A(在-20℃與LAH在THF中反應(yīng))或方法B(在-50℃與Red-Al在甲苯/THF中反應(yīng))來完成。
步驟d的反應(yīng)(對(duì)于Y＝-O-)可以下列條件來完成1.與NaH/R2Br在DMF中在0℃～室溫反應(yīng)，(O-烷基化)2.與TFA在CH2Cl2中在-20℃～室溫反應(yīng)，(脫BOC保護(hù)基)3.方法A與2-氯代-雜芳族化合物/N-乙基二異丙基胺在80℃反應(yīng)3小時(shí)；方法B(平行-合成)與2-氯代-雜芳族化合物/N-乙基二異丙基胺在二噁烷或DMF中于80-130℃反應(yīng)16小時(shí)～2天；方法C(對(duì)于反應(yīng)性較低的化合物)2-氯代-雜芳族化合物/N-乙基二異丙基胺/CuI在80℃反應(yīng)10小時(shí)。
制備酚醚化合物相應(yīng)的反應(yīng)可在Mitsunobu條件(DEAD/Ph3P/PhOH或PhSH在THF中)下進(jìn)行。
對(duì)于Y是NR2或N-雜環(huán)的情況，可如下進(jìn)行甲磺?；磻?yīng)，例如1.用1.1當(dāng)量MeSO2Cl/1.5當(dāng)量吡啶/1當(dāng)量DMAP反應(yīng)，(甲磺酰化)；2.如YR2是吡咯或咪唑，用1當(dāng)量NaI、NaH在DMF中于0℃～室溫反應(yīng)；3.用iPr3SiH在TFA/CH2Cl2中或CH3CN中(為三苯甲基-硫醇脫保護(hù)基)進(jìn)行反應(yīng)。
可在室溫與TFA/iPr3SiH在CH2Cl2中或CH3CN中完成釋放硫醇的反應(yīng)。
制備Y是N的化合物時(shí)一種可供選擇的路線是首先脫去P-保護(hù)基(P＝BOC時(shí)，用TFA在CH2Cl2中在-20℃～室溫反應(yīng))，繼而與2-氯代-雜芳族化合物/N-乙基二異丙基胺/CuI在80℃反應(yīng)10小時(shí)(步驟f)，然后進(jìn)行下列反應(yīng)1.與鄰苯二甲酰亞胺、DEAD/PH3P在THF中于0～80℃反應(yīng)(在Mitsunobu條件下引入鄰苯二甲酰亞胺)；2.與水合肼、EtOH在室溫反應(yīng)(鄰苯二甲酰亞胺脫保護(hù)基)，接著與下列相應(yīng)的化合物反應(yīng)3.醛、SnCl2、NaBH3CN、MeOH(還原胺化)(步驟g)；如果需要，通過下列反應(yīng)引入R54.與R5Br/K2CO3在乙腈中于室溫進(jìn)行反應(yīng)，接著與下列化合物反應(yīng)5.iPr3SiH在TFA/CH2Cl2中或CH3CN中(脫三苯甲基-硫醇保護(hù)基)。
流程2概述了制備化學(xué)式(I)化合物具體的反應(yīng)路線流程2中A是指以Cl-衍生物作起始原料，此Cl-衍生物是以流程1(步驟e)所述方法用2，4-二氯代嘧啶合成的。
1.如果XR3是OMe，可與3當(dāng)量MeOH/NaH在DMF中于室溫完成反應(yīng)(當(dāng)YR2＝2，4，5-三氟-芐氧基醚衍生物時(shí)會(huì)發(fā)生4-氟代-置換)；2.如果XR3是OPh，可與10當(dāng)量PhOH/NaH在DMF中于70℃反應(yīng)8小時(shí)；3.如果XR3是OMe，可與2.2當(dāng)量MeONa在MeOH中于室溫～75℃完成反應(yīng)(10小時(shí))(當(dāng)YR2＝2，4，5-三氟-芐氧基醚衍生物時(shí)不發(fā)生4-氟代-置換)；4.如果XR3是SMe，可與2.2當(dāng)量MeSNa/NaI在THF中室溫～70℃用28小時(shí)完成反應(yīng)；5.如果XR3是NHR3，可與7.5～30當(dāng)量H2NR3/iPr2EtN在二噁烷中于90～105℃用48小時(shí)完成反應(yīng)。
可用TFA/iPr3SiH在CH2Cl2或CH3CN中在室溫完成釋放硫醇的反應(yīng)(步驟b)。
流程2B的反應(yīng)路線表示化學(xué)式(1)的化合物另外的合成路線步驟c)的反應(yīng)可用下列方法完成1.與芳基B(OH)2/Pd(PhP)4在二甲氧基乙烷/EtOH和2M的Na2CO3中于90℃進(jìn)行Suzuki-偶聯(lián)反應(yīng)2小時(shí)；或2.與芳基B(QH)2/PdCl2(dppf)在二噁烷中和2M Na2CO3在80℃反應(yīng)24～48小時(shí)；或3.i.通過與雙(頻哪醇)二硼/KOAc/PdCl2(dppf)在DMF中于80℃反應(yīng)合成硼酯(如4，4，5，5-四甲基-2-苯基-[1，3，2]二噁硼烷衍生物)，及ii.與芳香溴代物/PdCl2(dppf)/2M Na2CO3在80℃反應(yīng)16小時(shí)；或4.Sonogashira-Hagihara偶聯(lián)反應(yīng)與乙炔基三甲基硅烷/Et3N/PdCl2(Ph3P)2/CuI在DMF中80℃反應(yīng)。流程2 流程3 R＝烷基、芳基、O-芳烷基流程3描述了化學(xué)式(I)的化合物更進(jìn)一步的衍生化。
在Y是氮的情況，步驟a可用RCOCl、iPr2NEt、聚合物負(fù)載的4-(N-芐基-N-甲氨基)吡啶、CH2Cl2的反應(yīng)(N-酰基化)，接著用iPr3SiH、TFA、CH2Cl2的反應(yīng)(釋放硫醇)來完成。在Y是被保護(hù)的氮或氧的情況，可根據(jù)步驟c用RCOCl在吡啶中在0℃～室溫或用BOC-Cys(Npys)-OH(＝2-(BOC-Cys)二硫代-3-硝基-吡啶)在DMF/0.1M磷酸鹽緩沖液(pH6.2)中來完成游離硫醇的反應(yīng)。在是芐氧基保護(hù)的氮情況時(shí)，有可能在乙酸中用33％HBr在0℃～室溫選擇性地脫保護(hù)基。
在它們能夠抑制金屬蛋白酶活性、尤其是鋅水解酶活性的基礎(chǔ)上，可將化學(xué)式I的化合物作為藥物使用，來治療和預(yù)防日益增加的與血管收縮關(guān)聯(lián)的疾病。這種疾病的實(shí)例有高血壓、冠狀動(dòng)脈疾病、心臟功能不足、腎臟和心肌局部缺血、腎臟功能不足、透析、大腦局部缺血、心臟梗塞、偏頭痛、蛛網(wǎng)膜下腔出血、雷諾氏綜合癥和肺部高壓。它們還可被用于動(dòng)脈硬化癥、防止氣囊-引起脈管擴(kuò)張后的再狹窄、炎癥、胃和十二指腸潰瘍、潰瘍cruris、革蘭氏陰性膿血癥、休克、血管球性腎炎、腎絞痛、青光眼、哮喘，治療和預(yù)防糖尿病并發(fā)癥和服用環(huán)孢子菌素期間的并發(fā)癥，以及其他與內(nèi)皮素活性關(guān)聯(lián)的疾病。
可通過各種本領(lǐng)域普通技術(shù)人員了解的體外和體內(nèi)試驗(yàn)，來證明化學(xué)式(I)的化合物抑制金屬蛋白酶活性特別是鋅水解酶活性的能力。
A)細(xì)胞培養(yǎng)如說明(Schweizer等1997年，Biochem.J.，328卷871-878頁)直到融合前在“細(xì)胞工廠”培養(yǎng)穩(wěn)定的人類臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞系(ECV304)。在融合時(shí)用胰島素/EDTA溶液洗脫細(xì)胞并用低速離心收集細(xì)胞。此細(xì)胞粒用磷酸鹽緩沖的pH7.0的鹽水洗滌一次并在-80℃儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?br> B)增溶ECV304細(xì)胞中的ECE如果沒有另外說明，全部程序在0～4℃下進(jìn)行。有1×109細(xì)胞的細(xì)胞粒懸浮在50毫升緩沖液A(20mM Tris/HCl，pH 7.5，含有5mM MgCl2、100μM PMSF、20μM E64、20μM亮肽素)中并被超聲破碎。所生成的細(xì)胞均漿在100,000gav下離心60分鐘。按照說明丟棄上層清液，及所生成的膜小球在50毫升緩沖液A中勻化并離心。重復(fù)兩次在緩沖液A中洗滌膜的碎片，最終制備的膜在4℃在50毫升緩沖液B(緩沖液A+0.5％吐溫20(v/v)、0.5％CHAPS(w/v)、0.5％毛地黃皂苷(w/v))中勻化并攪拌2小時(shí)。然后如說明沉積剩余的膜碎片。所生成的透明上層清液含有溶解的ECE，并以1.0毫升的等分試樣在-120℃儲(chǔ)存直到使用。
