專利名稱：一類新型萬古霉素和去甲萬古霉素的衍生物,制備方法和用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一類新型萬古霉素和去甲萬古霉素的衍生物，制備方法及其在制備抗感染，尤其嚴重感染的藥物中的用途。
背景技術：
糖肽抗生素(二丙庚肽)對幾乎所有G+性菌具有活性，在臨床上用于嚴重的G+性菌感染的治療，代表著對付這類難治性疾病的最后防線，見Glycopeptide Antibiotics，edited by R.Nagarajan，MarcelDekker，Inc.New York(1994))。隨著80年萬古霉素耐藥性腸球菌(VRE)的出現(xiàn)，糖肽耐藥性腸球菌不斷增多，近期甚至出現(xiàn)了糖肽耐藥基因從腸球菌向其它菌轉移的現(xiàn)象，如金黃色葡萄球菌對β-內酰胺類抗生素及萬古霉素耐藥株的增加；腸球菌對β-內酰胺類抗生素、氨基糖甙類抗生素及萬古霉素耐藥株的增加等等，由于尚缺乏治有效治療糖肽耐藥菌感染的藥物，糖肽耐藥性已成為威脅人類生存和健康的一大難題，見Hospital Infection Control Practices AdvisoryCommittee，Infection Control Hopital Epidemiology，1995，17，364-369；A.P.Johnson et al.，Clinical MicrobiologyRev.，1990，3，280-291；G.M.Eliopoulos，European J.ClinicalMicrobiol.，Infection Disease，1993，12，409-412；and P.Courvalin，Antimicrob.Agents Chemother，1990，34，2291-2296)。
從已有的研究發(fā)出，腸球菌的糖肽耐藥表現(xiàn)型有5種，即VanA，VanB，VanC，VanD和VanE型。為了更有效的控制耐藥菌，近年來很重視糖肽類新藥的開發(fā)。已經(jīng)對許多糖肽抗生素衍生物進行了研究，見美國專利，專利號4,639,433、4,643,987、4,497,802、4,698,327、5,591,714、5,840,684、5,843,889。其它衍生物在EP 0 802 199；EP 0 801 075；EP 0 667 353；WO 97/28812；WO 97/38702；WO 98/52589；WO 98/52592；J.Amer.Chem.Soc.，1996，118，13107-13108；J.Amer.Chem.Soc.，1997，119，12041-12047；J.Amer.Chem.Soc.，1994，116，4573-4590中已經(jīng)公開。由Eli Lilly company開發(fā)的Oritavancin，已經(jīng)進入了III期臨床階段。盡管如此，仍然需要開發(fā)抗菌譜廣，抗菌活性更高，對人體毒副作用更低的糖肽衍生物。

發(fā)明內容
本發(fā)明的概述發(fā)明人對萬古霉素和去甲萬古霉素進行了結構改造，得到了一系列的衍生物，經(jīng)過初步MIC試驗，證實對耐藥葡萄球菌和耐藥腸球菌的作用是去甲萬古霉素(萬古霉素)的數(shù)倍。
因此，本發(fā)明的一個目的是提供通式(I)的一系列萬古霉素和去甲萬古霉素的衍生物及其可藥用鹽、溶劑化物、立體異構體或前藥 其中R1是H或-CH2-R5，其中R5是C1-C20飽和或不飽和的烴性質的脂族基團，例如C1-C20烷基(alkyl)，C2-C20鏈烯基(alkenyl)，或是C3-C20飽和或不飽和環(huán)脂族基團，例如C3-C20環(huán)烷基或C3-C20環(huán)烯基，或是C5-C20雜環(huán)基團(雜環(huán)含有選自N、O或S中的一個或多個雜原子)，或是C6-C30芳基，烷芳基或芳烷基(aryl，alkaryl，aralkyl group)，該芳基、烷芳基或芳烷基可以含有一個或多個芳環(huán)或稠環(huán)，
