專利名稱：：一種治療肩周炎的外用中藥制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種治療肩周炎的制劑及其制備方法，特別是涉及一種治療肩周炎的外用中藥制劑及其制備方法。技術(shù)背景肩關(guān)節(jié)周圍炎簡稱肩周炎，是指肩關(guān)節(jié)及其周圍軟組織退行性改變所引起的肌肉、肌腱、滑囊、關(guān)節(jié)囊等肩關(guān)節(jié)周圍軟組織的廣泛慢性炎癥反應(yīng)。其主要特點(diǎn)為肩部疼痛和肩關(guān)節(jié)活動愛限，是中老年人的常見病、多發(fā)病。本病好發(fā)于4050歲以上中、老年人。多為單側(cè)發(fā)病，左肩多于右肩，雙肩同時發(fā)病者約為8%。由于以50歲左右發(fā)病者居多，所以又稱五十肩。又因?yàn)榛疾『蠹珀P(guān)節(jié)僵硬，功能活動受限，好像被凍結(jié)了一樣，故又稱之為凍結(jié)肩或肩凝癥。肩關(guān)節(jié)周圍炎的主要發(fā)病原因是肩周圍軟組織退行性改變，感受風(fēng)寒濕邪的侵襲，肩關(guān)節(jié)周圍的韌帶、肌腱等長期勞損，肩部外傷和肩部活動減少等。以上原因可引起肩關(guān)節(jié)周圍軟組織的急、慢性無菌性炎癥反應(yīng)，滲出、水腫，日久則肌腱、關(guān)節(jié)囊粘連，影響到關(guān)節(jié)的功能活動。肩關(guān)節(jié)周圍炎的臨床表現(xiàn)主要有肩部疼痛、壓痛，活動不便，有時夜間痛醒，睡覺時不能壓迫肩部，后期則表現(xiàn)為肩關(guān)節(jié)粘連，活動功能明顯受限?；颊叱２荒鼙呈帧⑹犷^、穿衣、脫衣、洗臉等動作。目前有很多治療肩周炎的藥物和方法，中醫(yī)認(rèn)為本病由肩部感受風(fēng)寒所致，其治療根本還是以活血化瘀、行氣止痛為主。專利申請?zhí)枮镃N02127922.5的專利申請公開了一種肩周炎痛貼及其制備工藝，它是以木別子、威靈仙、乳香、沒藥、冰片為原料藥制備而成，但其療效并沒有得到驗(yàn)證。吳昊峰在2003年又申請了專利申請?zhí)枮閆L200310111099.4的肩周炎痛貼及其制備工藝的專利申請，并在2006年獲得了授權(quán)。正如該專利中所說的那樣，中藥藥物對于一些人群來講有用，而對于另外一些人來講效果又不明顯，所以需要提供更多種類的藥物以供患者選擇。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了一種治療肩周炎的外用中藥制劑及其制備方法，該中藥制劑所用到的原料藥種類少，產(chǎn)品質(zhì)量較易控制，原料藥經(jīng)提取得到其有效成分使其更易吸收而發(fā)揮藥效，更好的提高本發(fā)明藥物的治療效果，從而提供一種能更加有效的治療肩周炎的外用中藥制劑。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案按照重量份計(jì)算，本發(fā)明治療肩周炎的外用中藥制劑是由黃芩79份、威靈仙1113份、青風(fēng)藤79份、乳香1214份、沒藥1214份、木鱉子79份、蓖麻子79份和麻油2025份制備而成。優(yōu)選地，選用如下的重量份配比黃芩8份、威靈仙12份、青風(fēng)藤8份、乳香13份、沒藥13份、木鱉子8份、蓖麻子8份和麻油21份。上述治療肩周炎的外用中藥制劑的制備方法按比例稱取取乳香和沒藥粉碎成細(xì)粉，混合均勻，得A品備用；取黃芩加水煎煮三次，合并三次煎煮液，濾過，濾渣棄去不用，濾液減壓濃縮至8(TC相對密度為1.201.25的清膏，得B品備用；取威靈仙和青風(fēng)藤放入80IO(TC的麻油中，浸漬2.54小時后過濾，濾渣棄去不用，在濾液中加入木鱉子和蓖麻子于8010(TC浸漬2.54小時后再次過濾，濾渣打漿制成油質(zhì)漿狀物，得C品備用，濾液于80IO(TC條件下加入蜂蠟并使之熔化，然后加入A品、B品和C品攪拌均勻，冷至室溫后按常規(guī)制劑工藝制成各種外用劑型。本發(fā)明外用貼劑是這樣制備的取乳香和沒藥粉碎成粒度為100目的細(xì)粉，混合均勻，得A品備用；取黃芩斷為13厘米的小段，加水煎煮三次，第一次加10倍量水煎煮1小時，第二次加8倍量水煎煮1小時，第三次加6倍量水煎煮1小時，合并三次煎煮液，濾過，濾渣棄去不用，濾液減壓濃縮至8(TC相對密度為1.201.25的清膏，得B品備用；取威靈仙和青風(fēng)藤放入9(TC的麻油中，浸漬3小時后過濾，濾渣棄去不用，在濾液中加入木鱉子和蓖麻子于90"C浸漬3小時后再次過濾，濾渣打漿制成油質(zhì)漿狀物，得C品備用，濾液于9(TC條件下加入蜂蠟并使之熔化，然后加入A品、B品和C品攪拌均勻，冷至室溫后用制片機(jī)制成厚薄均勻的圓形膏片，置于醫(yī)用透氣膠帶內(nèi)，制得外用貼劑。