C)ECE試驗(yàn)本試驗(yàn)測量人類大ET-1產(chǎn)生的ET-1。為測量高數(shù)量的樣品使用96孔板來完成試驗(yàn)。并使用特別先進(jìn)的和最佳的涂布技術(shù)，在相同的孔中進(jìn)行酶反應(yīng)和所產(chǎn)生ET-1的放射免疫測定。
D)涂板Fluoronunc Maxisorp white(編碼437796)96孔板在UV Stratalinker2400(Stratagene)中以1焦耳能量照射30分鐘。然后此96孔板每孔注入300μl蛋白質(zhì)A溶液(2μg/毫升，在0.1M Na2CO3中，pH9.5)，并在4℃培養(yǎng)48小時(shí)。涂過的板在使用前可在4℃最多儲(chǔ)存3星期。
使用前棄去蛋白質(zhì)A溶液，且此板在4℃用在0.1M Na2CO3中pH9.5的0.5％牛血清白蛋白(BSA)封閉2小時(shí)。
板用雙蒸水洗滌，并已準(zhǔn)備好進(jìn)行ECE試驗(yàn)。
E)篩選試驗(yàn)在DMSO中溶解并稀釋試驗(yàn)化合物。在孔中放入10μl DMSO，接著放入含有200ng大ET-1的125μl試驗(yàn)緩沖液(50mM Tris/HCl，pH7.0，1μMThiorphan、0.1％NaN3、0.1％BSA)。通過加入50μl溶解的ECE(在試驗(yàn)緩沖液中稀釋1∶30～1∶60倍(v/v))開始酶反應(yīng)。酶反應(yīng)在37℃進(jìn)行30分鐘。加入10μl pH7.0的150mM ETDA使酶反應(yīng)停止。
放射免疫測定ET-1的放射免疫測定(RIA)基本按照以前的說明(Lffler，B.-M.和Maire，J.-P.，1994年，Endothelium 1273-286頁)來完成。在含有EDTA停止酶反應(yīng)的混合物的板中加入25μl試驗(yàn)緩沖液，該試驗(yàn)緩沖液含有20000cpm的(3-(125I)酪氨酸)-內(nèi)皮素-1和25μl ET特效的抗血清AS-3(在試驗(yàn)緩沖液中1∶1000的稀釋液)。這些板在混合下在4℃保溫過夜。然后，用洗板器吸去液相，用雙蒸水將板洗滌一次。在此洗過的板中加入200μl閃爍液(Microscint 40 LSC-Cocktail，Packard，編碼6013641)，在Topcount計(jì)數(shù)器上對(duì)板上每孔計(jì)數(shù)2分鐘。
在板上用合成的ET-1以最終濃度為每孔0～3000pg的ET-1制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。全部板都測試了最大ECE活性(在10μl DMSO存在下)的對(duì)照樣品和產(chǎn)生ET-1免疫反應(yīng)活性本底(在10mM EDTA或100μM磷酰二肽存在下)的對(duì)照樣品。測定重復(fù)進(jìn)行三次。
F)動(dòng)力學(xué)測試通過改變測試中使用的底物濃度，可使用所述試驗(yàn)格式來測定所使用ECE制劑及不同ECE抑制劑的動(dòng)力學(xué)特征(即Km，Ki)。
G)以細(xì)胞為基礎(chǔ)的ECE試驗(yàn)如已說明的(Schweizer等1997年，Biochem.J.，328卷871-878頁)，MDCK細(xì)胞穩(wěn)定地表達(dá)人類ECE-1c。在24孔板上培養(yǎng)的細(xì)胞在濕潤空氣/CO2(19∶1)氣氛中融合在Dulbecco改進(jìn)的Eagles介質(zhì)(DMEM)中，此介質(zhì)中補(bǔ)充了10％(v/v)牛胎兒血清(FBS)、0.8毫克/毫升geneticin、100i.u./毫升青霉素和100μg/毫升鏈霉素。在ECE試驗(yàn)前，用0.5毫升DMEM-HBSS(1∶1)和pH7.0的補(bǔ)充了0.1％(w/v)BSA的10mMHEPES代替上述介質(zhì)。加入溶在DMSO中的抑制劑，使其最終濃度為1％。加入0.42μM人的大ET-1使酶反應(yīng)開始，并在培養(yǎng)器中于37℃使酶反應(yīng)進(jìn)行1.5小時(shí)。在培養(yǎng)結(jié)束時(shí)迅速移出培養(yǎng)介質(zhì)，如上述用放射免疫測定法分析等分試樣中產(chǎn)生的ET-1。
通過測量磷酰二肽(IC500.8±0.2μM)和CGS 314447(IC5020±4nM)特有的抑制劑常數(shù)，來驗(yàn)證ECE篩選試驗(yàn)[De Lombaert，Stephane、Stamford，Lisa B.、Blanchard，Louis、Tan，Jenny、Hoyer，Denton、Diefenbacher，CliveG.、Wei，Dongchu、Wallace，Eli M.、Moskal，Michael A.等“內(nèi)皮素-轉(zhuǎn)化酶和中性肽鏈內(nèi)切酶24.11的有效非-肽雙重抑制劑”，Bioorg.Med.Chem.Lett.，(1997年)，7卷(8期)，1059～1064頁]。用與文獻(xiàn)所述沒有明顯不同的方法由IC50值測量兩種抑制劑，但所用的測量試驗(yàn)規(guī)程不同。在此以細(xì)胞為基礎(chǔ)的試驗(yàn)中磷酰二肽顯示的IC50為4μM。因?yàn)槿鏓CE被包埋在正常血漿膜環(huán)境中，此試驗(yàn)還給出了另外有關(guān)在更加生理的條件下抑制劑抑制效力的信息。重要的是要說明此篩選試驗(yàn)是在1μM N-(2-(巰甲基)-1-氧-3-苯丙基)-甘氨酸(Thiorphan)存在的情況下完成的，用以阻止由于NEP24.11的作用造成的任何潛在的大ET-1的降解。在存在或不存在N-(2-(巰甲基)-1-氧-3-苯丙基)-甘氨酸的情況下測量ET-1產(chǎn)生的初步試驗(yàn)中，在MDCK-ECE-1c轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中都不存在NEP活性。在后來的試驗(yàn)中不再在培養(yǎng)介質(zhì)中加N-(2-(巰甲基)-1-氧-3-苯丙基)-甘氨酸。
根據(jù)上述方法，本發(fā)明的化合物在放射免疫測定(對(duì)ECE-抑制的E)中顯示的IC50值為大約0.5nM～大約100μM。優(yōu)選的化合物顯示的值為0.5nM～100nM。
如上所述，含有化學(xué)式I的化合物的藥物，如同制造這種藥物的方法都是本發(fā)明的目標(biāo)，該方法包括將一個(gè)或多個(gè)化學(xué)式I的化合物、及如果需要一個(gè)或多個(gè)其它有治療價(jià)值的物質(zhì)帶到蓋倫氏制劑的給藥形式中。
藥物組合物可以口服給藥，例如以藥片、帶涂層的藥片、糖衣丸、硬的或軟的凝膠膠囊、溶液、乳液或懸浮液形式。還可實(shí)行直腸給藥例如使用栓劑；局部或經(jīng)由皮膚給藥，例如使用藥膏、乳劑、凝膠或溶液；或非腸道給藥例如使用可注射的溶液。
為了制備藥片、帶涂層藥片、糖衣丸或硬凝膠膠囊，本發(fā)明化合物可與藥物惰性的無機(jī)或有機(jī)賦形劑混合。藥片、糖衣丸或硬凝膠膠囊適宜的賦形劑的實(shí)例包括乳糖、玉米淀粉或它們的衍生物；滑石粉或硬脂酸或它們的鹽。
用于軟凝膠膠囊適宜的賦形劑包括例如植物油、蠟、脂肪、半-固態(tài)或液態(tài)多元醇等； 然而根據(jù)活性成分的本性，可能有軟凝膠膠囊根本不需要賦形劑的情況。
制備溶液和糖漿可使用的賦形劑包括例如水、多元醇、蔗糖、轉(zhuǎn)化糖和葡萄糖。
注射液可使用的賦形劑包括例如水、醇、多元醇、甘油和植物油。
栓劑和局部或經(jīng)由皮膚的用藥可使用的賦形劑包括例如天然或硬化油、蠟、脂肪和半-固態(tài)或液態(tài)多元醇。
