專利名稱：一種復(fù)方苦參納米注射制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種復(fù)方苦參納米注射制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
納米中藥主要是指運用納米技術(shù)制造的，粒徑小于100納米的中藥有效成分、有效部位、原藥及復(fù)方制劑。生物機(jī)體對藥物的吸收、代謝是一個復(fù)雜的過程，中藥制劑產(chǎn)生的藥理效應(yīng)不能僅僅歸之于藥物特有的化學(xué)組成還與該制劑的物理狀態(tài)密切相關(guān)。因此，改變藥物制劑的物理狀態(tài)是新藥研制的一種有效方法。在改變物理狀態(tài)方面，改變藥物的單元尺寸是十分有效的。當(dāng)顆粒尺寸進(jìn)入納米量級時由于量子尺寸效應(yīng)和表面效應(yīng)，納米粒子呈現(xiàn)出新奇的物理化學(xué)和生物學(xué)特性。這就是應(yīng)用納米技術(shù)于中藥研究可能使藥物活性和生物利用度提高乃至產(chǎn)生新的特性依據(jù)所在。
同傳統(tǒng)中藥相比，納米中藥具有以下特點①提高了藥物的利用度，減少用藥量。②增強(qiáng)藥物的靶向性。③具有緩釋功能，將中藥納米粒進(jìn)行一定的表面修飾后，可能使中藥具有緩釋作用。④呈現(xiàn)新的藥效，拓寬原藥適應(yīng)癥，中藥加工至納米尺寸時，由于其量子尺寸等效應(yīng)導(dǎo)致其物理、化學(xué)特性的改變，從而可使中藥呈現(xiàn)出新功能。⑤豐富中藥的劑型選擇，提升傳統(tǒng)給藥途徑。
目前納米技術(shù)在中藥研究中存在以下的問題。第一，納米中藥的制備困難我國雖已制備一些納米級的中藥，可是由于中藥品種繁多，成分復(fù)雜，不同的成分由于其作用部位、作用機(jī)制及作用緩急的不同而要求其粒徑大小、載體成分及給藥劑量均有可能不同。同時納米中藥應(yīng)該有它自己的一套質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，使其生產(chǎn)規(guī)范化。第二，納米中藥的毒副作用藥物制成納米微粒，其物理性質(zhì)和化學(xué)性質(zhì)均發(fā)生了顯著的變化，這些變化對人體是否有毒副反應(yīng)均未有有關(guān)的研究報道。但由于納米材料的特殊性，除了可穿透皮膚，還會進(jìn)入細(xì)胞器內(nèi)，是否會直接參與或作為催化劑擾亂機(jī)體正常的化學(xué)反應(yīng)，均未見有關(guān)報道。此外，納米中藥還可以通過機(jī)體的屏障系統(tǒng)，那它是否會影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)，精子的生成及其活力、胎兒的發(fā)育等，這些問題均無法回避。第三，中藥在納米級粉碎后，納米微粒表面積變大，由于納米微粒表面的活性使他們很容易團(tuán)聚在一起，這給納米微粒的收集及其藥效的穩(wěn)定性帶來很大的困難。第四，成本提高由于現(xiàn)有技術(shù)水平及設(shè)備的限制，造成納米中藥在制備中的花費比傳統(tǒng)中藥的制備要高出不少。
目前納米中藥的研究主要集中于利用納米技術(shù)對少數(shù)成分比較明確的單體有效成分進(jìn)行納米處理制成納米制劑，或?qū)⒃纤幹苯臃鬯槌杉{米級，對大部分中藥的納米制劑研究還很少，主要是因為中藥有效成分和有效部位特別是中藥復(fù)方中有效部位本身就是一個“黑匣子”，中藥中真正起藥理作用的有效成分或有效部位研究本身就是一個難題，而且由于中藥成分比較復(fù)雜，所以將其制備成納米制劑需要克服的困難較多，因此，中藥納米制劑及技術(shù)是醫(yī)藥科研工作者的重要研究課題。
復(fù)方苦參注射液是以苦參、白土苓為原料經(jīng)科學(xué)提煉而制成的注射劑，具有清熱利濕，涼血解毒，散結(jié)止痛的功效，用于癌性疼痛的出血。復(fù)方苦參注射液既有良好的抗癌效應(yīng)，又能有效緩解疼痛，研究表明復(fù)方苦參注射液不僅對癌性疼痛、癌性出血、改善患者生存質(zhì)量有效，還有使瘤體縮小的作用。但復(fù)方苦參注射液在臨床應(yīng)用中除了局部使用有輕度刺激外，還有頭暈、便秘、惡心、過敏等不良反應(yīng)發(fā)生的報道，有速發(fā)型和緩發(fā)型二類，也有出現(xiàn)寒戰(zhàn)、高熱輸液反應(yīng)的。復(fù)方苦參注射液其所含成分穩(wěn)定性差，在長期貯存過程中苦參堿和氧化苦參堿兩成分會發(fā)生相互轉(zhuǎn)化，這寫都影響了復(fù)方苦參注射液的質(zhì)量控制和臨床應(yīng)用。