本發(fā)明配方選用黃芩、威靈仙、青風(fēng)藤、乳香、沒藥、木鱉子、蓖麻子和麻油進(jìn)行組合，將這些藥物組合在一起使各藥物協(xié)同增效，共奏活血化瘀、行氣止痛之功效，從而有效治療肩關(guān)節(jié)周圍炎所致的肩部疼痛、壓痛、活動受限等癥。本發(fā)明選用黃芩是因?yàn)辄S芩味苦，性寒，歸肺、膽、脾、大腸、小腸經(jīng)，清熱燥濕，瀉火解毒，止血，安胎，用于濕溫、暑溫胸悶嘔惡，濕熱痞滿，瀉痢，黃疸，肺熱咳嗽，高熱煩渴，血熱吐衄，癰腫瘡毒，胎動不安。威靈仙味辛、咸，性溫，歸膀胱經(jīng)，祛風(fēng)除濕，通絡(luò)止痛，用于風(fēng)濕痹痛，肢體麻木，筋脈拘攣，屈伸不利，骨哽咽喉。青風(fēng)藤味苦、辛，性平，歸肝、脾經(jīng)，祛風(fēng)濕，通經(jīng)絡(luò)，利小便，用于風(fēng)濕痹痛，關(guān)節(jié)腫脹，麻痹瘙癢。乳香味辛、苦，性溫，活血止痛，用于心腹諸痛，筋脈拘攣，跌打損傷，瘡癰腫痛；外用消腫生肌。沒藥味苦，辛，性平，入肝、脾、心、腎經(jīng)，散血去瘀，消腫定痛，用于治跌打損傷、金瘡、筋骨、心腹諸痛、癥瘕、經(jīng)閉、癰疽腫痛、痔漏、目障。木鱉子，味苦微甘，性溫，有毒，入肝、脾、胃經(jīng)，散結(jié)，祛毒，治癰腫、疔瘡、瘰疬、痔瘡、無名腫毒、癬瘡，風(fēng)濕痹痛，筋脈拘攣。蓖麻子味甘辛，性平，有小毒，入大腸經(jīng)，消腫拔毒，瀉下通滯，治癰疽腫毒，瘰疬，喉痹，疥癩癬瘡，水腫腹?jié)M，大便燥結(jié)。麻油性味甘、涼，具有潤腸通便、解毒生肌之功效，臨床還用麻油來煎熬膏藥，有生肌肉、止疼痛、消癰腫、補(bǔ)皮裂的作用，外用作為軟膏及硬膏基質(zhì)。為了確保本發(fā)明藥物的有效性和用藥安全，申請人進(jìn)行了有效性、安全性等動物實(shí)驗(yàn)。一、主要藥效學(xué)研究1、材料來源1.1藥膏的制備取乳香和沒藥粉碎成粒度為100目的細(xì)粉，將其混合均勻，得A品備用；取黃芩斷為2厘米的小段，加水煎煮三次，第一次加10倍量水煎煮1小時，第二次加8倍量水煎煮1小時，第三次加6倍量水煎煮1小時，合并三次煎煮液，用300目濾布濾過，濾渣棄去不用，所得濾液減壓濃縮至8(TC相對密度為1.201.25的清膏，清膏為B品備用；取威靈仙和青風(fēng)藤粉碎為最粗粉，放入9(TC的麻油中，浸漬3小時后用100目不銹鋼篩網(wǎng)過濾，濾渣棄去不用，在濾液中加入搗碎的木鱉子和蓖麻子于9(TC浸漬3小時后再次過濾，濾渣(浸漬后的木鱉子和蓖麻子)送入打漿機(jī)內(nèi)打漿并經(jīng)100目不銹鋼篩網(wǎng)過濾制成油質(zhì)漿狀物，油質(zhì)漿狀物為C品備用，濾液即為藥油。稱取適量蜂蠟于9(TC條件下使之熔于藥油中，然后加入A品、B品和C品后攪拌均勻，冷至室溫后即得膏塊，通過壓片機(jī)壓制成圓形外用膏片。1.2實(shí)驗(yàn)動物來源Wister大鼠，雌雄各半，體重160士10g，購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物研究中心，合格證號SCXK11-00-0006。昆明種小鼠，雌雄各半，體重21士lg，由北京維通利華試驗(yàn)動物技術(shù)研究所提供，許可證號SCXK(京)-2002-0003;家兔，雌雄各半，體重2.2士0.2kg，購自北京市海淀通利實(shí)驗(yàn)動物養(yǎng)殖場，動物合格證號SCXK(京)2000-0018。2、劑量設(shè)計(jì)60kg人一日用量為2.3g藥膏，貝1」0.04g/kg/d，按人與動物等效劑量折算，試驗(yàn)中大鼠用量為O.4、0.2、0.1g/kg/d、小鼠為O.8、0.4、0.2g/kg/d、兔為O.36、0.18、0.09g/kg/d，均分別相當(dāng)于人用量的2倍、等倍及l(fā)/2倍。各劑量組均采用藥膏按等體積不等濃度皮膚涂抹給藥。藥物用賦形劑(麻油)調(diào)制成同體積。賦形劑麻油的劑量采用調(diào)制小劑量時所采用的量。3、方法和結(jié)果3.1、對家兔肩周炎模型的影響實(shí)驗(yàn)方法取健康家兔，雌雄不拘，將動物按體重隨機(jī)分成6組空白對照組、模型對照組、陽性藥組、本發(fā)明藥膏大劑量組、中劑量組和小劑量組，每組8只(空白對照組6只)，雌雄各半，置于籠中常規(guī)飼養(yǎng)3天。取兔右側(cè)肩部外側(cè)脫毛，脫毛面積約為7X7cm2。除正常對照組外，家兔仰臥，后肢及左前肢固定，右前肢上臂于振蕩器固定連接。以2cm振幅，頻率160次/分平行搖動肩關(guān)節(jié)，每次連續(xù)l小時，然后用冰塊外敷家兔右肩部，當(dāng)冰塊化盡，及時更換，每次持續(xù)0.5小時。此操作連續(xù)14天。造模1周后，給藥組動物右肩部皮膚開始涂抹給藥，空白對照組涂抹賦形劑(麻油)，模型對照組涂抹水，連續(xù)1周。