藥物組合物還可包含防腐劑、抗氧劑、增溶劑、穩(wěn)定劑、濕潤劑、乳化劑、甜味劑、著色劑、增味劑、改變滲透壓的鹽、緩沖液、涂層劑或抗氧劑。它們還可包含其他治療上有價(jià)值的試劑。
其中以化學(xué)式I的化合物的有效量給藥的劑量依賴于具體活性成分的本性、患者的年齡和需求及用藥的方式。一般考慮劑量為每天0.1～100毫克/千克體重，雖然表明如果需要所引用的上限可被超越。
下面提供具體的實(shí)施例作為幫助實(shí)踐本發(fā)明的指南，而無意限制本發(fā)明的范圍。
類似物a)(2S，4R)-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷和2，4-二氯代嘧啶給出(2S，4R)-2-氯代-4-[2-(2，4，5-三氟代-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶，MS632(MH+)；
b)(2S，4R)-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷和2，5-二溴代-嘧啶[Brown，Desmond J.；Arantz，B.W.“嘧啶反應(yīng)XXII相應(yīng)的氯代-、溴代-和碘代嘧啶在氨解中的相對(duì)反應(yīng)性”，J.Chem.Soc.C(1971年)，第10期，1889-91頁]給出(2S，4R)-5-溴代-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶，MS676(MH+，1個(gè)Br)。
c)(2S，4R)-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷和甲基-2-氯代-6-甲基嘧啶給出(2S，4R)-6-甲基-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶-4-羧酸甲酯，MS670(MH+)。
d)(2S，4R)-6-甲基-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶-4-羧酸甲酯按照酯類一般水解方法(EtOH/二噁烷)水解給出(2S，4R)-6-甲基-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶-4-羧酸，MS656(MH+)。2.2脫S-保護(hù)基的方法D1.7克(2.84毫摩爾)(2S，4R)-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶的30毫升CH2Cl2溶液在0℃用8毫升TFA及5.82毫升(28毫摩爾)三異丙基硅烷處理。室溫30分鐘后將溶液完全蒸干，并將化合物從Et2O/戊烷中沉淀兩次給出1.06克(80％)無色油狀(3R，5S)-1-嘧啶-2-基-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇的三氟-乙酸酯(1∶1)，MS356(MH+)。
類似物a)(2S，4R)-2-氯-4-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶給出(3R，5S)-1-(2-氯-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；與三氟-乙酸的化合物，MS390(MH+)；b)(2S，4R)-5-溴-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶給出(2S，4R)-1-(5-溴-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇，MS434(MH+，1個(gè)Br)。(在前面沒有列出)c)(2S，4R)-6-甲基-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶-4-羧酸給出(2S，4R)-2-[4-巰基-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-1-基]-6-甲基-嘧啶-4-羧酸，MS414(MH+)。2.3方法B(平行合成)將0.45毫摩爾(2S，4R)-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷在1毫升二噁烷或0.1毫升DMF中的溶液、2.25毫摩爾2-氯代-雜芳族化合物和2.25毫摩爾N-乙基二異丙基胺在80～130℃加熱16小時(shí)～2天(參閱表1)。反應(yīng)物用制備型HPLC純化(RP-18，MeCN/H2O，UV 230nm)。
如說明(參閱脫S-保護(hù)基的一般方法，方法D)TFA/三異丙基硅烷脫保護(hù)基給出游離硫醇。2.4方法C將2克(3.85毫摩爾)(2S，4R)-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷、1.2克(7.7毫摩爾)2-氯代-5-正丙基嘧啶、1.98毫升(11.55毫摩爾)N-乙基二異丙基胺和催化量碘化銅(I)的混合物在80℃加熱10小時(shí)。反應(yīng)物冷卻并在H2O/Et2O(3×300)之間分配。有機(jī)相用飽和NaHCO3水溶液、10％NaCl水溶液洗滌，干燥(NaSO4)及蒸發(fā)?？焖俟枘z色譜(甲苯/Et2O99∶1)給出2克(81％)(2S，4R)-5-丙基-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶，MS640(MH+)。
如說明(參閱脫S-保護(hù)基的一般方法，方法D)TFA/三異丙基硅烷脫保護(hù)基給出(3R，5S)-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇的三氟-乙酸酯(1∶1)，MS398(MH+)。
根據(jù)類似方法通過(2S，4R)-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷和下列表1指出的2.離析物的反應(yīng)制備下列化合物。
實(shí)施例32-氯代嘧啶上的取代3.1在DMF中的反應(yīng)0.24(0.4毫摩爾)(2S，4R)-2-氯代-4-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶在8毫升DMF中的溶液，在0℃用0.05毫升(1.2毫摩爾)MeOH和0.054克(1.24毫摩爾)55％的NaH處理。在此溫度下保持反應(yīng)(6小時(shí))并升到室溫過夜。用飽和NH4Cl/Et2O(3×)水溶液萃取后，有機(jī)相用10％NaCl水溶液洗滌、干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)?？焖偕V(CH2Cl2/EtOAc 9.5∶5)給出0.14克(54％)(2S，4R)-4-[2-(2，5-二氟-4-甲氧基-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-2-甲氧基-嘧啶，MS640(MH+)。
TFA/三異丙基硅烷脫保護(hù)基(參閱脫S-保護(hù)基的一般方法，方法D)給出(3R，5S)-5-(2，5-二氟-4-甲氧基-芐氧基甲基)-1-(2-甲氧基-嘧啶-4-基)-吡咯烷-3-硫醇，MS398(MH+)。