專利(申請?zhí)?1102554)公開了一種“納米復(fù)方苦參制劑藥物及其制備方法”，該方法將各藥物的納米原料按配比配制，且制備方法實用性較差。

發(fā)明內(nèi)容
基于上述原因，本發(fā)明研究人員經(jīng)大量實驗研究，將提取得到的復(fù)方苦參有效部位加適量載體采用本發(fā)明工藝方法制備成納米注射制劑，本發(fā)明方法簡便，易于大生產(chǎn)，制備得到的制劑粒徑達(dá)到納米級，采用本發(fā)明方法制備的納米制劑載藥量大，穩(wěn)定性好，而且能顯著提高藥物對腫瘤細(xì)胞的靶向性，藥理實驗表明本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑療效更顯著，靶向性好，且刺激性小，安全性好。
本發(fā)明旨在提供一種穩(wěn)定、安全、療效好、具有靶向作用的復(fù)方苦參納米注射制劑。
本發(fā)明還提供了上述復(fù)方苦參納米注射制劑的制備方法。
本發(fā)明與復(fù)方苦參注射液比較，其特征在于采用本發(fā)明工藝將復(fù)方苦參制備成達(dá)到納米粒徑的制劑，采用本發(fā)明方法制備的納米制劑具有顯著的靶向性。
本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)一、工藝制法(1)制劑處方重量份組成為復(fù)方苦參有效部位2-5份，載體10-20份。
(2)復(fù)方苦參有效部位的制備按照《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑分冊第十四冊復(fù)方苦參注射液項下的制法進(jìn)行提取醇沉，藥液回收乙醇后液壓濃縮并真空干燥，得到本發(fā)明復(fù)方苦參有效部位。
(3)方法一、取處方量的復(fù)方苦參有效部位、乳化劑、脂質(zhì)，混勻，加熱熔融，將聚山梨醇-20或60加入其中，與70℃的蒸餾水混合，攪拌制備成微乳，將65℃的微乳倒入可保溫的注射器中保溫15分鐘，在機(jī)械攪拌條件下于一定時間內(nèi)將熱的微乳加入到冷的蒸餾水中，即得藥物混懸液。
方法二、取處方量的復(fù)方苦參有效部位、乳化劑、脂質(zhì)，加熱至80±5℃，在攪拌條件下加入適量相同溫度甘油和泊洛沙姆的水溶液，制成粗乳，在80±5℃條件下用高壓乳勻機(jī)載40MPa壓力下乳勻5次，迅速冷卻至室溫形成主藥混懸液。
方法三、按處方稱取乳化劑，加少量吐溫80，在高速攪拌條件加入70±5℃的蒸餾水中，待完全熔融作為水相，再稱取脂質(zhì)加入處方量復(fù)方苦參有效部位，加熱熔融作為油相，將油相緩慢加入水相中，持續(xù)攪拌1小時后超聲分散室穩(wěn)，頻率45-50Hz，超聲5-8分鐘，迅速冷卻至室溫形成主藥混懸液。
方法四、取復(fù)方苦參有效部位，脂質(zhì)和丙酮適量加入容器中，超聲使充分溶解加入處方量的乳化劑，微熱使溶成有機(jī)相，另取乳化劑溶于適量水中，構(gòu)成水相，將有機(jī)相在(1000r/min)攪拌下注入75±2℃水相中，繼續(xù)加熱攪拌4h，使有機(jī)溶媒完全蒸發(fā)并使體系濃縮，將所得的半透明體系攪拌下(1000r/min)快速溶解于0-2℃的水相中，繼續(xù)攪拌2小時，即得主藥混懸液。
(4)制劑的制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP適量，加注射用水至全量，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP適量，加注射用水至全量，攪勻，加入氯化鈉或葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入賦形劑，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參粉針制劑。
本發(fā)明載體主要包括脂質(zhì)和乳化劑兩部分。
本發(fā)明所用的脂質(zhì)可以為脂肪酸甘油酯類(包括三硬脂酸甘油酯、三棕櫚酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三窬酸甘油酯、Witepsol W35、Witepsol H35、Witepsol H42、單硬脂酸甘油酯)及脂肪酸類(如硬脂酸、棕櫚酸)等。