上述所有基團是未取代的，或被例如鹵素、芳基，OH，氨基等取代，其碳鏈任選可以插入選自O、N和S中的一個或多個雜原子(heteroatom)；R2是OH，或-NH-R8，其中其中R8是烷基，鏈烯基，環(huán)烷基，環(huán)烯基，芳烷基，烷芳基和雜環(huán)基，這些基團可以是取代或未取代的，其碳鏈任選可以插入N、O或S中的一個或多個；R3是-H或-CH2-NH-R7，其中R7是烷基，鏈烯基，環(huán)烷基，環(huán)烯基，芳烷基，烷芳基和雜環(huán)基，這些基團可以是取代或未取代的，其碳鏈任選可以插入N、O或S中的一個或多個；R4是氫或甲基。
優(yōu)選的是，R1是-CH2-4-(4-Cl-Ph)-Ph，-CH2-4-(Ph-O)-Ph，-CH2-4-Ph-Ph，-CH2CH2CH2-Ph，-CH2-4-(Butyl-O)-Ph，-CH2-(CH2)9-CH3，-CH2CH2-NH-(CH2)9-CH3，-CH2CH2-S-(CH2)9-CH3，-CH2CH2-NH-CH2-4-(4-Cl-Ph)-Ph，-H，-CH2-(CH2)9-CH3；R2是OH，-NH(CH2)3N(CH3)2，-N-(D-glucosamine)；R3是-H，-CH2-NH-CH2-4-Ph-Ph，-CH2-NH(CH2)3N(CH3)2；-CH2-N-(N-CH2-D-glucosamine)；和R4是-H或-CH3。
本發(fā)明的第二個目的是提供上述通式化合物的制備方法，包括以下步驟A、將去甲萬古霉素或萬古霉素在三氟乙酸的存在下升溫(例如40-120℃)下反應，獲得葡萄糖殘基被除去的化合物NCPC4850或NCPC4851
其中R4是H或CH3。
本發(fā)明化合物的制備方法可以進一步包括B、NCPC4850或NCPC4851進行氨基的保護獲得下式的化合物 其中Pro是保護基，上式化合物與醛R5CHO反應，獲得以下化合物 再脫保護，獲得下式的化合物
其中R5如以上所定義，Pro是保護基；或/和C、以上步驟A或B的產(chǎn)物 其中R4如以上所定義，R1為H或-CH2-R5，R5如以上所定義，與甲醛和胺R7NH2在堿性條件下反應，獲得下式的化合物
其中R7如以上所定義；或D、以上步驟A或B的產(chǎn)物 其中R1為H或-CH2-R5，R5如以上所定義，與R8NH2反應，形成以下結構式的化合物
其中R8如以上所定義。
本發(fā)明的又一個目的是提供上述化合物在制備抗嚴重的G+菌感染的藥物，尤其是治療或/和輔助治療心內膜炎、腦膜炎、肺炎、敗血癥、急慢性骨髓炎、燒傷感染、皮膚或軟組織化膿性感染的藥物中的用途。
本發(fā)明的再一個目的是提供含有有效量的上述本發(fā)明化合物的藥物組合物，本發(fā)明的藥物組合物還可以含有本領域公知的載體，如賦型劑，稀釋劑，香味劑，甜味劑等。
本發(fā)明的詳細描述我們將去甲萬古霉素(萬古霉素)在三氟乙酸存在的條件下，加熱反應后經(jīng)過一系列后處理，得到了結構單一的化合物，經(jīng)過高分辨質譜、NMR等分析技術確定了該化合物的化學結構，NCPC4850(NCPC4851)。