給藥l周后將家兔處死，取右側(cè)肱二頭長肌腱，用組織剪剝離去附著的腱周組織，每條肌腱均在同一部位取材2小塊，稱濕重后，立即放入5倍體積的冰蒸餾水中孕洗12小時。一塊組織用于羥脯氨酸測定，另一塊用于DNA和蛋白質(zhì)測定，同時耳緣靜脈采血測血液流變學(xué)相關(guān)指標(biāo)。各項(xiàng)指標(biāo)采用組間比較T檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果見表l、表2。測定方法(1)羥脯氨酸含量測定方法參照羥脯氨酸測試盒(樣本堿水解法)說明書.(2)DNA含量測定方法將冰蒸餾水孕洗的肌腱組織置于組織勻漿器中，加入0.05M檸檬酸鈉O.5ml，再加O.l麗aCl調(diào)PH為7.0，勻漿后3000轉(zhuǎn)/分離心，再用蒸餾水洗滌沉淀3次。向沉淀物加50X三氯乙酸3ml，混勻離心后取沉淀加3ml氯仿一甲醇(3:1)，離心后再加入50X三氯乙酸3ml于沉淀物中，加溫至9(TC，離心15分鐘，取上清液按紫外吸收法測定，在260nm波下測光密度值。公式為(OD260/U04)X稀釋液倍數(shù)〔[Ig/ml)DNA〔[i由)=-肌腱組織濕重(mg/ml)(3)蛋白質(zhì)含量測定方法取DNA測定剩下的沉淀物，力叫.5NNaOH5ml，溶解后用紫外吸收法測定，波長為280nm，標(biāo)準(zhǔn)管用結(jié)晶牛血清白蛋白，根據(jù)光密度值計(jì)算，公式為蛋白質(zhì)含量(yg/mg)=1.45O.D280—0.740.D260(4)血液流變學(xué)相關(guān)指標(biāo)采用LG-R-80系列血液黏度測試儀和LG-B-190型細(xì)胞流變學(xué)測定儀測定。表1本發(fā)明藥營3撥兔肩周炎翻的^0向<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>與空白對照組比較抑P〈0.01ttP〈0.05單位ug/mg組織與模型對照組比較*P〈0.05**P〈0.01表l結(jié)果顯示本發(fā)明藥膏三個劑量組均可明顯降低家兔肩周炎模型肌腱組織中羥脯胺酸的含量；大劑量組可降低DNA含量；大、中劑量組可降低蛋白質(zhì)含量，與模型對照組比較有顯著性差異(P〈0.05P〈0.01)。表2本發(fā)朋藥敦l家兔肩周炎模型血液流變的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表2結(jié)果顯示本發(fā)明藥膏所試三個劑量組對家兔肩周炎模型的全血黏度、血漿黏度、還原黏度無明顯影響。本發(fā)明藥膏大、中劑量組可明顯降低家兔肩周炎模型的血球壓積，與模型對照組比較有顯著性差異(P〈0.05)。本發(fā)明藥膏給藥三個劑量組聚集指數(shù)及聚集指數(shù)積分面積明顯降低，與模型對照組比較有顯著性差別(P〈0.01，P〈0.05)，說明本發(fā)明藥膏對家兔肩周炎模型的血液聚集性有明顯的抑制作用。本發(fā)明藥膏所試三個劑量組對家兔肩周炎模型血液的變形指數(shù)、變形指數(shù)積分面積無明顯影響。3.2、本發(fā)明藥膏對正常小鼠耳廓微循環(huán)的影響取健康昆明種小鼠50只，隨機(jī)分為5組，空白對照組、陽性對照組(通絡(luò)祛痛膏)、本發(fā)明藥膏大、中、小劑量組。各組動物按2。/。戊巴比妥鈉4mg/kg腹腔注射麻醉后，顯微錄象系統(tǒng)下觀察右耳前面同一部位微循環(huán)情況。然后開始給藥，右耳背面涂抹藥物，空白對照組涂抹賦性劑(麻油)，每日1次，連續(xù)3天。第4天用溫水輕輕洗去殘留的藥膏后，立即再觀察右耳同一部位微循環(huán)變化情況。在監(jiān)視器下放大150倍測量小動脈、小靜脈口徑。各項(xiàng)指標(biāo)采用差值組間比較T檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，見表3。表3本都月藥1^小SI5廓微循環(huán)的影卩向(小血管口徑及變化值)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>與空白對照組比較*P〈0.05**P〈0.01單位cm表3結(jié)果顯示本發(fā)明藥膏三個劑量組可不同程度的擴(kuò)張小鼠耳廓小動脈及小靜脈，其給藥前后動、靜脈口徑的變化值與對照組比較有顯著性差別(P〈0.05P〈0.01)。3.3、對小鼠醋酸疼痛模型的影響取小鼠60只，背部皮膚脫毛(面積為243cm2)，然后按體重隨機(jī)分為6組模型對照組、賦形劑組、陽性藥對照組、本發(fā)明藥膏大、中、小劑量組，各給藥組皮膚涂抹給藥，模型對照組涂抹水、賦形劑組涂抹賦形劑(麻油)，每日一次，連續(xù)4天，第4天涂抹后1小時，各動物腹腔注射O.5%的醋酸0.2ml/只，觀察20分鐘內(nèi)各小鼠出現(xiàn)典型扭體的次數(shù)，結(jié)果采用組間比較t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，見表4。