本發(fā)明所用乳化劑可以為磷脂(包括大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂及磷脂酰膽堿等)、Pluronic F68、泊洛沙姆、聚山梨醇、膽酸鹽、四丁酚醛等。
本發(fā)明納米注射制劑可以為納米水針劑、納米粉針劑、納米輸液制劑。
本發(fā)明納米水針劑、納米輸液劑加入少量PVP(聚乙烯吡咯烷酮)，可以提高制劑的穩(wěn)定性，防止納米粒聚集。
本發(fā)明納米粉針制劑的賦形劑為甘露醇、葡萄糖、乳糖、右旋糖酐、葡聚糖中的一種或兩種。
本發(fā)明制劑所用納米載體還可以通過以下方法制備得到將復(fù)方苦參有效部位的油溶液(聚氰基丙烯酸烷酯、聚乳酸、聚丙交酯-乙交酯、殼聚糖、明膠中的一種或幾種)，同無水乙醇混合，搖勻，得透明溶液；水相為0.5％非離子型表面活性劑Pluronic F68的水溶液(pH值約6)，兩相均為20℃，將油相通過硅膠管或細(xì)針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發(fā)至原體積的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)過濾，即得。
本發(fā)明所用的以上載體制備工藝是我們經(jīng)大量實驗研究和優(yōu)選的結(jié)果，在研究過程中我們采用了很多納米技術(shù)工藝并進(jìn)行了比較，有的工藝難以制備成納米藥物，而有的工藝即便制備成納米藥物，也達(dá)不到本發(fā)明制劑的靶向效果。
二、質(zhì)量檢測儀器H-7000型透射電鏡儀(日本Hitachi公司)；Zetamaster光子相關(guān)光譜儀(英國Malvern公司)；LC-10A高效液相色譜儀(日本島津)；TGL-18G型臺式高速離心機(jī)。
檢測依據(jù)參照《中華人民共和國藥典》2005版二部附錄XIX E指導(dǎo)原則項下的方法。
1、形態(tài)觀察及粒徑將本發(fā)明納米藥物在透射電鏡下進(jìn)行形態(tài)觀察，可見呈圓球體，大小較均勻，表面光滑，無粘連。根據(jù)納米藥物的顯微照片測定了500個，平均粒徑為37.6nm，最大粒徑為68.5nm，最小粒徑為22.0nm，且粒徑分布符合正態(tài)分布規(guī)律。
2、包封率和載藥量測定參照復(fù)方苦參注射液項下苦參堿的含量測定方法進(jìn)行含量測定，并用下述公式計算包封率和載藥量包封率(％)＝(投藥量－游離藥物量)/投藥量×100％；載藥量(％)＝(投藥量－游離藥物量)/納米藥物的重量×100％。結(jié)果以苦參堿計平均包封率為95.7.％，載藥量可達(dá)10％-25％。
3、穩(wěn)定性考察將本發(fā)明納米藥物分別置于小瓶內(nèi)，密封。于冰箱(3-5℃)、室溫(20-25℃)和37℃(RH75％)的環(huán)境中放置，于0、1、2和3月觀測納米藥物的外觀、大小、再分散性等。結(jié)果均未見明顯變化，3種條件下的納米藥物再分散性保持良好，無聚合現(xiàn)象的發(fā)生。結(jié)果見表1。
表1穩(wěn)定性實驗結(jié)果

4、加速實驗含量測定復(fù)方苦參注射液(山西金晶藥業(yè)有限公司)；本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑(按本發(fā)明制備工藝制備，由廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司實驗室制備)；將以上制劑分別置40℃，RH75％條件下放置6個月，分別測定制劑中苦參堿的含量，考察加速條件下復(fù)方苦參制劑含量的變化(以0月含量為100％計算)。結(jié)果見表2。
表2制劑穩(wěn)定性試驗含量測定結(jié)果

試驗結(jié)果表明在加速實驗過程中復(fù)方苦參注射液的苦參堿含量下降明顯，而采用本發(fā)明方法制備的復(fù)方苦參納米注射制劑變化較小，同時測定上述制劑的不溶性微粒，發(fā)現(xiàn)復(fù)方苦參注射液不溶性微粒數(shù)目與本發(fā)明復(fù)方苦參納米制劑比較在貯藏過程中不溶性微粒有顯著增加趨勢，而本發(fā)明復(fù)方苦參納米制劑數(shù)目少且貯藏過程中基本不變，說明本發(fā)明復(fù)方苦參納米制劑的制備方法顯著提高了制劑的質(zhì)量和穩(wěn)定性，具有重要的實際意義。
三、藥理和靶向?qū)嶒炘囁幣c動物復(fù)方苦參注射液(山西金晶藥業(yè)有限公司)；本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑(按本發(fā)明制備工藝制備，由廣東天之驕藥物開發(fā)有限公司實驗室制備)；Wistar大鼠，體重180-220g；健康小鼠，體重18-22g；瘤株小鼠S180，小鼠肝癌H22(廣州市實驗動物中心)。