R＝H，Norvancomycin R＝H，NCPC4850R＝CH3，VancomycinR＝CH3，NCPC4851 Molecular Formula ＝C65H73Cl2N9O24Molecular Formula＝C59H63Cl2N9O19Formula Weight＝1435.227 Formula Weight ＝1273.086Exact Mass Calcd. ＝1433.414557 DaExact Mass Calcd.＝1271.381732 DaExact Mass Obsd. ＝1433.4146 Da Exact Mass Obsd. ＝1271.3617 DaNorvancomycin NCPC4850該化合物可能的生成機理是去甲萬古霉素分子(結構如上面左)中的葡萄糖殘基(glucose moiety)水解脫去，而另外一個糖(萬古糖殘基vancosmine moiety)通過分子內重排(如上面箭頭所示)直接連到去甲萬古霉素多肽骨架上?；衔锏幕瘜W結構已經(jīng)通過對NCPC4850的進一步化學反應得到了證實。
去甲萬古霉素和NCPC4850的13C NMR(500MHz，D2O，ppm)數(shù)據(jù)如下表

表1


去甲萬古霉素和化合物NCPCC4850的高分辨質譜數(shù)據(jù)如下

Molecular Formula＝C65H73Cl2N9O24Molecular Formula＝C59H63Cl2N9O19Formula Weight ＝1435.227Formula Weight ＝1273.086Exact Mass Calcd.＝1433.414557 Da Exact Mass Calcd.＝1271.361732 DaExact Mass Obsd.＝1433.4146 Da Exact Mass Obsd. ＝1271.3617 DaNorvancomycin NCPC4850通過對化合物NCPC4850(NCPC4851也同)進行下列反應(還原胺基化)得到如式(1)的衍生物
Cbz-NCPC4850的合成(氨基的保護)將NCPC4850(128mg，0.10mmol)溶解到5ml 1∶1的1，4-二氧六環(huán)/水中，加入NaHCO3(17mg，0.20mmol)，然后在冰浴并劇烈攪拌的情況下逐滴加入Cbz-Cl(17mg，0.11mmol)。反應液在室溫下攪拌1小時后倒入75ml丙酮沉淀。沉淀物用10ml丙酮分兩次洗滌，真空下干燥。
Cbz-NCPC4850-CH2R的合成(胺基化)將0.10mmol的Cbz-NCPC4850，0.15mmol的醛溶解到5ml的DMF/MeOH(1∶1)。反應液在65℃下攪拌48小時后加入0.20mmol的NaCNBH3，繼續(xù)攪拌24小時，反應液冷卻后倒入75ml丙酮沉淀。沉淀物用10ml丙酮分兩次洗滌，真空下干燥。
NCPC4850-CH2R的合成(還原)將0.10mmol的以上沉淀溶解到7ml的RMF，加入50mg的Pd/C(5％)，在～1atm、室溫下氫化3小時，催化劑過濾除去后將反應液倒入80ml丙酮，沉淀用反相HPLC純化。全程收率30-65％。
其中R-CHO的普通醛，例如甲醛，乙醛，丙烯醛，丙醛，戊醛，己醛，庚醛，苯甲醛，苯乙醛等，即R是烷基，烯基，芳基，芳烷基，烷芳基等。
式(1)的化合物也可通過以下反應步驟得到
Boc-NCPC4850的合成(氨基的保護)將NCPC4850(128mg，0.10mmol)、(Boc)2O(21.8mg，0.11mmol)以及NaHCO3(17mg，0.20mmol)溶解到5ml的1，4-二氧六環(huán)/水(1∶1)中，反應液在室溫下攪拌6小時后倒入75ml丙酮沉淀。沉淀物用10ml丙酮分兩次洗滌，真空下干燥。
Boc-NCPC4850-CH2R的合成(胺基化)將0.10mmol的Boc-NCPC4850，0.15mmol的醛溶解到5ml的DMF/MeOH(1∶1)中。反應液在65℃下攪拌48小時后加入0.20mmol的NaCNBH3，繼續(xù)攪拌24小時，反應液冷卻后倒入75ml丙酮沉淀。沉淀物用10ml丙酮分兩次洗滌，真空下干燥。