類似物a)(2S，4R)-2-氯代-4-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶和10當(dāng)量苯酚/NaH在在70℃ 8小時(shí)后給出2-苯氧基-4-[(2S，4R)-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶，MS690(MH+)，該化合物脫保護(hù)(參閱脫S-保護(hù)基的一般方法，方法D)給出(3R，5S)-1-(2-苯氧基-嘧啶-4-基-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇，MS448(MH+)。3.2在其它溶劑中反應(yīng)0.24(0.4毫摩爾)(2S，4R)-2-氯-4-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶在1毫升MeOH中的溶液在0℃用0.16毫升(0.88毫摩爾)甲醇鈉(5.5 M在MeOH中)處理，在此溫度保持(2小時(shí))，升溫并在75℃加熱10小時(shí)。在蒸發(fā)和用飽和NH4Cl水溶液/Et2O(3x)萃取后，有機(jī)相用10％NaCl水溶液洗滌、干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)給出0.19克(77％)2-甲氧基-4-[(2S，4R)-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶，MS628(MH+)；此化合物脫保護(hù)基(參閱脫S-保護(hù)基的一般方法，方法D)給出(3R，5S)-1-(2-甲氧基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇，MS386 (MH+)。
類似物a)(2S，4R)-2-氯-4-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶和2.2當(dāng)量甲硫醇鈉/2當(dāng)量碘化鈉在THF中(70℃，28小時(shí))并脫保護(hù)基(參閱脫S-保護(hù)基的一般方法，方法D)后給出(3R，5S)-1-(2-甲硫烷基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇，MS402(MH+)；b)(2S，4R)-2-氯-4-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶和10當(dāng)量苯胺/3.5當(dāng)量N-乙基二異丙基胺在二噁烷中(105℃，48小時(shí))并脫保護(hù)基(參閱脫S-保護(hù)基的一般方法，方法D)后給出(3R，5S)-1-(2-苯氨基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇的三氟-乙酸鹽(1∶1)，MS447(MH+)；c)(2S，4R)-2-氯-4-[2-(2，4，5-三氟代-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶和7.5當(dāng)量芐胺/3.5當(dāng)量N-乙基二異丙基胺在二噁烷中(90℃，48小時(shí))并脫保護(hù)基(參閱脫S-保護(hù)基的一般方法，方法D)后給出(3R，5S)-1-(2-芐氨基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；三氟-乙酸鹽(1∶1)，MS461(MH+)；d)(2S，4R)-2-氯-4-[2-(2，4，5-三氟代-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶和7.5當(dāng)量丁胺/3.5當(dāng)量N-乙基二異丙基胺在二噁烷中(90℃，48小時(shí))并脫保護(hù)基(參閱脫S-保護(hù)基的一般方法，方法D)后給出(3R，5S)-1-(2-丁氨基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；三氟-乙酸鹽(1∶1)，MS427(MH+)；e)(2S，4R)-2-氯-4-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶和30當(dāng)量甲胺溶液(8.03M在EtOH中)/3.5當(dāng)量N乙基二異丙基胺在二噁烷中(90℃，48小時(shí))并脫保護(hù)基(參閱脫S-保護(hù)基的一般方法，方法D)后給出(3R，5S)-1-(2-甲氨基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；三氟-乙酸鹽(1∶1)，MS385(MH+)。實(shí)施例4Suzuki-型反應(yīng)一般這類反應(yīng)根據(jù)Stanforth，Stephen P.“聯(lián)芳基合成中的催化交叉-偶聯(lián)反應(yīng)”，Tetrahedron(1998年)，54卷(3/4期)，263-303頁來完成。4.1方法A(溶劑用氬氣脫氣10分鐘)將1.35克(2毫摩爾)(2S，4R)-5-溴-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶在12毫升二甲氧基乙烷中的溶液加入到0.116克(0.1毫摩爾)四(三苯基膦)鈀在1.4毫升二甲氧基乙烷的懸浮液中并攪拌15分鐘。然后加入在3.4毫升EtOH中的0.29克(2.4毫摩爾)苯基硼酸，10分鐘后加入8.8毫升2M Na2CO3水溶液。反應(yīng)物在90℃加熱2小時(shí)，蒸發(fā)并用H2O/Et2O(3x)萃取。有機(jī)相用10％ NaCl水溶液洗滌，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)。通過快速-硅膠色譜(甲苯)純化給出0.48克(36％)(2S，4R)-5-苯基-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶，MS674(MH+)。
TFA/三異丙基硅烷脫保護(hù)基(參閱脫S-保護(hù)基的一般方法，方法D)給出(3R，5S)-1-(5-苯基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇，MS432(MH+)。4.2方法B(溶劑用氬氣脫氣10分鐘)平行合成0.13毫摩爾(2S，4R)-5-溴代-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶、0.195毫摩爾硼酸或硼酸酯及0.004毫摩爾PdCl2(dppf)在2毫升二噁烷中的溶液和0.4毫升2M Na2CO3在80℃加熱48小時(shí)。過濾后混合物用制備型HPLC(RP18，50％～95％乙腈)純化。
TFA/三異丙基硅烷脫保護(hù)基(參閱脫S-保護(hù)基的一般方法，方法D)給出游離硫醇。4.3方法C(溶劑用氬氣脫氣10分鐘)[Giroux，Andre；Han，Yongxin；Prasit，Petpiboon“通過原位形成硼酸酯一次合成聯(lián)芳基”，Tetrahedron Lett.(1997年)，38卷(22期)，3841-3844頁]0.68克(1毫摩爾)(2S，4R)-5-溴-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶、0.28克(1.1毫摩爾)雙(頻哪醇)二硼、0.29克(3毫摩爾，在0.1托100℃干燥2小時(shí))乙酸鉀和0.024克(0.03毫摩爾)PdCl2(dppf)在12毫升DMF中的溶液在80℃攪拌4.5小時(shí)。反應(yīng)物冷卻，用0.195毫升(2毫摩爾)2-溴代吡啶、0.024克(0.03毫摩爾)PdCl2(dppf)和2.5毫升2M Na2CO3水溶液處理并在80℃加熱16小時(shí)。反應(yīng)物蒸發(fā)(60℃/0.1托)并在水/Et2O(3x)之間分配。有機(jī)相用10％NaCl水溶液洗滌及Na2SO4干燥。通過快速-硅膠色譜(甲苯/EtOAc 97.5∶2.5)純化給出0.125克(2S，4R)-5-吡啶-2-基-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶，MS675(MH+)。