表4本發(fā)明藥膏對醋酸所致小鼠疼痛模型的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>與模型對照組比較*P〈0.05**P〈0.01表4結(jié)果顯示注射醋酸后本發(fā)明藥膏三個劑量組小鼠的扭體數(shù)明顯少于模型對照組，與模型對照組比較有顯著性差別(P〈0.05P〈0.01)，說明本發(fā)明藥膏對醋酸所致小鼠疼痛有明顯的止痛作用。3.4、抗炎作用3.4.1、對大鼠棉球肉芽腫形成的影響取大鼠60只，背部脫毛(面積為4X5cm2)。乙醚淺麻醉后無菌條件下背部剪一小切口，然后向兩側(cè)皮下植入20mg的滅菌棉球。術(shù)后隨機(jī)分組為6組，模型對照組、賦形劑組、陽性藥組、本發(fā)明藥膏大、中、小劑量組。手術(shù)當(dāng)天開始背部脫毛處皮膚涂抹給藥，每天一次，連續(xù)7天，第8天先稱體重，藥后l小時將大鼠斷頭處死，剝離并取出棉球肉芽組織。于60'C烘箱內(nèi)干燥12小時后稱重，即為肉芽腫干重，比較各組肉芽腫重量，同時取出大鼠的胸腺和脾臟測定臟器指數(shù)，結(jié)果采用組間比較t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，見表5。表5本發(fā)朋藥敦3大鼠棉球肉芽腫形成的割向<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表5結(jié)果顯示本發(fā)明藥膏三個劑量組可明顯抑制大鼠棉球肉芽腫的形成，與模型對照組比較有顯著性差異(P〈0.05P〈0.01)。本發(fā)明藥膏三個劑量組對大鼠棉球肉芽腫實(shí)驗(yàn)脾臟和胸腺臟器指數(shù)無明顯影響。3.4.2、對小鼠皮膚毛細(xì)血管通透性的影響取小鼠60只，背部皮膚脫毛(面積為243cm2)，然后按體重隨機(jī)分為6組模型對照組、賦形劑組、陽性藥對照組、本發(fā)明藥膏大、中、小劑量組，各給藥組皮膚涂抹給藥，模型對照組涂抹水、賦形劑組涂抹賦形劑，每日一次，連續(xù)3天，第4天用溫水去除藥物后，各鼠尾靜脈注射O.5%伊文思蘭液體0.lml/10g，隨即皮膚上滴加二甲苯40ul，15分鐘后處死動物，取蘭染皮膚剪碎，放于蒸餾水丙酮(3:7)溶液2ml中，3000rpm離心15分鐘，取上清液于波長590nm處測定光密度值。結(jié)果采用組間比較t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，見表6。表6本發(fā)明藥膏對小鼠皮膚毛細(xì)血管通透性的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>與模型對照組比較**P〈0.01表6結(jié)果顯示本發(fā)明藥膏大、中二個劑量組能顯著抑制二甲苯引起的小鼠皮膚毛細(xì)血管通透性的增高，與對照組比較有顯著性差異(P〈0.01)。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)從肩周炎形成的機(jī)理、血液流變學(xué)、改善微循環(huán)、炎癥、止痛5個方面探討了本發(fā)明藥膏的藥效學(xué)作用，結(jié)果顯示本發(fā)明藥膏三個劑量組對家兔肩周炎模型肌腱組織中羥脯胺酸的含量、DNA含量及蛋白質(zhì)含量均有不同程度的降低作用；可明顯降低肩周炎模型家兔血液的聚集性；擴(kuò)張小鼠耳部小動、靜脈；對醋酸引發(fā)的小鼠疼痛有明顯的止痛作用；對小鼠皮膚毛細(xì)血管通透性有明顯抑制；對大鼠棉球性肉芽腫形成明顯抑制作用且不影響胸腺和脾臟指數(shù)。通過本實(shí)驗(yàn)為本發(fā)明藥膏在臨床的進(jìn)一步應(yīng)用提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。二、急性毒性實(shí)驗(yàn)1、材料來源1.1藥膏的制備如實(shí)驗(yàn)一、主要藥效學(xué)研究中l(wèi).l藥膏的制備方法。1.2實(shí)驗(yàn)動物來源新西蘭家兔，體重2.02.5kg，一級，雌雄各半。由北京市海淀區(qū)通利實(shí)驗(yàn)動物養(yǎng)殖場提供，合格證號為scxk(京)2000-0018。2、方法和結(jié)果2.1.動物皮膚的準(zhǔn)備各動物于給藥前24小時背部脊柱兩側(cè)去毛(先用剪刀，然后用脫毛劑)，去毛面積為身體的10%，24小時后檢査皮膚的情況是否正常。破損皮膚組用砂紙輕擦至滲血為度。2.2.