NCPC4850-CH2R的合成(還原)0.10mmol的以上沉淀懸浮到10ml氯仿，緩慢滴加2ml TFA。溶液在室溫攪拌20分鐘后倒入50ml乙醚沉淀，沉淀用制備型HPLC純化。全程收率20-60％。
其中R-CHO的普通醛，例如甲醛，乙醛，丙烯醛，丙醛，戊醛，己醛，庚醛，苯甲醛，苯乙醛等，即R是烷基，烯基，芳基，芳烷基，烷芳基等。
以上所述的均為一般醛，也可用氨基取代醛進行還原烷基化，氨基取代醛可用如下方法制備；
將2-氨基乙醛縮二甲醇(1eq.)，以上所述的普通醛RCHO(1.05eq)，和NaCNBH3(1eq)在CH2Cl2中的溶液在室溫下攪拌1-4小時。該反應用TLC檢測。0℃下向反應混合物加入FmocCl(1eq)和DIPEA(2eq)。室溫下繼續(xù)攪拌1-2小時。真空中除去溶劑，并且通過反相HPLC純化殘余物得到氨基取代乙縮醛。向上述氨基取代乙縮醛在丙酮中的溶液內加入6N HCl(1.5eq.)。室溫下將反應攪拌5-16小時。真空中除去溶劑且在高真空下干燥殘余物，得到氨基取代醛的粗產(chǎn)物，不需要進一步純化即可使用。
也可用硫取代醛進行胺基化，硫取代醛的制備如下 將溴乙縮醛(1eq.)(如二甲基2-溴乙縮醛(dimethyl 2-bromoacetaldehyde))和碘化鈉(1eq.)，在DMF中的溶液在室溫下攪拌0.5小時。向該溶液中加入取代硫醇RSH(R是烷基，烯基，芳基，烷芳基，芳烷基等)(1.eq)，然后加入碳酸鉀(1eq)。在25-80℃下將該混合物攪拌4-16小時。隨后反應溶解在乙酸乙酯中，用水洗滌2次且用飽和氯化鈉洗滌1次。有機層用MgSO4干燥且真空中除去溶劑。用反相HPLC純化，得到相應的硫取代乙縮醛。
在硫取代乙縮醛在丙酮中的溶液中加入6N HCl(1.5eq.)。室溫下將反應攪拌5-16小時。真空中出去溶劑且在高真空下干燥殘余物，得到硫取代醛的粗產(chǎn)物，其通常不需要進一步純化即可使用。
通過對式(1)的化合物(NCPC481也同)進行胺甲基化可得到如式(2)的化合物
將0.10mmol的NCPC4850，1.0mmol的胺R7NH2以及0.12mmol的甲醛水溶液溶解到10ml的乙腈/水(1∶1)，用1M的NaOH調pH到9.5～10，反應液在室溫下攪拌6～10小時后，用1M的HCl調pH到4～5，倒入200ml丙酮沉淀。沉淀用反相HPLC純化，收率30-85％。通過對式(2)的羥基與胺的縮合(NCPC4851也同)可得到如式(3)的化合物 將0.10mmol的NCPC4850或其還原烷化衍生物、1.0mmol的胺R8NH2(或胺鹽)溶解到5ml的DMSO，用Et3N調pH到8.5～9，反應液攪拌1小時后加入0.12mmol的PyBOP。反應液在室溫繼續(xù)攪拌3小時。將150ml乙醚加入到反應混合物中得到油狀粘稠物，油狀粘稠物用30ml乙醚分兩次震蕩洗滌后再用15ml丙酮處理便得到白色或淡黃色固體。用反相HPLC純化，收率60-90％。
用本發(fā)明的各種化合物對各種耐藥菌進行了抗菌活性實驗，結果，本發(fā)明的化合物對各種耐藥菌的最小抑菌濃度大大優(yōu)于萬古霉素和去萬古霉素，從而證實本發(fā)明的化合物可有效用于抗嚴重的G+菌感染，尤其用于治療或/和輔助治療心內膜炎、腦膜炎、肺炎、敗血癥、急慢性骨髓炎、燒傷感染、皮膚或軟組織化膿性感染。
本發(fā)明的化合物可以制成非腸道給藥劑型或經(jīng)腸道給藥劑型，如口服或靜脈注射劑型。本發(fā)明的化合物的用量可以參照萬古霉素和去甲萬古霉素的現(xiàn)有劑量，例如成人可以為0.8-2.0g/d，可以分2-3次給藥，兒童用量酌減。本發(fā)明的化合物可以按常規(guī)方法成鹽，例如制成鹽酸鹽。