1.對移植性肝癌H22的影響和靶向作用無菌抽取接種后第7d的肝癌H22荷瘤小鼠腹水，加4倍量生理鹽水混勻，立即接種于小鼠右前肢腋窩處皮下，每只接種0.2ml，接種后24h隨機(jī)分組，尾靜脈注射給藥，給藥劑量為8g生藥/kg，給藥容積同為0.2ml/只，對照組給予等量生理鹽水，每日給藥1次，連續(xù)給藥10d，于末次給藥后24h脫頸處死小鼠，稱體重并細(xì)心剝離皮下瘤塊，于EM50電子天平稱取瘤重，并計算抑瘤率，取腫瘤細(xì)胞然后按組織∶生理鹽水為1∶1.5(W/V)的比例勻漿，離心10min(2000rpm)，取上清液用HPLC法測定苦參堿的含量。同時末次給藥后1h取血測定血清中的苦參堿含量。結(jié)果見表3、表4。
表3對移植性肝癌H22小鼠的影響

注與生理鹽水組比較**P＜0.01，與陽性對照組比較ΔΔP＜0.01表4對移植性肝癌H22的靶向作用

結(jié)果表明本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑能延長移植性肝癌H22小鼠的生存時間，具有比復(fù)方苦參注射液更好的藥理作用，本發(fā)明納米注射制劑與復(fù)方苦參注射液比較有效成分在血清中濃度相當(dāng)，而肝癌H22腫瘤細(xì)胞中顯著增加，表明本發(fā)明納米注射制劑對肝癌H22腫瘤細(xì)胞具有較好的靶向性。
2.對小鼠S180腫瘤作用2.1對小鼠S180腫瘤生長抑制作用和靶向作用取接種傳代小鼠S180，在勻漿器中加入生理鹽水，制成小鼠S180瘤勻漿液，再以生理鹽水1∶3稀釋，然后取0.2ml注入小鼠左腋下皮下，24小時稱重，給藥組小鼠每日尾靜脈給藥一次，給藥劑量為8g生藥/kg，給藥容積同為0.2ml/只，對照組給予等量生理鹽水，共7天。停藥次日處死小鼠，稱體重并細(xì)心剝離皮下瘤塊，于EM50電子天平稱取瘤重，并計算抑瘤率，將稱重后的瘤塊按組織∶生理鹽水為1∶1.5(W/V)的比例勻漿，離心10min(2000rpm)，取上清液用HPLC法測定苦參堿的含量。同時末次給藥后1h取血測定血清中的苦參堿含量。結(jié)果分別見表5、表6。
表5對小鼠S180腫瘤生長抑制作用

注與生理鹽水組比較**P＜0.01，與復(fù)方苦參注射液比較ΔΔP＜0.01表6對小鼠S180腫瘤的靶向作用

結(jié)果表明本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑能顯著抑制S180腫瘤生長，具有比復(fù)方苦參注射液更好的藥理作用，本發(fā)明納米注射制劑與復(fù)方苦參注射液比較有效成分在血清中濃度相當(dāng)，而S180腫瘤細(xì)胞中顯著增加，表明本發(fā)明納米注射制劑對S180腫瘤細(xì)胞具有較好的靶向性。
2.2對荷瘤S180小鼠死亡率和存活時間的影響取接種傳代小鼠S180，在勻漿器中加入生理鹽水，制成小鼠S180瘤勻漿液，再以生理鹽水1∶3稀釋，然后取0.2ml注入小鼠左腋下皮下，于接種腫瘤后一周，即第八天開始按1.1方法給藥，讓其自然死亡，待對照組動物全部死亡后，比較死亡率，并比較90天各組動物的存活時間差異，設(shè)給藥組與對照組，每組小鼠20只，結(jié)果見表7。
表7對小鼠死亡率和存活時間的影響

注與生理鹽水組比較**P＜0.01，與復(fù)方苦參注射液組比較ΔP＜0.05結(jié)果表明本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑能顯著降低荷瘤小鼠死亡率，延長荷瘤小鼠存活時間，與復(fù)方苦參注射液比較作用更顯著。
3.鎮(zhèn)痛作用3.1對小鼠熱板致痛作用的影響取小鼠30只，雌雄各半，隨機(jī)分為3組，每組10只，即生理鹽水組、復(fù)方苦參注射液組、本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑組，給藥劑量為8g生藥/kg，給藥容積相同為0.2ml/只，空白對照組給予等量生理鹽水，連續(xù)給藥3天，末次給藥后1h將各鼠分別固定于55±0.5℃的熱板儀中，以舔后足作為“疼痛”的反應(yīng)指標(biāo)，觀察給藥后小鼠對熱板痛的反應(yīng)時間，結(jié)果見表5。
3.2對醋酸引起的扭體反應(yīng)的影響取小鼠，雌雄各半，分組及給藥方法同3.1，連續(xù)給藥3天，末次給藥后1h，腹腔注射0.6％醋酸溶液0.2ml/20g體重，觀察10min內(nèi)的小鼠扭體次數(shù)，結(jié)果見表8。