將家兔按上述設(shè)計(jì)分組，各給藥組在脫毛部位均勻涂抹藥物，空白對照組涂抹水，賦形劑組涂抹賦形劑。6小時一次，共涂抹2次，涂藥部位用一次性膠布固定。給藥24小時后用溫水洗去殘留的藥物。連續(xù)觀察7天。觀察指標(biāo)①觀察記錄給藥后動物一般活動、皮膚毛發(fā)、眼和黏膜的變化，皮膚所產(chǎn)生的刺激反應(yīng)，按表7評分標(biāo)準(zhǔn)來判斷其刺激強(qiáng)度。②每天觀察呼吸、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動等方面的中毒表現(xiàn)③每天記錄動物的體重。表7皮膚刺激反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>2.3、試驗(yàn)結(jié)果1)接受本發(fā)明藥膏的家兔在觀察期間，一般活動正常，皮毛有光澤，攝食、大小便正常。2)呼吸、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動未表現(xiàn)出明顯急性毒性反應(yīng)。3)觀察期內(nèi)未發(fā)現(xiàn)家兔死亡4)局部皮膚所見對照組動物完整皮膚、破損皮膚均未見紅斑或水腫；本發(fā)明藥膏三個劑量組動物完整皮膚、破損皮膚均未見紅斑或水腫，結(jié)果見表85)各給藥組體重增長通過組間比較T檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理和空白對照組比較無顯著性差異，結(jié)果見表9。結(jié)論將本發(fā)明藥膏l(xiāng)g、2g、4g分別涂抹于家兔背部去毛后完整皮膚或破損皮膚，一日內(nèi)2次給藥，動物的一般狀態(tài)、體重、皮膚毛發(fā)、眼及粘膜、呼吸、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動未表現(xiàn)出明顯急性毒性反應(yīng)，對局部皮膚也無明顯刺激作用，因此認(rèn)為本發(fā)明藥膏皮膚用藥是安全的。表8本發(fā)朗藥家兔皮膚急性毒性試驗(yàn)(皮膚觀察)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>表9本發(fā)明藥膏對家兔皮膚急性毒性試驗(yàn)(體重觀察)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>三、長期毒性實(shí)驗(yàn)1、材料來源1.1藥膏的制備如實(shí)驗(yàn)一、主要藥效學(xué)研究中l(wèi).l藥膏的制備方法。1.2實(shí)驗(yàn)動物來源健康新西蘭家兔，體重2.02.5kg，雌雄各半。雌雄分籠飼養(yǎng)，每籠2只，自由取食及攝水。飼育在室溫2022。C的環(huán)境下。由北京通力試驗(yàn)動物養(yǎng)殖場提供，動物合格證號SCXK(京)2000-0018。2、方法和結(jié)果2.1、試驗(yàn)周期根據(jù)臨床試驗(yàn)療程7天，長期毒性取其3倍以上，故定為連續(xù)給藥4周，停藥后恢復(fù)期2周。2.2、劑量及分組:<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>4g藥膏10大劑量組大劑量組2g藥膏10中劑量組中劑量組1g藥膏10小劑量組小劑量組2.3、動物皮膚的準(zhǔn)備各動物于給藥前24小時背部脊柱兩側(cè)去毛(先用剪刀，然后用脫毛劑)，去毛面積為身體的10%，24小時后檢査皮膚的情況。破損皮膚組用砂紙輕擦至滲血為度。2.4、將家兔按上述設(shè)計(jì)分組，各組動物雌性各半，給藥組在脫毛部位均勻涂抹藥物，空白對照組涂抹水，賦形劑組涂抹賦形劑。每日一次，涂藥部位用一次性膠布固定，每次涂抹24小時后用溫水洗去殘留的藥物后再涂抹。連續(xù)4周，分別于停藥后和恢復(fù)期2周解剖動物2.5、觀察指標(biāo)1)一般情況給藥期間，觀察記錄動物的精神、活動、毛發(fā)、糞便等情況。2)每日觀察動物皮膚、粘膜的反應(yīng)，按表7判斷皮膚的刺激反應(yīng)強(qiáng)度和過敏程度。3)每周稱體重。4)外周血象測外周血象，作白細(xì)胞分類。5)生化指標(biāo)測血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(Crea)、堿性磷酸酶(ALP)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、總膽固醇(T-CH0)、葡萄糖(GLU)、總膽紅素(T-BIL)。6)重要臟器重量指數(shù)。7)重要臟器病理組織學(xué)檢査。