TFA/三異丙基硅烷脫保護(hù)基(參閱脫S-保護(hù)基的一般方法，方法D)給出(3R，5S)-1-(5-吡啶-2-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)吡咯烷-3-硫醇；與三氟代-乙酸的化合物，MS433(MH+)。4.4方法D(溶劑用氬氣脫氣10分鐘)0.68克(1毫摩爾)(2S，4R)-5-溴-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶、15毫克(0.022毫摩爾)二氯化雙(三苯基膦)鈀(II)和9.5毫克碘化銅(I)在0.4毫升DMF中的溶液在80℃用0.35毫升(2.5毫摩爾)乙炔基三甲基硅烷和1.87毫升Et3N在1.5毫升DMF中的溶液處理1小時(shí)。在1小時(shí)期間再加入此相同的溶液，并在4小時(shí)后用戊烷(3x)/H2O(2x)萃取。有機(jī)相干燥(Na2SO4)、蒸發(fā)及通過快速-硅膠色譜(甲苯)純化給出0.063克(9％)(2S，4R)-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-5-三甲基硅烷乙炔基-嘧啶，MS694(MH+)。
TFA/三異丙基硅烷脫保護(hù)基(參閱脫S-保護(hù)基的一般方法，方法D)給出(3R，5S)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-1-(5-三甲基硅烷乙炔基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-3-硫醇，MS452(MH+)。
根據(jù)類似的方法，通過(2S，4R)-5-溴-2-[2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-1-基]-嘧啶和下列表2提出的2.離析物的反應(yīng)制備下列化合物。
實(shí)施例5S-乙?；?衍生化397毫克(1毫摩爾)(3R，5S)-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇(其三氟-乙酸鹽用飽和NaHCO3水溶液/EtOAc萃取)在6毫升吡啶中的溶液在0℃用0.14毫升(2毫摩爾)乙酰氯處理并在室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)物傾入冰水中并用Et2O(3x)萃取。有機(jī)相用1N HCl水溶液和10％NaCl水溶液洗滌、干燥(Na2SO4)和蒸發(fā)?？焖俟枘z色譜(CH2Cl2/Et2O100∶0～95∶5)給出383毫克(87％)(3R，5S)-硫代乙酸S-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟代-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-基]酯，MS440(MH+)。
b)上述粗產(chǎn)物懸浮在16.46克(105.1毫摩爾，2當(dāng)量)2-氯-5-正丙基嘧啶和30毫升(175毫摩爾，3.3當(dāng)量)N-乙基二異丙基胺中，混合物加熱到80℃。當(dāng)全部溶解后，加入350毫克(1.84毫摩爾)碘化銅，反應(yīng)混合物保持在80℃過夜。冷卻到室溫后，混合物用EtOAc/H2O稀釋，水溶液用EtOAc萃取。合并的有機(jī)層用1M KHSO4、1M HCl和鹽水洗滌并用Na2SO4干燥。用EtOAc∶己烷(1∶4～1∶1)快速色譜純化產(chǎn)生19.1克(74％)淺黃色泡沫狀的(2S，4R)-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-基]-甲醇，MS496(MH+)。
c)在15毫升THF中的1.0克(2.0毫摩爾)(2S，4R)-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-基]-甲醇在室溫下用764毫克(2.82毫摩爾)三苯基膦和420毫克(2.82毫摩爾)鄰苯二甲酰亞胺處理。溶液冷卻到0℃，加入615μl(3.83毫摩爾)偶氮二羧酸二乙酯在3毫升THF中的溶液。溶液室溫?cái)嚢柽^夜，加入H2O，無機(jī)層用EtOAc萃取。合并的層用1M NaOH、飽和NaHCO3溶液和鹽水洗滌，并在Na2SO4上干燥。用1∶2的EtOAc∶己烷作淋洗液的柱色譜純化，得到1.20克(95％)(2S，4R)-2-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-基甲基]-異吲哚-1，3-二酮白色固體，MS625(MH+)。
d)將在95毫升乙醇中的960毫克(1.52毫摩爾)(2S，4R)-2-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-基甲基]-異吲哚-1，3-二酮用2.4毫升(49.4毫摩爾)水合肼回流處理。冷卻到室溫后，過濾溶液并濃縮，粗產(chǎn)物用CH2Cl2∶MeOH∶NH4OH 90∶10∶0.25快速色譜來純化，生成659毫克(88％)白色泡沫狀的(2S，4R)-C-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-基]-甲胺，MS495(MH+)。
e)往3毫升甲醇中的643毫克(1.3毫摩爾)(2S，4R)-C-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-基]-甲胺中加入158μl(1.43毫摩爾)2，5-二氟苯甲醛和5毫升甲醇，使化合物部分地再溶解。接著加入108毫克(0.78毫摩爾)氯化鋅和109毫克(1.56毫摩爾)NaBH3CN在3毫升甲醇中的溶液。得到的溶液攪拌過夜、濃縮并溶解在EtOAc/飽和NaHCO3溶液中。無機(jī)層用EtOAc萃取，合并的有機(jī)層用NaHCO3和鹽水洗滌、Na2SO4干燥及蒸發(fā)。柱色譜純化產(chǎn)生750毫克(93％)淺黃色膠狀的(2S，4R)-(2，5-二氟-芐基)-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-基甲基]-胺，MS621(MH+)。
f)將在2毫升吡啶中的160毫克(0.258毫摩爾)(2S，4R)-(2，5-二氟-芐基)-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-基甲基]-胺在0℃用37μl(0.52毫摩爾)乙酰氯處理。溶液室溫?cái)嚢?.5小時(shí)，傾到冰水中并用EtOAc萃取。合并的有機(jī)層用1N HCl和鹽水洗滌、Na2SO4干燥及蒸發(fā)。用EtOAc∶己烷為1∶2～1∶1的柱色譜產(chǎn)生1 70毫克(定量)白色泡沫狀的(2S，4R)-N-(2，5-二氟-芐基)-N-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-基甲基]-乙酰胺。
g)用類似于一般程序E的方法，由(2S，4R)-N-(2，5-二氟-芐基)-N-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-基甲基]-乙酰胺制備無色膠狀的(2S，4R)-N-(2，5-二氟代-芐基)-N-[4-巰基-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-2-基甲基]-乙酰胺，MS421(MH+)。
h)用類似于一般程序E的方法，由(2S，4R)-(2，5-二氟-芐基)-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-基甲基]-胺制備無色膠狀的(2S，4R)-5-[(2，5-二氟代-芐基氨基)-甲基]-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-3-硫醇，MS379(MH+)。