表8鎮(zhèn)痛試驗結(jié)果

注與生理鹽水組比較*P＜0.05**P＜0.01試驗結(jié)果表明本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑具有較好的鎮(zhèn)痛作用，與復(fù)方其中本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑的鎮(zhèn)痛作用比復(fù)方苦參注射液的作用更為顯著。
4.止血作用4.1對小鼠出血時間的影響取小鼠，雌雄各半，分組及給藥方法同3.1，連續(xù)給藥3天，于末次給藥后30min將小鼠尾尖端3mm處剪斷，待血液自行流出開始計時，每隔30s用濾紙吸去血滴1次，直至血流自行停止(濾紙吸無血)為止，計算出血時間，結(jié)果見表9。
表9對小鼠出血時間的影響

注與生理鹽水組比較*P＜0.05**P＜0.01試驗結(jié)果表明本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑具有顯著的止血作用，與復(fù)方苦參注射液組比較效果更好。
5.抗炎作用5.1對小鼠耳二甲苯致炎的影響取小鼠30只，雌雄各半，分組及給藥方法同3.1，連續(xù)給藥3天，于末次給藥后30min，將二甲苯0.02ml涂于小鼠左耳，1h后脫臼處死小鼠，剪下二耳，打孔稱重，以左耳與右耳片重量差值為腫脹度，結(jié)果見表10。
表10對小鼠耳二甲苯致炎的影響結(jié)果

注與生理鹽水組比較*P＜0.05**P＜0.01結(jié)果表明本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑具有良好的抗炎作用，與復(fù)方苦參注射液組比較其抗炎效果更好。
7.血管刺激性考察取家兔8只，隨機(jī)均分2組，每組4只，分別于左耳把家兔置于固定器中，且頭用兔頭固定儀固定，用酒精將皮膚消毒后，于右側(cè)耳緣靜脈注射復(fù)方苦參注射液和本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑，于另一側(cè)對應(yīng)部位注射同一體積的生理鹽水作為對照，每日注射1次，連續(xù)1周，觀察兔耳緣靜脈反應(yīng)，每日觀察注射部位血管有無發(fā)紅、水腫、周圍有無滲血，觸摸血管有無變硬現(xiàn)象，左右耳比較觀察。于末次給藥后24h，將動物處死，取下兩耳，進(jìn)行組織切片檢查，切片部位為進(jìn)針部位的向心端，距進(jìn)針部位1-4cm，分1-2.5cm和2.5-4cm兩段取樣。
觀察指標(biāo)及評分標(biāo)準(zhǔn)觀察方法包括肉眼觀察和顯微鏡下病理觀察。觀察給藥血管及其周圍組織的變化，顯微鏡下觀察耳緣靜脈有無血栓形成、內(nèi)皮損傷及血管周圍組織的病理變化情況。對各項指標(biāo)評分。①血管變化。肉眼觀察無明顯充血記0分，輕度充血發(fā)紅、紋路清晰記1分，充血發(fā)紅、紋路不清記2分，重度充血、呈紫紅色記3分；顯微鏡觀察血管內(nèi)皮及血管壁完整記0分，有內(nèi)皮損傷記1分，有血栓栓塞記2分，血管破裂記3分。②血管周圍組織變化。肉眼觀察無明顯水腫記0分，輕微水腫記1分，明顯水腫記2分，嚴(yán)重水腫記3分；顯微鏡觀察周圍組織正常記0分，水腫記1分，出血記2分，有炎癥細(xì)胞浸潤記3分。將每組4只家兔各項觀察指標(biāo)得分累加，計算各組平均得分值，見表11。
表11刺激性試驗結(jié)果

由以上實驗結(jié)果可知本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑與復(fù)方苦參注射液比較刺激性具有明顯改善。
8.溶血毒性考察2％紅細(xì)胞混懸液的制備取兔耳緣靜脈取血10-20ml，放入盛有玻璃珠的錐形瓶中，振搖10分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血。加10倍量的生理鹽水溶液，搖勻，離心，除去上清液，沉淀的紅細(xì)胞再用生理鹽水溶液洗滌2-3次，至上清液不呈紅色時為止。將所得的紅細(xì)胞用用生理鹽水配成濃度為2％的混懸液，即得。
試驗方法取試管6支，按表中的配比量依次加入2％紅細(xì)胞混懸液和生理鹽水溶液，混勻，于37℃恒溫箱中放置30分鐘，分別加入不同量的藥液(以第6管為空白對照)，搖勻后，置37℃恒溫箱中，開始每隔15分鐘觀察1次，1小時后，每隔1小時觀察1次，共觀察2小時。結(jié)果見表12。
表12溶血實驗結(jié)果