實施例為了進一步闡明本發(fā)明，下面給出一系列實施例。需要指出的是，這些實施例完全是例證性的。給出這些實施例的目的是為了充分明示本發(fā)明的意義和內容，決不對本發(fā)明造成任何形式的限制。
在以下實施例中，下列縮寫具有以下含義。未定義的縮寫具有其普遍接受的含義，除非另外聲明，所有溫度為攝氏度。
BOC，Boc ＝叔丁氧基羰基Cbz-Cl ＝芐氧酰氯DIPEA＝二異丙基乙胺DMF ＝N，N-二甲基甲酰胺DMSO ＝二甲基亞砜eq. ＝當量Et ＝乙基EtOAc ＝乙酸乙酯Fmoc ＝9-芴基甲氧基羰基HPLC ＝高效液相色譜Me ＝甲基PyBOP＝苯并三唑-1-基氧三(吡咯烷子基)膦六氟磷酸鹽TFA ＝三氟乙酸THF ＝四氫呋喃
TLC，tlc ＝薄層層析在以下的實施例中，去甲萬古霉素鹽酸鹽由華北制藥集團生產(chǎn)，其它試劑和反應物從Aldrich Chemical Co.購買。
在實施例中，通過上述的一些化學過程合成了一系列NCPC4850(NCPC4851)的衍生物(見表2化合物編號1～32)。
另外需要指出，實施例所有反應中通過反相HPLC純化條件用DIKMA 10×50mm(5μm)C18柱及TFA緩沖體系通過制備反相高效液相(HPLC)純化。用時間為零時10％乙腈/0.1％TFA至時間為15分鐘時的80％乙腈/0.1％TFA的10ml/分鐘的線形梯度洗脫。含有產(chǎn)物的流份通過在254nm處紫外掃描檢測。將所需流份冷凍干燥成白色固體。本發(fā)明中所言及的收率均為摩爾收率。
NCPC4850和NCPC4851的衍生物
表2

這些化合物的質譜數(shù)據(jù)如下表所示
表3

實施例實施例1NCPC4850和NCPC4851的化學合成

R＝H，NorvancomycinR＝H，NCPC4850R＝CH3，Vancomycin R＝CH3，NCPC4851
將5.0克去甲萬古霉素鹽酸鹽溶解到20ml三氟乙酸(TFA)，于50℃下攪拌反應2小時。反應液真空濃縮后溶于20ml丙酮，倒入200ml氯仿沉淀。沉淀物用20ml氯仿分兩次洗滌后在真空下干燥。粗品用反相HPLC純化得化合物NCPC4850純品500mg(產(chǎn)率10％)。如果用萬古霉素鹽酸鹽為原料，通過相同的實驗過程，則可得到化合物NCPC4851。
實施例2化合物1的合成 Cbz-NCPC4850的合成將NCPC4850(128mg，0.10mmol)溶解到5ml的1，4-二氧六環(huán)/水(1∶1)中，加入NaHCO3(17mg，0.20mmol)，然后在冰浴并劇烈攪拌的情況下逐滴加入Cbz-Cl(17mg，0.11mmol)。反應液在室溫下攪拌1小時后倒入75ml丙酮沉淀。沉淀無用10ml丙酮分兩次洗滌，真空下干燥。
Cbz-NCPC4850-4-Chlorophenylbenzyl的合成將0.10mmol的Cbz-NCPC4850，0.15mmol的4-氯聯(lián)苯甲醛溶解到5ml的DMF/MeOH(1∶1)。反應液在65℃下攪拌48小時后加入0.20mmol的NaCNBH3，繼續(xù)攪拌24小時，反應液冷卻后倒入75ml丙酮沉淀。沉淀用10ml丙酮分兩次洗滌，真空下干燥。
化合物1的合成將0.10mmol的以上沉淀物溶解到7ml的DMF，加入50mg的Pd/C(5％)，在～1atm、室溫下氫化3小時，催化劑過濾除去后將反應液倒入80ml丙酮沉淀，沉淀物用反相HPLC純化。全程收率50％。
實施例3化合物2的合成 Boc-NCPC4850的合成將NCPC4850(128mg，0.10mmol)、(Boc)2O(21.8mg，0.11mmol)、NaCO3(17mg，0.20mmol)溶解到5ml的1，4-二氧六環(huán)/水(1∶1)中，反應液在室溫下攪拌6小時后倒入75ml丙酮沉淀。沉淀用10ml丙酮分兩次洗滌，真空下干燥。