i)將在1毫升吡啶中的50毫克(0.13毫摩爾)(2S，4R)-5-[(2，5-二氟-芐基氨基)-甲基]-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-3-硫醇在0℃用28μl(0.39毫摩爾)乙酰氯處理。溶液室溫?cái)嚢?.5小時(shí)，傾入冰水并用EtOAc萃取。合并的有機(jī)層用1N HCl和鹽水洗滌、Na2SO4干燥并蒸發(fā)。用EtOAc∶己烷為1∶1～2∶1的柱色譜得到54毫克(88％)近于灰白色的膠狀(3R，5S)-硫代乙酸S-[5-[[乙?；?(2，5-二氟-芐基)-氨基]-甲基]-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-3-基]酯，MS463(MH+)。
j)將在6.5毫升CH2Cl2中的220毫克(0.35毫摩爾)(2S，4R)-(2，5-二氟-芐基)-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-基甲基]-胺在0℃用74μl(0.43毫摩爾)N-乙基二異丙基胺、63μl(0.43毫摩爾)氯代甲酸芐酯和26.6毫克(0.043毫摩爾)聚合物結(jié)合的DMAP處理5分鐘，并在室溫處理1小時(shí)。加入212毫克(0.212毫摩爾)聚合物結(jié)合的三胺，且溶液被搖動(dòng)過夜。過濾并濃縮產(chǎn)生的331毫克(定量)白色泡沫狀的(2S，4R)-(2，5-二氟-芐基)-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-4-三苯甲硫烷基-吡咯烷-2-基甲基]-氨基甲酸芐酯，它根據(jù)程序E處理得到無色泡沫狀的(2S，4R)-(2，5-二氟-芐基)-[4-巰基-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-2-基甲基]-氨基甲酸芐酯，MS513(MH+)。
k)類似于實(shí)施例6g由(2S，4R)-(2，5-二氟-芐基)-[4-巰基-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-2-基甲基]-氨基甲酸芐酯制備(3R，5S)-硫代乙酸S-[5-[[芐氧基羰基-(2，5-二氟-芐基)-氨基]-甲基]-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-3-基]酯。
1)在0℃往5毫升EE中的137毫克(2.5毫摩爾)(3R，5S)-硫代乙酸S-[5-[[芐氧基羰基-(2，5-二氟-芐基)-氨基]-甲基]-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-3-基]酯中加入320μl 33％HBr的乙酸溶液。溶液在室溫?cái)嚢?2小時(shí)，傾入NaHCO3中，無機(jī)相用EtOAc萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌、Na2SO4干燥并蒸發(fā)。用EtOAc作淋洗液進(jìn)行柱色譜純化，得到65毫克(63％)無色油狀的(3R，5S)-硫代乙酸S-[5-[(2，5-二氟-芐基氨基)-甲基]-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-3-基]酯，MS421(MH+)。(沒有列出)
權(quán)利要求
1.通式I的化合物及其二聚體形式，和/或其藥用酯，和/或其藥用鹽 其中R1是氫、烷基羰基或芳基羰基；R2是烷基、鏈炔基、羥烷基、羧烷基、烷氧羰基、烷基羰基烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基烷基、烷基磺酰基、芳基、芳基烷基、芳基烷氧基烷基、芳基(烷氧羰基)烷基、芳基氨基羰基，二芳基烷基、芳基(羧烷基)氨基羰基、芳基羰基、芳基磺酰基、環(huán)烷基、環(huán)烷基羰基、環(huán)烷基烷基、雜芳基、雜芳基烷基、雜環(huán)基烷基或YR2基團(tuán)是雜環(huán)基；R3和R4獨(dú)立地選自氫、烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基烷基、烷硫基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、氨基甲酰基、羧基、羧烷基、氰基、氨基、單-和二烷基氨基、烷氧基、烷氧基烷基、烷氧羰基、烷氧羰基烷基、鏈烯基、鏈炔基、芳基、芳烷基、芳烷基(烷氧羰基)烷基、芳基羰基烷基、芳基鏈烯基、芳基(烷氧羰基)烷基、芳基氨基、芳基烷基氨基、芳氧基、鹵素、雜芳基、雜芳基烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基烷基、三甲基硅烷基乙炔基或三氟甲基；R5是氫、烷基、芳基、芳基烷氧羰基或烷基羰基；X1、X2、X3和X4是CH或N，附帶條件是X1、X2、X3和X4中最多只有兩個(gè)基團(tuán)是N；Y是-O-或-NR5-。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的通式II的化合物 其中R1、R2、R3、R4、X1、X2、X3、X4和Y的定義如權(quán)利要求1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1～2中任意一項(xiàng)的化合物，其中R1是氫或烷基羰基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1～3中任意一項(xiàng)的化合物，其中R1是氫或乙?；?br> 5.根據(jù)權(quán)利要求1～4中任意一項(xiàng)的化合物，其中R1是氫。
6.根據(jù)權(quán)利要求1～5中任意一項(xiàng)的化合物，其中R2是烷基、鏈炔基、羥烷基、羧烷基、烷氧羰基、烷基羰基烷基、烷基環(huán)烷基、烷基環(huán)烷基烷基、烷基磺?；?、芳基、芳烷基、芳基烷氧基烷基、芳基(烷氧羰基)烷基、芳基氨基甲酰基、二芳基烷基、芳基(羧烷基)氨基羰基、芳基羰基、芳基磺?；h(huán)烷基、環(huán)烷基羰基、環(huán)烷基烷基、雜芳基、雜芳基烷基或雜環(huán)基烷基。
7.根據(jù)權(quán)利要求1～6中任意一項(xiàng)的化合物，其中R2是芳基、芳烷基、芳基烷氧基烷基、芳基氨基羰基、芳基羰基、芳基磺?；h(huán)烷基、環(huán)烷基羰基、環(huán)烷基烷基或雜芳基烷基。
8.根據(jù)權(quán)利要求1～7中任意一項(xiàng)的化合物，其中R2是芳基、芳烷基、芳基氨基甲?；⒎蓟驶?、芳基磺?；螂s芳基烷基。
9.根據(jù)權(quán)利要求1～8中任意一項(xiàng)的化合物，其中R2是芳基烷基。
10.根據(jù)權(quán)利要求1～9中任意一項(xiàng)的化合物，其中R2是任選被2～3個(gè)鹵素原子取代的苯基烷基。
11.根據(jù)權(quán)利要求1～10中任意一項(xiàng)的化合物，其中R3和R4獨(dú)立地選自氫、烷基、烷硫基、鏈烯基、烷氧基、烷氧羰基、氨基、芳基、芳烷基、芳基鏈烯基、芳烷基氨基、芳氧基、單-和二烷基氨基、氨基甲?；?、羧基、氰基、鹵素、雜芳基、雜芳基烷基、三甲基硅烷基乙炔基和三氟甲基。
12.根據(jù)權(quán)利要求1～11中任意一項(xiàng)的化合物，其中R3和R4獨(dú)立地選自氫、烷基、烷氧基、烷氧羰基、鏈烯基、噻吩基、氨基、單-和二烷基氨基、羧基、氰基、鹵素、三甲基硅烷基乙炔基、苯基烷基氨基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、苯基和苯氧基，其中芳基和雜芳基可任選被烷基、烷氧基、羧基或鹵素取代。
13.根據(jù)權(quán)利要求1～12中任意一項(xiàng)的化合物，其中R3是氫、烷基、烷氧基、烷氧羰基、鏈烯基、噻吩基、氨基、單-和二烷基氨基、羧基、氰基、鹵素、三甲基硅烷基乙炔基、苯基烷基氨基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、苯基和苯氧基，其中芳基和雜芳基可任選被烷基、烷氧基、羧基或鹵素取代；并且其中R4氫。