結(jié)果以第3試管為準(zhǔn)，各管均未染有紅色，顯微鏡下觀察未見有紅細(xì)胞破裂，說明本品不溶血，安全性好。
9.急性毒性實驗取Wistar大鼠80只，雌雄各半。禁食24h，隨機(jī)分4組，每組20只。濃縮成相同的生藥濃度，各組分別尾靜脈注射藥物，給藥劑量按生藥量折算相當(dāng)于復(fù)方苦參注射液300g生藥/kg，每天給藥3次，連續(xù)7天，觀察小鼠死亡情況，結(jié)果見表13。
表13急性毒性實驗結(jié)果

急性毒性實驗結(jié)果表明本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑與復(fù)方苦參注射液比較安全性更好。
小結(jié)以上藥理實驗結(jié)果表明本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑藥理作用顯著好于復(fù)方苦參注射液，且本發(fā)明復(fù)方苦參納米注射制劑具有更好的靶向性和安全性。
四、制備實施例實施例1(1)取復(fù)方苦參有效部位20g、卵磷脂50g、單硬脂酸甘油酯50g，混勻，加熱熔融，將聚山梨醇-202g加入其中，與70℃的蒸餾水混合，攪拌制備成微乳，將65℃的微乳倒入可保溫的注射器中保溫15分鐘，在機(jī)械攪拌條件下于一定時間內(nèi)將熱的微乳加入到冷的蒸餾水中，即得藥物混懸液。
(2)制劑的備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 4g，加注射用水至50000ml，攪勻，加入氯化鈉調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入甘露醇，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參粉針制劑500瓶。
實施例2(1)取復(fù)方苦參有效部位20g、豆磷脂50g、硬脂酸60g，混勻，加熱熔融，將聚山梨醇-603g加入其中，與70℃的蒸餾水混合，攪拌制備成微乳，將65℃的微乳倒入可保溫的注射器中保溫15分鐘，在機(jī)械攪拌條件下于一定時間內(nèi)將熱的微乳加入到冷的蒸餾水中，即得藥物混懸液。
(2)制劑的制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 4g，加注射用水至50000ml，攪勻，加入氯化鈉調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入甘露醇，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參粉針制劑500瓶。
實施例3(1)取復(fù)方苦參有效部位30g、卵磷脂80g、單硬脂酸甘油酯90g，加熱至80±5℃，在攪拌條件下加入相同溫度甘油2g和泊洛沙姆5g的水溶液，制成粗乳，在80±5℃條件下用高壓乳勻機(jī)載50MPa壓力下乳勻5次，迅速冷卻形成主藥混懸液。
(2)制劑的制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 4g，加注射用水至50000ml，攪勻，加入氯化鈉調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入甘露醇，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參粉針制劑500瓶。
實施例4(1)取復(fù)方苦參有效部位50g、卵磷脂80g、三肉豆蔻酸甘油酯120g，加熱至80±5℃，在攪拌條件下加入相同溫度甘油3g和泊洛沙姆5g的水溶液，制成粗乳，在80±5℃條件下用高壓乳勻機(jī)載50MPa壓力下乳勻5次，迅速冷卻形成主藥混懸液。
(2)制劑的制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 3g，加注射用水至50000ml，攪勻，加入葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入乳糖，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參粉針制劑500瓶。
實施例5(1)取復(fù)方苦參有效部位40g、Pluronic F68 75g、硬脂酸75g，加熱至80±5℃，在攪拌條件下加入相同溫度甘油3g和泊洛沙姆6g的水溶液，制成粗乳，在80±5℃條件下用高壓乳勻機(jī)載50MPa壓力下乳勻5次，迅速冷卻形成主藥混懸液。