Boc-NCPC4850-4-phenyoxylbenzyl的合成將0.10mmol的Boc-NCPC4850，0.15mmol的4-苯氧基苯甲醛溶解到5ml的DMF/MeOH(1∶1)。反應液在65℃下攪拌48小時后加入0.20mmol的NaCNBH3，繼續(xù)攪拌24小時，反應液冷卻后倒入75ml丙酮沉淀。沉淀用10ml丙酮分兩次洗滌，真空下干燥。
化合物2的合成將0.10mmol的以上沉淀懸浮到10ml氯仿，緩慢滴加2ml TFA。溶液在室溫攪拌20分鐘后倒入50ml乙醚沉淀，沉淀用反相HPLC純化。全程收率42％。
實施例4化合物3的合成與化合物1的制備相同，只是用4-Ph-Ph-CHO代替4-氯聯(lián)苯甲醛。
實施例5化合物4的合成與化合物1的制備相同，只是用Ph-CH2CH2-CHO代替4-氯聯(lián)苯甲醛。
實施例6化合物5的合成與化合物1的制備相同，只是用4-(Butyl-O)-Ph-CHO代替4-氯聯(lián)苯甲醛。
實施例7化合物6的合成與化合物1的制備相同，只是用CH3-(CH2)9-CHO代替4-氯聯(lián)苯甲醛。
實施例8化合物7的合成與化合物1的制備相同，只是用CH3-(CH2)9-NH-CH2CHO代替4-氯聯(lián)苯甲醛。
實施例9化合物8的合成與化合物1的制備相同，只是用CH3-(CH2)9-S-CH2CHO代替4-氯聯(lián)苯甲醛。
實施例10化合物9的合成與化合物1的制備相同，只是用4-(4-Cl-Ph)-Ph-CH2-NH-CH2CHO代替4-氯聯(lián)苯甲醛。
實施例11
化合物10的合成將0.1mmol的化合物7、1.0mmol的H2N-(CH2)3N(CH3)2溶解到5ml的DMSO，用DIPEA調pH到8.5～9，反應液攪拌1小時后加入0.12mmol的PyBOP。反應液在室溫繼續(xù)攪拌3小時。將150ml乙醚加入到反應混合物中得到油狀粘稠物，油狀粘稠物用30ml乙醚分兩次震蕩洗滌后再用15ml丙酮處理便得到白色固體。用反相HPLC純化。收率65％。
實施例12化合物11的合成同實施例11，只是用H2N-(D-glucosamine)代替H2N-(CH2)3N(CH3)2。
實施例13化合物12的合成 將0.1mmol的化合物1、1.0mmol的H2N-(CH2)3N(CH3)2溶解到5ml的DMSO，用DIPEA調pH到8.5～9，反應液攪拌1小時后加入0.12mmol的PyBOP。反應液在室溫繼續(xù)攪拌3小時。將150ml乙醚加入到反應混合物中得到油狀粘稠物，油狀粘稠物用30ml乙醚分兩次震蕩洗滌后再用15ml丙酮處理便得到白色固體。用反相HPLC純化。收率70％。
實施例14化合物13的合成同實施例13，只是用H2N-(D-glucosamine)代替H2N-(CH2)3N(CH3)2。
實施例15
化合物14的合成 將0.10mmol的NCPC4850，1.0mmol的4-苯基芐胺以及0.12mmol的甲醛水溶液溶解到10ml 1∶1的乙腈/水，用1M的NaOH調pH到9.5～10，反應液在室溫下攪拌8小時，用1M的HCl調pH到4～5后倒入120ml丙酮沉淀。沉淀物用反相HPLC純化。收率65％。
實施例16化合物15的合成 將0.10mmol的化合物7，1.0mmol的H2N-(CH2)3N(CH3)2以及0.12mmol的甲醛水溶液溶解到10ml 1∶1的乙腈/水，用1M的NaOH調pH到9.5～10，反應液在室溫下攪拌8小時，用1M的HCl調pH到4～5后倒入120ml丙酮沉淀。沉淀物用反相HPLC純化。收率50％。