14.根據(jù)權(quán)利要求1～13中任意一項(xiàng)的化合物，其中Y是-NR5-。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的化合物，其中R5是氫或烷基。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的化合物，其中R5是氫。
17.根據(jù)權(quán)利要求1～13中任意一項(xiàng)的化合物，其中Y是-O-。
18.根據(jù)權(quán)利要求1～17中任意一項(xiàng)的化合物，其中X1是N，及X2、X3和X4是CH。
19.根據(jù)權(quán)利要求1～17中任意一項(xiàng)的化合物，其中X2是N，及X1、X3和X4是CH。
20.根據(jù)權(quán)利要求1～17中任意一項(xiàng)的化合物，其中X3是N，及X1、X2和X4是CH。
21.根據(jù)權(quán)利要求1～17中任意一項(xiàng)的化合物，其中X1、X2、X3和X4是CH。
22.根據(jù)權(quán)利要求1～21中任意一項(xiàng)的化合物，其中R1是氫或烷基羰基；R2是被2～3個(gè)鹵素取代的苯基烷基；R3是氫、烷基、烷氧基、烷氧羰基、鏈烯基、噻吩基、氨基、單-和二烷基氨基、羧基、氰基、鹵素、三甲基硅烷基乙炔基、苯基烷基氨基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、苯基或苯氧基，及其中芳基和雜芳基任選被烷基、烷氧基、羧基或鹵素取代；R4是氫；X1、X2、X3和X4是CH或N，附帶條件是X1、X2、X3和X4中最多只有兩個(gè)基團(tuán)是N；Y是-NH-或-O-。
23.根據(jù)權(quán)利要求1～22的化合物，其中R1是氫或乙?；癛2是二氟代芐基或三氟代芐基。
24.根據(jù)權(quán)利要求1～23中任意一項(xiàng)的化合物，它們選自a)(3R，5S)-1-嘧啶-2-基-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇三氟-乙酸鹽(1∶1)；b)(3R，5S)-1-(4，6-二甲氧基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；c)(3R，5S)-1-(4-氨基-5-氟-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；d)2-[(2S，4R)-4-巰基-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-1-基]-煙腈；e)(3R，5S)-1-(6-苯基-噠嗪-3-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；f)2-[(2S，4R)-4-巰基-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-1-基]-煙酸；g)2-[(2S，4R)-4-巰基-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-1-基]-6-甲基-嘧啶-4-羧酸甲酯；h)2-[(2S，4R)-4-巰基-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-1-基]-4-三氟甲基-嘧啶-5-羧酸甲酯；i)(3R，5S)-1-吡嗪-2-基-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；與三氟-乙酸的化合物；j)2-[(2S，4R)-4-巰基-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-1-基]-煙酰胺；k)(3R，5S)-5-(2，5-二氟-4-甲氧基-芐氧基甲基)-1-(2-甲氧基-嘧啶-4-基)-吡咯烷-3-硫醇；l)(3R，5S)-1-(2-氯代-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；與三氟-乙酸的化合物；m)(3R，5S)-1-(5-乙基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇三氟-乙酸鹽(1∶1)；n)(3R，5S)-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇三氟-乙酸鹽(1∶1)；o)(3R，5S)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-1-(4-三氟甲基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-3-硫醇三氟-乙酸鹽(1∶1)；p)(3R，5S)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-1-(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-吡咯烷-3-硫醇三氟-乙酸鹽(1∶1)；q)(3R，5S)-1-吡啶-2-基-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇三氟-乙酸鹽(1∶1)；r)(2S，4R)-2-[4-巰基-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-1-基]-6-甲基-嘧啶-4-羧酸；s)(3R，5S)-1-(2-甲氧基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；t)(3R，5S)-1-(2-苯基氨基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇三氟-乙酸鹽(1∶1)；u)(3R，5S)-1-(2-芐基氨基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；三氟-乙酸鹽(1∶1)；v)(3R，5S)-1-(2-甲基氨基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；三氟-乙酸鹽(1∶1)；w)(3R，5S)-1-(2-丁基氨基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；三氟-乙酸鹽(1∶1)；x)(3R，5S)-1-(2-甲硫烷基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；y)(3R，5S)-1-(2-苯氧基-嘧啶-4-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；z)(3R，5S)-1-(5-苯基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；aa)(3R，5S)-1-(5-吡啶-2-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；與三氟-乙酸的化合物；bb)(3R，5S)-1-(5-吡啶-4-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；cc)(3R，5S)-1-(5-噻吩-3-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；dd)(3R，5S)-1-[5-(4-甲氧基-苯基)-嘧啶-2-基]-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；ee)(2S，4R)-4-{2-[4-巰基-2-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-1-基]-嘧啶-5-基}-苯甲酸；ff)(3R，5S)-1-(5-烯丙基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；gg)(3R，5S)-1-(5-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；及hh)(3R，5S)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-1-(5-三甲基硅烷基乙炔基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-3-硫醇。