(2)制劑的制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 4g，加注射用水至50000ml，攪勻，加入氯化鈉調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入葡萄糖，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參粉針制劑500瓶。
實施例6(1)取卵磷脂80g，吐溫80 2g，在高速攪拌條件加入70±5℃的蒸餾水中，待完全熔融作為水相，再稱取三窬酸甘油酯80g加入復(fù)方苦參有效部位30g，加熱熔融作為油相，將油相緩慢加入水相中，持續(xù)攪拌1h后超聲分散室穩(wěn)，頻率45-50Hz，超聲5-8分鐘，即得。
(2)制劑的制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 4g，加注射用水至50000ml，攪勻，加入葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入右旋糖酐，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參粉針制劑500瓶。
實施例7(1)取復(fù)方苦參有效部位20g，硬脂酸90g和丙酮200ml加入容器中，超聲使充分溶解，加入處方量的卵磷脂80g，微熱使溶成有機(jī)相，另取泊洛沙姆20g溶于250ml水中，構(gòu)成水相，將有機(jī)相在(1000r/min)攪拌下注入75±2℃水相中，繼續(xù)加熱攪拌4h，使有機(jī)溶媒完全蒸發(fā)并使體系濃縮到約500ml，將所得的半透明體系攪拌下(1000r/min)快速溶解于0-2℃的100ml水相，繼續(xù)攪拌2h，即得。
(2)制劑的制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 4g，加注射用水至50000ml，攪勻，加入葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入葡聚糖，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參粉針制劑500瓶。
實施例8(1)將復(fù)方苦參有效部位25g溶于聚丙交酯-乙交酯120g，同1000ml無水乙醇混合，搖勻，得透明溶液；水相為0.5％非離子型表面活性劑Pluronic F68的水溶液3000ml(pH值約6)，兩相均為20℃，將油相通過硅膠管或細(xì)針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發(fā)至原體積的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)過濾，即得。
(2)制劑的制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 3g，加注射用水至50000ml，攪勻，加入氯化鈉調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入葡萄糖和乳糖，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參粉針制劑500瓶。
實施例9(1)將復(fù)方苦參有效部位30g溶于聚氰基丙烯酸烷酯140g、同1000ml無水乙醇混合，搖勻，得透明溶液；水相為0.5％非離子型表面活性劑Pluronic F68的水溶液3000ml(pH值約6)，兩相均為20℃，將油相通過硅膠管或細(xì)針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發(fā)至原體積的1/5左右，用玻砂漏斗(9-15μm)過濾，即得。
(2)制劑的制備水針制劑的制備取上述混懸液，加PVP 2g，加注射用水至1000ml，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP 3g，加注射用水至50000ml，攪勻，加入氯化鈉或葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入乳糖和葡聚糖，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明復(fù)方苦參粉針制劑500瓶。
權(quán)利要求