實施例17化合物16的合成與實施例16類似，只是用(N-CH3-D-glucosamine)NH2代替H2N-(CH2)3N(CH3)2。
實施例18化合物17的合成 將5.0克萬古霉素鹽酸鹽溶解到20ml TFA，于50℃下攪拌反應2小時。反應液真空濃縮后溶于20ml丙酮，倒入200ml氯仿沉淀。沉淀用20ml氯仿分兩次洗滌后真空干燥。粗品用反相HPLC純化得化合物NCPC4851純品350mg。
化合物17的合成將0.10mmol的NCPC4851，0.15mmol的4-氯聯(lián)苯甲醛溶解到5ml的DMF/MeOH(1∶1)。反應液在65℃下攪拌48小時后加入0.20mmol的NaCNBH3，再攪拌24小時，反應液冷卻后倒入75ml丙酮沉淀。沉淀用10ml丙酮分兩次洗滌，真空下干燥。粗品用反相HPLC純化。
實施例19-33化合物18-31的合成化合物18-31的合成分別與化合物2-16的合成相同，只是用NCPC4851代替NCPC4850。
實施例34將2ml注射用水和0.6g的本發(fā)明化合物按常規(guī)方法制成注射劑。
抗菌活性的研究抗菌活性的測定最小抑菌濃度(MIC)的測定由微生物12、13、14、15河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院提供，微生物1、2、3、4、7、8、9、10、11由河北省人民醫(yī)院提供，微生物5、6、16、17由美國CHIRON公司提供，微生物18、19由國家生物制品檢定所提供。基于對替考拉寧的敏感性，萬古霉素耐藥腸球菌的表型為Van A或Van B。
在NCCLS準則下在微量稀釋液體培養(yǎng)法(microdilution brothprocedure)中測定最小抑菌濃度(MIC)。通常，將化合物連續(xù)稀釋在96孔微量滴定平板中的Mueller-Hinton培養(yǎng)液內。基于在600nm的吸光度，稀釋過夜培養(yǎng)的菌株，各孔中的最終濃度是5×105cfu/mL。將平板重新置于35℃的培養(yǎng)箱。次日(或在腸球菌菌株的情況中是24小時后)，通過目測的平板測定MIC。在初始篩選中常規(guī)試驗的菌株包括甲氧苯青霉素敏感的金黃色葡萄球菌(MSSA)、耐甲氧苯青霉素的金黃色葡萄球菌(MRSA)、甲氧苯青霉素敏感的表皮葡萄球菌(MSSE)、耐甲氧苯青霉素的表皮葡萄球菌(MRSE)、萬古霉素敏感的屎腸球菌(VSE Fm)、萬古霉素敏感的糞腸球菌(VSE Fs)、耐萬古霉素也耐提考拉寧的屎腸球菌(VRE Fm Van A)、耐萬古霉素但對提考拉寧敏感的屎腸球菌(VRE Fm Van B)、耐萬古霉素也耐提考拉寧的糞腸球菌(VRE Fs Van A)、耐萬古霉素但對的考拉寧敏感的糞腸球菌(VREFs Van B)。
化合物的體外活性MIC(μg/ml)

權利要求
1.通式(I)的萬古霉素或去甲萬古霉素的衍生物或其可藥用鹽、溶劑化物、立體異構體或前藥 其中R1是H或-CH2-R5，其中R5是C1-C20飽和或不飽和的烴性質的脂族基團，例如C1-C20烷基(alkyl)，C2-C20鏈烯基(alkenyl)，或是C3-C20飽和或不飽和環(huán)脂族基團(cycloaliphatic group)，例如C3-C20環(huán)烷基(cycloalkyl)或C3-C20環(huán)烯基(cycloalkenyl)，或是C5-C20雜環(huán)基團(heterocycle)(雜環(huán)含有選自N、O或S中的一個或多個雜原子)，或是C6-C30芳基，烷芳基或芳烷基(aryl，alkaryl，aralkylgroup)，該芳基、烷芳基或芳烷基可以含有一個或多個芳環(huán)或稠環(huán)，上述所有基團是未取代的，或被例如鹵素，芳基，OH，氨基等取代，其碳鏈任選可以插入選自O、N和S中的一個或多個雜原子(thechains