25.根據(jù)權(quán)利要求1～24中任意一項(xiàng)的化合物，它們選自a)(3R，5S)-1-嘧啶-2-基-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇三氟-乙酸鹽(1∶1)；b)(3R，5S)-1-(6-苯基-噠嗪-3-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；c)(3R，5S)-1-吡嗪-2-基-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；與三氟-乙酸的化合物；d)(3R，5S)-1-(5-乙基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇三氟-乙酸鹽(1∶1)；e)(3R，5S)-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇三氟-乙酸鹽(1∶1)；f)(3R，5S)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-1-(5-三氟甲基-吡啶-2-基)-吡咯烷-3-硫醇三氟-乙酸鹽(1∶1)；g)(3R，5S)-1-(5-苯基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；h)(3R，5S)-硫代乙酸S-[1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-基]酯；i)(3R，5S)-1-(5-吡啶-2-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；與三氟-乙酸的化合物；j)(3R，5S)-1-(5-吡啶-4-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；k)1-(5-噻吩-3-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；l)1-(5-吡啶-3-基-嘧啶-2-基)-5-(2，4，5-三氟-芐氧基甲基)-吡咯烷-3-硫醇；m)(2S，4R)-5-[(2，5-二氟代-芐基氨基)-甲基]-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-3-硫醇；及n)(3R，5S)-硫代乙酸S-[5-[(2，5-二氟代-芐基氨基)-甲基]-1-(5-丙基-嘧啶-2-基)-吡咯烷-3-基]酯。
26.藥物組合物，該組合物含有根據(jù)權(quán)利要求1～25中任意一項(xiàng)的化合物和藥用賦形劑。
27.如權(quán)利要求1～25中任意一項(xiàng)所列的用于治療的化學(xué)式(I)的化合物。
28.權(quán)利要求1～25的化合物作為活性成分在制造藥物中的用途，所述藥物包含權(quán)利要求1～25中任意一項(xiàng)定義的化合物，用于預(yù)防和治療由內(nèi)皮素-轉(zhuǎn)變酶(ECE)活性引起的疾病，尤其是心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動(dòng)脈硬化癥、伯格氏病，高安氏動(dòng)脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調(diào)、內(nèi)毒素休克和敗血病，及用于創(chuàng)傷治療和控制月經(jīng)、青光眼、移植物排斥、與抑制細(xì)胞生長有關(guān)的疾病、眼科和大腦保護(hù)性適應(yīng)癥及器官保護(hù)的用途。
29.根據(jù)權(quán)利要求1～25中任意一項(xiàng)的化合物的用途，用于治療或預(yù)防與心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動(dòng)脈硬化癥、伯格氏病、高安氏動(dòng)脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調(diào)、內(nèi)毒素休克和敗血病關(guān)聯(lián)的疾病，以及用于創(chuàng)傷治療和控制月經(jīng)、青光眼、移植物排斥、與抑制細(xì)胞生長關(guān)聯(lián)的疾病、眼科及大腦保護(hù)性適應(yīng)癥和器官保護(hù)。
30.根據(jù)權(quán)利要求1～25中任意一項(xiàng)的化合物用作治療的活性物質(zhì)，特別在與鋅水解酶活性關(guān)聯(lián)的疾病的范圍，這些疾病如心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動(dòng)脈硬化癥、伯格氏病，高安氏動(dòng)脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調(diào)、內(nèi)毒素休克和敗血病，及用于創(chuàng)傷治療和控制月經(jīng)、青光眼、移植物排斥、與抑制細(xì)胞生長關(guān)聯(lián)的疾病、眼科和大腦保護(hù)性適應(yīng)癥及器官保護(hù)。
31.一種治療和/或預(yù)防處理心肌局部缺血、充血性心力衰竭、心律不齊、高血壓、肺部高壓、哮喘、大腦血管痙攣、蛛網(wǎng)膜下腔出血、驚厥前期、腎臟疾病、動(dòng)脈硬化癥、伯格氏病、高安氏動(dòng)脈炎、糖尿病并發(fā)癥、肺癌、前列腺癌、胃腸失調(diào)、內(nèi)毒素休克和敗血病，和用于創(chuàng)傷治療及控制月經(jīng)、青光眼、移植物排斥、與抑制細(xì)胞生長關(guān)聯(lián)的疾病、眼科和大腦保護(hù)性適應(yīng)癥及器官保護(hù)的方法，該方法包括將一種根據(jù)權(quán)利要求1～25中任意一項(xiàng)的化合物給人類或動(dòng)物服用。
32.一種制備權(quán)利要求1～25中任意一項(xiàng)定義的化合物的方法，它包括下列化學(xué)式III的化合物 其中A是HS-保護(hù)基及P是NH-保護(hù)基，a)與R2-鹵化物的反應(yīng)以引入-OR2基團(tuán)，接著脫去P-保護(hù)基并引入雜芳族化合物；或b)首先脫去化學(xué)式(III)的P-保護(hù)基，引入在權(quán)利要求1中定義的雜芳族化合物，接著通過-OH--NH2置換和還原胺化引入R2；任選地接著將權(quán)利要求1定義的R1，R2，R3，R4基團(tuán)轉(zhuǎn)化為不同的基團(tuán)和/或脫保護(hù)基和/或釋放出硫醇。
33.根據(jù)權(quán)利要求32的方法制備的化合物。
34.上文定義的發(fā)明。
全文摘要
本發(fā)明涉及化學(xué)式(I)的化合物及其二聚體形式和/或其藥用酯和/或鹽，化學(xué)式(I)中R
文檔編號(hào)A61P1/04GK1443184SQ01812970
公開日2003年9月17日 申請(qǐng)日期2001年7月12日 優(yōu)先權(quán)日2000年7月19日
發(fā)明者約翰內(nèi)斯·埃比, 丹尼爾·比爾, 亞歷山大·丘喬洛夫斯基, 亨麗埃塔·德姆洛 申請(qǐng)人:霍夫曼-拉羅奇有限公司