1.一種復(fù)方苦參納米注射制劑，其特征在于它是將苦參、白土苓提取得到的復(fù)方苦參有效部位配以載體制成的納米級的注射制劑，其中復(fù)方苦參有效部位2-5重量份、載體10-20重量份。其特征還在于它具有靶向作用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的一種復(fù)方苦參納米注射制劑，其特征在于所述的納米級為20-70nm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的復(fù)方苦參納米注射制劑，其制備方法為(1)主藥混懸液的制備方法一、取處方量的復(fù)方苦參有效部位、乳化劑、脂質(zhì)，混勻，加熱熔融，將聚山梨醇-20或60加入其中，與70℃的蒸餾水混合，攪拌制備成微乳，將65℃的微乳倒入可保溫的注射器中保溫15分鐘，在機(jī)械攪拌條件下于一定時間內(nèi)將熱的微乳加入到冷的蒸餾水中，即得藥物混懸液。方法二、取處方量的復(fù)方苦參有效部位、乳化劑、脂質(zhì)，加熱至80±5℃，在攪拌條件下加入適量相同溫度甘油和泊洛沙姆的水溶液，制成粗乳，在80±5℃條件下用高壓乳勻機(jī)載40MPa壓力下乳勻5次，迅速冷卻至室溫形成主藥混懸液。方法三、按處方稱取乳化劑，加少量吐溫80，在高速攪拌條件加入70±5℃的蒸餾水中，待完全熔融作為水相，再稱取脂質(zhì)加入處方量復(fù)方苦參有效部位，加熱熔融作為油相，將油相緩慢加入水相中，持續(xù)攪拌1小時后超聲分散室穩(wěn)，頻率45-50Hz，超聲5-8分鐘，迅速冷卻至室溫形成主藥混懸液。方法四、取復(fù)方苦參有效部位，脂質(zhì)和丙酮適量加入容器中，超聲使充分溶解加入處方量的乳化劑，微熱使溶成有機(jī)相，另取乳化劑溶于適量水中，構(gòu)成水相，將有機(jī)相在1000r/min攪拌下注入75±2℃水相中，繼續(xù)加熱攪拌4h，使有機(jī)溶媒完全蒸發(fā)并使體系濃縮，將所得的半透明體系在1000r/min攪拌下快速溶解于0-2℃的水相中，繼續(xù)攪拌2小時，即得主藥混懸液。(2)制劑的制備水針制劑的制備.取上述混懸液，加PVP適量，加注射用水至全量，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP適量，加注射用水至全量，攪勻，加入氯化鈉或葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入賦形劑，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明粉針制劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的復(fù)方苦參納米注射制劑，其制備方法為(1)主藥混懸液的制備將復(fù)方苦參有效部位溶于聚氰基丙烯酸烷酯、聚乳酸、聚丙交酯-乙交酯、殼聚糖、明膠中的一種或幾種，同無水乙醇混合，搖勻，得透明溶液；水相為pH值約6的0.5％非離子型表面活性劑Pluronic F68的水溶液，兩相均為20℃，將油相通過硅膠管或細(xì)針頭射入電磁攪拌的水相中，立即形成納米囊，將溶液真空蒸發(fā)至原體積的1/5左右，用9-15μm玻砂漏斗過濾，即得。(2)制劑的制備水針制劑的制備.取上述混懸液，加PVP適量，加注射用水至全量，攪勻，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明納米水針制劑；輸液制劑的制備取上述混懸液，加PVP適量，加注射用水至全量，攪勻，加入氯化鈉或葡萄糖調(diào)等滲，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，滅菌，制備成本發(fā)明納米輸液制劑；粉針制劑的制備取上述混懸液，加入賦形劑，加注射用水調(diào)整濃度，調(diào)pH值為6.0-7.0，用0.22μm微孔濾膜過濾，冷凍干燥，制備成本發(fā)明納米粉針制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種復(fù)方苦參納米注射制劑及其制備方法，將復(fù)方苦參有效部位與適宜量的載體與其它輔料采用本發(fā)明工藝方法制成納米載體，并制備成水針劑、粉針劑和輸液劑，本發(fā)明制劑穩(wěn)定性好，具有靶向作用，藥理實驗表明本發(fā)明納米注射制劑安全性好，且具有更好的療效。
文檔編號A61K9/10GK1883545SQ20051007749
公開日2006年12月27日 申請日期2005年6月24日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月24日
發(fā)明者張晴龍 申請人:張晴龍