of all group described above may be interupted by oneor more hetero atom)；R2是OH，或-NH-R8，其中其中R8是烷基，鏈烯基，環(huán)烷基，環(huán)烯基，芳烷基，烷芳基和雜環(huán)基，這些基團可以是取代或未取代的，其碳鏈任選可以插入N、O或S中的一個或多個；R3是-H或-CN2-NH-R7，其中R7是烷基，鏈烯基，環(huán)烷基，環(huán)烯基，芳烷基，烷芳基和雜環(huán)基，這些基團可以是取代或未取代的，其碳鏈任選可以插入N、O或S中的一個或多個；R4是氫或甲基。
2.根據(jù)權利要求1的萬古霉素或去甲萬古霉素的衍生物或其可藥用鹽、溶劑化物、立體異構體或前藥，其中R1是-CH2-4-(4-Cl-Ph)-Ph，-CH2-4-(Ph-O)-Ph，-CH2-4-Ph-Ph，-CH2CH2CH2-Ph，-CH2-4-(Butyl-O)-Ph，-CH2-(CH2)9-CH3，-CH2CH2-NH-(CH2)9-CH3，-CH2CH2-S-(CH2)9-CH3，-CH2CH2-NH-CH2-4-(4-Cl-Ph)-Ph，-H，-CH2-(CH2)9-CH3；R2是OH，-NH(CH2)3N(CH3)2，-N-(D-glucosamine)；R3是-H，-CH2-NH-CH2-4-Ph-Ph，-CH2-NH(CH2)3N(CH3)2；-CH2-N-(N-CH2-D-glucosamine)；和R4是-H或-CH3。
3.權利要求1的萬古霉素或去甲萬古霉素的衍生物的制備方法，包括以下步驟A、將去甲萬古霉素或萬古霉素 在三氟乙酸的存在下在升溫(例如40-120℃)下反應，獲得下式的葡萄糖殘基被除去的化合物NCPC4850(R4是H)或NCPC4851(R4是CH3) 其中R4是H或CH3。
4.根據(jù)權利要求3的制備方法，進一步包括B、NCPC4850或NCPC4851進行氨基的保護獲得下式的化合物 其中Pro是保護基，上式化合物與醛R5CHO反應，獲得以下化合物 再脫保護，獲得下式的化合物 其中R5如權利要求1所定義，Pro是保護基；或/和C、以上步驟A或B的產(chǎn)物 其中R4如以上所定義，R1為H或-CH2-R5，R5如權利要求1所定義，與甲醛和胺R7NH2在堿性條件下反應，獲得下式的化合物 其中R7如權利要求1所定義；或D、以上步驟A或B的產(chǎn)物 其中R1為H或-CH2-R5，R5如權利要求1所定義，與R8NH2反應，形成以下結構式的化合物 其中R8如以上所定義。
5.權利要求1或2的萬古霉素或去甲萬古霉素的衍生物或其可藥用鹽、溶劑化物、立體異構體或前藥在制備抗嚴重的G+菌感染的藥物中的用途。
6.權利要求1或2的萬古霉素或去甲萬古霉素的衍生物或其可藥用鹽、溶劑化物、立體異構體或前藥在制備治療或/和輔助治療心內膜炎、腦膜炎、肺炎、敗血癥、急慢性骨髓炎、燒傷感染、皮膚或軟組織化膿性感染的藥物中的用途。
7.含有藥學有效量的權利要求1或2的萬古霉素或去甲萬古霉素的衍生物或其可藥用鹽、溶劑化物、立體異構體或前藥的藥物組合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及通式(I)的萬古霉素或去甲萬古霉素的衍生物或其可藥用鹽、溶劑化物、立體異構體或前藥，其中R
文檔編號A61P19/00GK1827638SQ200510052470
公開日2006年9月6日 申請日期2005年2月28日 優(yōu)先權日2005年2月28日
發(fā)明者D·楚, Z·-J·倪, J·J·-X·王, Y·雷, Y·白 申請人:華北制藥集團有限責任公司, 凱榮公司