試驗(yàn)結(jié)果采用組間比較T檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理2.6、試驗(yàn)結(jié)果1)給藥期間，三個劑量組家兔一般活動、精神狀態(tài)、毛發(fā)、糞便等均未見明顯異常。2)體重增長與空白對照組比較無明顯差異(表IO);表10本發(fā)朋藥膏對家兔長期毒注試驗(yàn)體重的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>3)外周血象，包括紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血紅蛋白、紅細(xì)胞壓積、血小板、白細(xì)胞分類均在正常范圍內(nèi)波動(表ll、12);表11本發(fā)明藥育對家兔長期毒性試驗(yàn)血象的影響(藥后1個月)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>4)生化指標(biāo)包括ALT、AST、BUN、Crea、ALP、TP、ALB、T-CHO、GUJ、T-BIL均在正常范圍內(nèi)波動(表13、14);表13本發(fā)明藥育對家兔長期毒性生化指標(biāo)的影響(藥后l個月)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>表14本發(fā)明藥育對家兔長期差性生化指標(biāo)的影響(恢復(fù)期)<table>tableseeoriginaldocumentpage19</column></row><table>5)重要臟器包括心、肝、脾、肺、腎、胸腺、腎上腺、腦、子宮、卵巢、睪丸、副睪、前列腺的重量系數(shù)與空白對照組相比無顯著性差異(表15、16)。表15本發(fā)朗藥敦1家兔長期毒注臟識旨數(shù)的影響(藥后l個月)<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>表1S本都月藥t^家兔長期壽注臟謝旨數(shù)的影響(恢復(fù)期)<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>6)完整皮膚的對照組和本發(fā)明藥膏三個劑量組給藥期間皮膚無明顯紅腫、脫屑等表現(xiàn);破損皮膚的對照組和本發(fā)明藥膏三個劑量組給藥期間個別動物的皮膚輕微發(fā)紅，無明顯水腫，主要發(fā)生在皮膚用砂紙摩擦后，通常在2—3天后好轉(zhuǎn)，并非藥物引起(見表17、18)。7)各主要臟器肉眼檢査未見明顯腫大、充血、粘連、壞死等病理變化。用藥部位皮膚光滑，無紅腫，無斑丘疹、脫屑、粗糙、無色素沉著；8)病理組織學(xué)檢査，未發(fā)現(xiàn)有由于藥物引起的病理形態(tài)學(xué)方面的改變。結(jié)論本發(fā)明藥膏三個劑量組涂抹家兔完整皮膚和破損皮膚，連續(xù)1個月，對家兔體重、外周血象、十項(xiàng)生化指標(biāo)、臟器指數(shù)及皮膚粘膜無明顯影響；家兔主要臟器無明顯由藥物引起的病理改變，說明本發(fā)明藥膏在所試劑量范圍內(nèi)無明顯毒副反應(yīng)，是比較安全的。表IT本發(fā)明藥昔家兔長期垂性試驗(yàn)皮膚瞎況(芫整皮膚組)<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>表18本發(fā)明藥昔家兔長期垂性試驗(yàn)皮膚瞎況(破損皮膚組)<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>四、家兔皮膚刺激實(shí)驗(yàn)及豚鼠過敏實(shí)驗(yàn)1、材料來源1.1藥膏的制備如實(shí)驗(yàn)一、主要藥效學(xué)研究中l(wèi).l藥膏的制備方法。1.2實(shí)驗(yàn)動物來源新西蘭家兔，體重2.02.5kg，一級，雌雄各半。豚鼠，一級，體重250300g，均由北京市海淀區(qū)通利實(shí)驗(yàn)動物養(yǎng)殖場提供，合格證號為scxk(京)2000-0018。2、方法和結(jié)果2.1、對家兔單次給藥皮膚刺激性試驗(yàn)試驗(yàn)方法動物皮膚的準(zhǔn)備各動物于給藥前24小時背部脊柱兩側(cè)去毛(先用剪刀，然后用脫毛劑)，去毛面積為身體的10%，24小時后檢査皮膚的情況。破損皮膚組用砂紙輕擦至滲血為度試驗(yàn)采用同體左右側(cè)自身對比，分完整皮膚組及破損皮膚組。每組家兔8只，去毛處左側(cè)涂本發(fā)明藥膏l(xiāng)g，右側(cè)涂賦性劑作為對照，涂抹部位用一次性膠布固定，每只動物分籠飼養(yǎng)。涂抹24小時后用溫水洗去殘留藥物，分別記錄l、24、48、72小時涂抹部位皮膚情況。試驗(yàn)結(jié)果觀察期間完整皮膚組和破損皮膚組動物對照側(cè)和給藥側(cè)均未見紅斑或水腫，結(jié)果見表19表19本發(fā)朋藥敦J家兔皮膚刺激試驗(yàn)(単改給藥)<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>2.2、對家兔多次給藥皮膚刺激性試驗(yàn)試驗(yàn)方法步驟同一次給藥。連續(xù)涂抹給藥7天，停藥后觀察一周，除觀察并記錄每日的紅斑及水腫情況進(jìn)行評分外，還觀察涂抹部位是否有色素沉著、出血點(diǎn)，皮膚粗糙等情況試驗(yàn)結(jié)果完整皮膚組接受本發(fā)明藥膏的家兔在整個觀察期間對照側(cè)和給藥側(cè)均未見紅斑或水腫；破損皮膚組動物從給藥第5天開始對照側(cè)和給藥側(cè)在劃痕處可見輕度的發(fā)紅，停藥后逐日減輕，至停藥第7天觀察結(jié)束時所有動物均已恢復(fù)，提示此反應(yīng)為機(jī)械擦傷皮膚后所引起的反應(yīng)，與受試藥物無關(guān)；所有動物涂抹部位皮膚未見色素沉著，出血點(diǎn)、皮膚粗糙等現(xiàn)象。結(jié)果見表20表20本都月藥敦t家被膚刺激試驗(yàn)(多l(xiāng)哈藥)<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>2.3、本發(fā)明藥膏對豚鼠皮膚過敏試驗(yàn)試驗(yàn)方法皮膚準(zhǔn)備各動物于給藥前24小時背部脊柱兩側(cè)去毛(先用剪刀，然后用脫毛劑)，去毛面積為身體的10%，24小時后檢査皮膚的情況。分組將豚鼠按體重隨機(jī)分成3組，每組10只，雌雄各半，第一組為本發(fā)明藥膏組，第二組為賦形劑對照組，第三組為致敏劑對照組。致敏接觸取受試物0.2g涂抹在豚鼠左側(cè)脫毛區(qū)，一次性膠布固定保持6小時。第7天、第14天再涂抹一次，共計(jì)3次，陽性致敏物組涂抹1%2，4一二硝基氯苯，賦形劑對照組在同等情況下涂抹賦形劑。激發(fā)接觸于末次給藥致敏后14天，將受試物0.2g涂抹豚鼠背部右側(cè)脫毛區(qū)，陽性對照用O.1%2，4一二硝基氯苯，6小時后去除藥物即刻觀察，然后于24、48、72小時再次觀察皮膚過敏反應(yīng)情況，按表7評分標(biāo)準(zhǔn)及致敏發(fā)生率推斷致敏性，致敏發(fā)生率的計(jì)算為將出現(xiàn)皮膚紅斑、水腫或全身性過敏反應(yīng)的動物例數(shù)(不論程度輕重)，除以受試動物總數(shù)，即致敏發(fā)生率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1)實(shí)驗(yàn)期間動物活動自如，大小便正常，無站立不穩(wěn)，哮喘、休克等全身癥狀。2)局部皮膚所見本發(fā)明藥膏和水對照組豚鼠均無一例發(fā)生皮膚過敏反應(yīng)，而陽性對照藥2，4-二硝基氯苯組的10只豚鼠出現(xiàn)不同程度的致敏，致敏率為100%，72小時基本恢復(fù)正常。結(jié)果見表21。3)對豚鼠皮膚過敏試驗(yàn)體重?zé)o明顯影響，結(jié)果見表22。表21本發(fā)朗藥敦t豚鼠皮膚的過敏，<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>表22本發(fā)朋藥敦t胨鼠皮膚的過敏，(體重)<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>結(jié)論1)將本發(fā)明藥膏1g—次涂抹或多次涂抹家兔完整皮膚和破損皮膚后均不弓1起明顯的刺激作用。2)本發(fā)明藥膏涂抹于豚鼠皮膚后不引起明顯的過敏反應(yīng)。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明是以常見的天然動植物藥為原料組成，產(chǎn)品配方來源于苗醫(yī)世代相傳的秘方，經(jīng)苗家特殊工藝精心制成。產(chǎn)品配方構(gòu)成比較簡單，產(chǎn)品質(zhì)量較易控制，原料藥經(jīng)提取得到其有效成分使其更易吸收而發(fā)揮藥效，更好的提高本發(fā)明藥物的治療效果，從而提供一種能更加有效的治療肩周炎的外用中藥制劑。本發(fā)明中藥制劑的制備方法簡單，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，無毒副作用，無刺激性，非致敏性，臨床可長期使用，為患者提供了一種用藥成本低、療效好的治療肩周炎的外用藥物。具體實(shí)施方式實(shí)施例l:本發(fā)明外用貼劑的制備方法取乳香260g和沒藥260g粉碎成粒度為100目的細(xì)粉，將其混合均勻，得A品備用；取黃芩160g斷為2厘米的小段，加水煎煮三次，第一次加10倍量水煎煮1小時，第二次加8倍量水煎煮1小時，第三次加6倍量水煎煮1小時，合并三次煎煮液，用300目濾布濾過，濾渣棄去不用，所得濾液減壓濃縮至8(TC相對密度為1.201.25的清膏，清膏為B品備用；取威靈仙240g和青風(fēng)藤160g粉碎為最粗粉，放入9(TC的麻油中，浸漬3小時后用100目不銹鋼篩網(wǎng)過濾，濾渣棄去不用，在濾液中加入搗碎的木鱉子160g和蓖麻子160g于9(TC浸漬3小時后再次過濾，濾渣(浸漬后的木鱉子和蓖麻子)送入打漿機(jī)內(nèi)打漿并經(jīng)100目不銹鋼篩網(wǎng)過濾制成油質(zhì)漿狀物，油質(zhì)漿狀物為C品備用，濾液即為藥油。稱取適量蜂蠟(蜂蠟、A品、B品、C品和藥油的總重量為2300g)于9(TC條件下使之熔于藥油中，然后加入A品、B品和C品后攪拌均勻，冷至室溫后用制片機(jī)制成厚薄均勻的圓形膏片，置于醫(yī)用透氣膠帶內(nèi)，分裝，即制得本發(fā)明的外用貼劑。性狀本品為黑色圓形膏片，油潤細(xì)膩，無飛邊缺口，氣微香。功能主治活血化瘀、行氣止痛。用于肩關(guān)節(jié)周圍炎所致的肩部疼痛、壓痛、活動受限等癥。用法用量外用，傷處洗凈擦干，將鐵膏與隔離紙分開，然后對準(zhǔn)痛處貼牢，24小時換藥膏一次，7天為一療程。注意事項(xiàng)過敏者慎用，孕婦忌用，禁止內(nèi)服。規(guī)格2.3g/片。儲藏密封，置干燥處。有效期暫定24個月。實(shí)施例2:本發(fā)明外用膏藥的制備方法取乳香240g和沒藥240g粉碎成細(xì)粉，混合均勻，得A品備用；取黃芩140g斷為l厘米的小段，加水煎煮三次，每次煎煮l小時，加水量以沒過藥材為宜，合并三次煎煮液，濾過，濾渣棄去不用，濾液減壓濃縮至8(TC相對密度為1.201.25的清膏，得B品備用；取威靈仙260g和青風(fēng)藤180g放入8(TC的麻油500g中，浸漬4小時后過濾，濾渣棄去不用，在濾液中加入木鱉子和蓖麻子于8(TC浸漬4小時后再次過濾，濾渣打漿制成油質(zhì)漿狀物，得C品備用，濾液即為藥油。稱取適量蜂蠟(蜂蠟、A品、B品、C品和藥油的總重量為2300g)于8(TC條件下使之熔于藥油中，然后加入A品、B品和C品攪拌均勻，冷至室溫后按常規(guī)制劑工藝制成膏劑實(shí)施例3:本發(fā)明外用貼劑的制備方法取乳香280g和沒藥280g粉碎成粒度為100目的細(xì)粉，將其混合均勻，得A品備用；取黃芩180g斷為3厘米的小段，加水煎煮三次，第一次加10倍量水煎煮1小時，第二次加8倍量水煎煮1小時，第三次加6倍量水煎煮1小時，合并三次煎煮液，用300目濾布濾過，濾渣棄去不用，所得濾液減壓濃縮至8(TC相對密度為1.201.25的清膏，清膏為B品備用；取威靈仙220g和青風(fēng)藤140g粉碎為最粗粉，放入10(TC的麻油400g中，浸漬2.5小時后用100目不銹鋼篩網(wǎng)過濾，濾渣棄去不用，在濾液中加入搗碎的木鱉子140g和蓖麻子140g于10(TC浸漬2.5小時后再次過濾，濾渣(浸漬后的木鱉子和蓖麻子)送入打漿機(jī)內(nèi)打漿并經(jīng)100目不銹鋼篩網(wǎng)過濾制成油質(zhì)漿狀物，油質(zhì)漿狀物為C品備用，濾液即為藥油。稱取適量蜂蠟(蜂蠟、A品、B品、C品和藥油的總重量為2300g)于10(TC條件下使之熔于藥油中，然后加入A品、B品和C品后攪拌均勻，冷至室溫后用制片機(jī)制成厚薄均勻的圓形膏片，置于醫(yī)用透氣膠帶內(nèi)，分裝，即制得本發(fā)明的外用貼劑。權(quán)利要求1.一種治療肩周炎的外用中藥制劑，其特征在于按照重量份計(jì)算，它是由黃芩7～9份、威靈仙11～13份、青風(fēng)藤7～9份、乳香12～14份、沒藥12～14份、木鱉子7～9份、蓖麻子7～9份和麻油20～25份制備而成。全文摘要本發(fā)明提供了一種治療肩周炎的外用中藥制劑及其制備方法，它是由黃芩、威靈仙、青風(fēng)藤、乳香、沒藥、木鱉子、蓖麻子和麻油制備而成。將黃芩經(jīng)水煎煮提取濃縮得清膏。威靈仙和青風(fēng)藤用麻油先浸漬，所得的藥油再浸漬木鱉子和蓖麻子，浸漬后的木鱉子和蓖麻子打成漿狀物，而所得的藥油加入蜂蠟使之熔化。乳香和沒藥粉碎成細(xì)粉，然后將細(xì)粉、清膏、漿狀物和藥油混合均勻，按照常規(guī)制劑工藝制成各種劑型。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明以常見的中草藥為原料，且所用到的原料藥種類少，產(chǎn)品質(zhì)量較易控制，原料藥經(jīng)提取得到其有效成分使其更易吸收而發(fā)揮藥效，為患者提供了一種用藥成本低、療效好的治療肩周炎的外用藥物。文檔編號A61K36/716GK101156903SQ20071020191公開日2008年4月9日申請日期2007年9月29日優(yōu)先權(quán)日2007年9月29日發(fā)明者何宗祥,張和明申請人:貴州心意藥業(yè)有限責(zé)任公司